THP-1-细胞培养.doc

生物实验：THP-1 细胞培养
        THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。其外表抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。

工具/原料
· 培养基：RPMI-1640 (Invitrogen #11875-093)
· 胎牛血清：Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO #10099-141)
· 二甲亚砜：DMSO (SIGMA D2650)
· 双抗P/S (Penicillin/Streptomycin)〔GIBCO #15140-122〕
方法/步骤
1. 1
细胞培养：THP-1细胞培养于含有10%FBS+1%P/S的RPMI-1640培养基中，培养环境为37℃，5%CO2。可以每隔3-4天加一些新鲜的培养基，或直接传代。
2. 2
细胞传代：当细胞密度到达约8x10^5cells/ml左右时，即可进行传代。由于是悬浮细胞，可直接将细胞吸出，离心之后传代。传代最少浓度不应少于1x10^5 cells/ml。
3. 3
细胞冻存：取差不多1x10^7个细胞，用1ml含有10%DMSO的FBS重悬，转入冻存管，于-80℃冰箱过夜。第二天移入液氮中长期保存。
END
考前须知
· 细胞养不好，可能的原因有，THP-1细胞特别依赖细胞浓度，ATCC上10 5到106每ML，是一个很高的密度，细胞少了就不太容易养好。
· 细胞株的来源很重要，如直接来源于ATCC〔American Type Culture Collection 美国模式菌种保藏中心〕生命力要强于国内细胞库的。
· 注意细胞的密度一定要高，介于5×105—— 106/ML之间，增值的快。细胞数量太少，不适合THP-1生长，一般状态不好的THP-1在培养了3天后数量仍然不多，继续培养一天或者两天，培养基 严重泛黄，细胞数会增加。这一点不同于同是单核细胞系的U937细胞。
· THP-1细胞适合在细胞Ph环境偏酸性环境生长，对培养基变化非常敏感，所以 尽量使用相同Ph的1640。
· 传代后切忌常移出培养箱观察，否那么会影响细胞生长，状态变差，一般首先表现为细胞内颗粒变多。一般THP-1 生长相当快，对于状态已经不好的情况，建议传代后3～4天再观察，一般4天时间培养基已明显泛黄，细胞数量巨增;1)THP-1细胞喜欢酸性条件，你不要老是换培养基。越酸的条件，细胞密度越大，细胞就长得越好;2〕不要频繁换液，一般2-3次换液离心一次〔只是补充培养基〕3〕 使用1640〔ATCC推荐〕，注意加碳酸氢钠2.5g就可以了，宁酸勿碱; 4〕注意冻存的时候密度大些，推荐用血清冻存。
· 复苏比拟慢，建议开始用小瓶，不要用一次性的。

内容总结

〔1〕生物实验：THP-1 细胞培养
        THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者
〔2〕其外表抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2
〔3〕3
细胞冻存：取差不多1x10^7个细胞，用1ml含有10%DMSO的FBS重悬，转入冻存管，于-80℃冰箱过夜
〔4〕传代后切忌常移出培养箱观察，否那么会影响细胞生长，状态变差，一般首先表现为细胞内颗粒变多