学术讨论—乙肝两对半定性测定.ppt
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1、乙肝两对半测定(cdng)酶联免疫法实习生:廖於波指导老师:李海龙(hi ln)第一页,共三十二页。HBV是乙型病毒性肝炎的病原体。HBV感染呈世界性流行,但不同地区感染的流行程度差异很大。据WHO报道,全球约20亿人曾感染过HBV,其中3.5亿人为慢性感染者,每年约有100万人死于HBV感染所致(su zh)的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。我国属高流行地区一般地区HBsAg阳性率为7.18%。第二页,共三十二页。乙肝病毒血清(xuqng)标志物HBsAgn第一个出现,感染后1-2周即可阳性n阳性表示存在HBV感染HBsAbn出现在HBsAg消失后n保护性抗体n疫苗免疫成功(chnggng)
2、的标志 第三页,共三十二页。乙肝病毒血清(xuqng)标志物HBeAgn病毒(bngd)复制标志n传染性强HBeAb n传染性降低n长期存在是DNA与肝细胞整合的结果第四页,共三十二页。乙肝病毒血清(xuqng)标志物HBcAg nHBV复制的标志n血清中难以检测出来(ch li)IgM-HBcAb n急性HBV感染IgG-HBcAbn急性感染恢复期和慢性持续感染第五页,共三十二页。检测HBV病毒血清(xuqng)标志物是临床最常用的病原学诊断方法。HBV具有三个抗原抗体系统,即乙肝表面抗原(HBSAg)和乙肝表面抗体(HBsAb)、e抗原(HBeAg)和e抗体(HBeAb)、核心抗原(HBc
3、Ag)核心抗体(HBcAb),由于HBcAg在血液中难于检出,故临床免疫学检测不包括HBcAg,目前常采用酶联免疫法和化学发光法检测。第六页,共三十二页。酶联免疫吸附实验(shyn)原理用于检测包被(bo bi)于固相板孔中的待测抗原(或抗体)。即用酶标记抗体,并将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使抗原抗体反应在固相载体表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除,最后通过酶作用于底物后显色来判断结果。颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。第七页,共三十二页。乙肝病毒血清(xuqng)标志物检测原理血清学标志原理包被试剂标记或结合物结果判断HBsAg夹心法HBsAbHBsAb显色(+
4、)HBsAb夹心法HBsAgHBsAg显色(+)HBeAg夹心法HBeAbHBeAb显色(+)HBeAb竞争法HBeAbHBeAb及中和抗原不显色(+)HBcAb竞争法HBcAgHBcAb不显色(+)第八页,共三十二页。标本(biobn)本要求采集:血浆:使用抗凝血浆管(枸橼酸盐、EDTA盐、肝素(n s)之一为抗凝剂)采集样品。样品离心分离后,提取血浆用于检测。血清:采用正确医用技术采集标本。离心分离后,提取血清样品用于检测。第九页,共三十二页。标本(biobn)要求储存:样品可存放于28冰箱,24小时内测定。若需长时间保存,则应冻存于-20以下,避免反复冻融。上述样品使用前应恢复(huf)
5、到室温,轻轻摇动混匀。若标本有沉淀物形成,应离心除去,并确定未变质方可使用。严重融血或脂血标本不可使用。第十页,共三十二页。试剂(shj)(安图生物)编号编号组分名称组分名称96人份人份1包被板69孔X1块2样品稀释液2.3ml X1瓶3酶结合物5.5ml X1瓶4底物液6.2ml X1瓶5显色剂6.2ml X1瓶6洗涤液30ml X1瓶7终止液5.5ml X1瓶8阴性对照1.0ml X1瓶9阳性对照1.0ml X1瓶10子母袋1个11说明书1份12板贴3张主要组成主要组成(z chn)成成分分第十一页,共三十二页。实验(shyn)前准备1.取出试剂盒及待测样品,将所有试剂及样品恢复至室温(1
6、825)。2.将恒温箱或水浴锅调至反应温度。3.洗液用蒸馏水作20倍稀释(xsh)后备用。第十二页,共三十二页。检验(jinyn)步骤排板第十三页,共三十二页。检验(jinyn)步骤表面抗原(两步法)1.留一孔作空白对照,加入样本稀释液20ul/孔(含空白孔),其他加入阴性对照三孔和阳性对照二孔100ul/孔及待测标本100ul/孔于相应的反应孔内。2.在微型真当器上振荡30秒使孔内液体混合均匀(该步骤非常(fichng)重要)。3.贴上板贴,置37下温育60分钟。第十四页,共三十二页。检验(jinyn)步骤4.撕下板贴,除空白孔外,各孔加入(jir)酶结合物50ul。5.在微型振荡器上振荡3
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