GB5009.124-2016食品安全国家标准食品中氨基酸的测定国家标准规范.pdf
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1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 6食品安全国家标准食品中氨基酸的测定2 0 1 6-1 2-2 3发布2 0 1 7-0 6-2 3实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局发 布G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 6 前 言 本标准代替G B/T5 0 0 9.1 2 42 0 0 3 食品中氨基酸的测定。本标准与G B/T5 0 0 9.1 2 42 0 0 3相比,主要变化如下:标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定”;扩大了适用范围;增加了方法的检出限和定量限;修改
2、了结果计算的公式。G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 61 食品安全国家标准食品中氨基酸的测定1 范围本标准规定了用氨基酸分析仪(茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪)测定食品中氨基酸的方法。本标准适用于食品中酸水解氨基酸的测定,包括天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸和精氨酸共1 6种氨基酸。2 原理食品中的蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸,经离子交换柱分离后,与茚三酮溶液产生颜色反应,再通过可见光分光光度检测器测定氨基酸含量。3 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6 6 8
3、2中规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 盐酸(HC l):浓度3 6%,优级纯。3.1.2 苯酚(C6H5OH)。3.1.3 氮气:纯度9 9.9%。3.1.4 柠檬酸钠(N a3C6H5O72 H2O):优级纯。3.1.5 氢氧化钠(N a OH):优级纯。3.2 试剂配制3.2.1 盐酸溶液(6m o l/L):取5 0 0m L盐酸加水稀释至10 0 0m L,混匀。3.2.2 冷冻剂:市售食盐与冰块按质量13混合。3.2.3 氢氧化钠溶液(5 0 0g/L):称取5 0 g氢氧化钠,溶于5 0m L水中,冷却至室温后,用水稀释至1 0 0m L,混匀。3.2.4 柠檬酸钠缓冲溶液c(
4、N a+)=0.2m o l/L:称取1 9.6g柠檬酸钠加入5 0 0m L水溶解,加入1 6.5m L盐酸,用水稀释至10 0 0m L,混匀,用6m o l/L盐酸溶液或5 0 0g/L氢氧化钠溶液调节p H至2.2。3.2.5 不同p H和离子强度的洗脱用缓冲溶液:参照仪器说明书配制或购买。3.2.6 茚三酮溶液:参照仪器说明书配制或购买。3.3 标准品3.3.1 混合氨基酸标准溶液:经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液。G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 62 3.3.2 1 6种单个氨基酸标准品:固体,纯度9 8%。3.4 标准溶液配制3.4.1 混合氨基酸标准储备液(1
5、m o l/m L):分别准确称取单个氨基酸标准品(精确至0.0 0 00 1g)于同一5 0m L烧杯中,用8.3m L 6m o l/L盐酸溶液溶解,精确转移至2 5 0m L容量瓶中,用水稀释定容至刻度,混匀(各氨基酸标准品称量质量参考值见表1)。3.4.2 混合氨基酸标准工作液(1 0 0n m o l/m L):准确吸取混合氨基酸标准储备液1.0m L于1 0m L容量瓶中,加p H 2.2柠檬酸钠缓冲溶液定容至刻度,混匀,为标准上机液。4 仪器和设备4.1 实验室用组织粉碎机或研磨机。4.2 匀浆机。4.3 分析天平:感量分别为0.0 0 01g和0.0 0 00 1g。4.4 水
6、解管:耐压螺盖玻璃试管或安瓿瓶,体积为2 0m L3 0m L。4.5 真空泵:排气量4 0L/m i n。4.6 酒精喷灯。4.7 电热鼓风恒温箱或水解炉。4.8 试管浓缩仪或平行蒸发仪(附带配套1 5m L2 5m L试管)。4.9 氨基酸分析仪:茚三酮柱后衍生离子交换色谱仪。5 分析步骤5.1 试样制备固体或半固体试样使用组织粉碎机或研磨机粉碎,液体试样用匀浆机打成匀浆密封冷冻保存,分析用时将其解冻后使用。5.2 试样称量均匀性好的样品,如奶粉等,准确称取一定量试样(精确至0.0 0 01g),使试样中蛋白质含量在1 0m g 2 0m g范围内。对于蛋白质含量未知的样品,可先测定样品中
7、蛋白质含量。将称量好的样品置于水解管中。很难获得高均匀性的试样,如鲜肉等,为减少误差可适当增大称样量,测定前再做稀释。对于蛋白质含量低的样品,如蔬菜、水果、饮料和淀粉类食品等,固体或半固体试样称样量不大于2g,液体试样称样量不大于5g。5.3 试样水解根据试样的蛋白质含量,在水解管内加1 0m L1 5m L 6m o l/L盐酸溶液。对于含水量高、蛋白质含量低的试样,如饮料、水果、蔬菜等,可先加入约相同体积的盐酸混匀后,再用6m o l/L盐酸溶液补充至大约1 0m L。继续向水解管内加入苯酚3滴4滴。将水解管放入冷冻剂中,冷冻3m i n 5m i n,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0
8、P a),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖。将已封口的水解管放在1 1 01 的电热鼓风恒温箱或水解炉内,水解2 2h后,取出,冷却至室温。G B5 0 0 9.1 2 42 0 1 63 打开水解管,将水解液过滤至5 0m L容量瓶内,用少量水多次冲洗水解管,水洗液移入同一5 0m L容量瓶内,最后用水定容至刻度,振荡混匀。准确吸取1.0m L滤液移入到1 5m L或2 5m L试管内,用试管浓缩仪或平行蒸发仪在4 0 5 0加热环境下减压干燥,干燥后残留物用1m L2m L水溶解,再减压干燥,最后蒸干。用1.0m L2.0m Lp H 2.2柠檬酸钠
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