六α淀粉酶酶学性质测定II改.pptx
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1、六、六、-淀粉酶酶学性质测定淀粉酶酶学性质测定IIII(米氏常数(米氏常数KmKm值的测定值的测定)1.1.目的意义目的意义 由由Leonor MichaelisLeonor Michaelis和和Maud MentenMaud Menten在在19131913年提出年提出的米氏方程(的米氏方程(Michaelis-Menten EquationMichaelis-Menten Equation)是酶学中表)是酶学中表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的、表示一个酶促示整个反应中底物浓度和反应速度关系的、表示一个酶促反应的起始速度反应的起始速度V V与底物浓度与底物浓度SS关系的方程。关系的方
2、程。米氏方程形式如下所示:米氏方程形式如下所示:其中,VmaxVmax表示酶被底物饱和时的反应速度,KmKm值称为米氏常数,是酶促反应速度V为最大酶促反应速度值一半时的底物浓度,即即V V=1/2=1/2V Vmaxmax时时,K Km=Sm=S。在酶促反应中,底物在低浓度情况下,反应相对于底物是一级反应(一级反应(first order reactionfirst order reaction);而当底物浓度处于中间范围时,反应(相对于底物)是混合级反应(混合级反应(mixed mixed order reactionorder reaction);当底物浓度增加时,反应由一级反应向零级反应
3、(零级反应(zero order reactionzero order reaction)过渡;当底物浓度S逐渐增大时,速度V相对于S的曲线为一双曲线。下图为米氏方程的模拟作图:米氏常数的意义米氏常数的意义由米氏方程可知,当反应速度等于最大反应速度一半时由米氏方程可知,当反应速度等于最大反应速度一半时,即即V V=1/2=1/2V Vmaxmax时时,K Km=S m=S。上式表示上式表示,米氏常数是反应速度为最大值的一半时的底物米氏常数是反应速度为最大值的一半时的底物浓度。浓度。因此因此,米氏常数的单位为米氏常数的单位为mol/Lmol/L(在本实验中单位为在本实验中单位为g/L)g/L)。
4、不同的酶具有不同不同的酶具有不同KmKm值,它是酶的一个重要的特征物理常值,它是酶的一个重要的特征物理常数。数。KmKm值只是在固定的底物,一定的温度和值只是在固定的底物,一定的温度和pHpH条件下,一定的条件下,一定的缓冲体系中测定的,不同条件下具有不同的缓冲体系中测定的,不同条件下具有不同的KmKm值。值。KmKm值表示酶与底物之间的亲和程度:值表示酶与底物之间的亲和程度:KmKm值大表示亲和程度值大表示亲和程度小,酶的催化活性低小,酶的催化活性低;Km;Km值小表示亲和程度大值小表示亲和程度大,酶的催化酶的催化活性高。活性高。通过通过KmKm值的测定,可鉴定酶的各种底物,值的测定,可鉴定
5、酶的各种底物,KmKm值最小者为酶值最小者为酶最佳底物,即天然底物。最佳底物,即天然底物。2.2.实验原理实验原理底物浓度对酶促反应的影响底物浓度对酶促反应的影响在酶浓度、pH、温度等条件不变的情况下研究底物浓度和反应速度的关系。如右图所示:在低底物浓度时,反应速度与底物浓度成正比,表现为一级反应特征。当底物浓度达到一定值,几乎所有的酶都与底物结合后,反应速度达到最大值(Vmax),此时再增加底物浓度,反应速度不再增加,表现为零级反应。酶促反应中的米氏常数的测定和酶促反应中的米氏常数的测定和VmaxVmax的测定的测定有多种方法。比如固定反应中的酶浓度,然后测试有多种方法。比如固定反应中的酶浓
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