自身抗体的检测及应用课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,一、自身免疫,【概念】,当机体免疫系统受某种因素作用使自身免疫,耐受削弱或破坏时，免疫系统会对自身成份包括,正常或变性的组织,、,器官、细胞、蛋白质或酶类,等自身抗原产生免疫应答反应,，,出现自身抗体或,致敏淋巴细胞的这种现象称为自身免疫,。,一、自身免疫,自身免疫可以是正常生理性的，例如：,针对衰老或死亡的自体细胞。,自身免疫也可以是病理性的,，,引起自身免疫病。,二、自身免疫性疾病,【概念】,在内因与外因的共同作用下,，,机体的自身免,疫应答失控,，,反应过度,，,直接或间接破坏自身组,织,，,并引起相应器官病变，导致临床症状，则为,自身免疫性疾病,。,分为器官特异性和全身性。,二、自身免疫性疾病,自身免疫性疾病的特点,：,（1）多数自身免疫性疾病是自发或特发性的，感染，药物等外因可能有一定的影响。,（2）患者血清中存在有高水平的球蛋白。,（3）患者血清中有高效价的自身抗体或出现与自身抗原反应的致敏淋巴细胞。,（4）病损部位有变性的免疫球蛋白沉积，呈现以大量淋巴细胞和浆细胞浸润为主的慢性炎症。,二、自身免疫性疾病,自身免疫性疾病的特点,：,（5）病程一般较长，发作与缓解交替出现，仅有少数为自限性。,（6）女性多男性，老年多于青少年。,（7）有遗传倾向。,（8）应用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂有效。,（9）常有其它自身免疫病同时存在。,（10）可复制出相似的动物疾病模型,。,自身抗体与疾病的关系,某些自身抗体对某种疾病的诊断具有高度特,异性,，,已经成为该病的血清标记抗体或特异性抗,体,。,某些自身抗体与疾病的活动性有相关性,，,少数自身抗体参与了免疫病病理性损伤,。,特异性较强的自身抗体,抗Sm系统性红斑狼疮,抗Scl-70系统性硬化症,抗SSA/SSB,干燥综合征,抗CCP类风湿关节炎,抗体滴度的高低可判断疾病的活动性,抗双链DNASLE,aCLSLE、,磷脂抗体综合征,RF类风湿关节炎,预测疾病的预后及临床亚型,抗Jo-1皮肌炎合并肺间质病变,抗Scl-70弥漫性系统性硬化,抗rRNP狼疮脑病,自身抗体的意义,自身免疫性疾病的诊断；,疾病活动性的判断；,疗效的观察及预后；,指导临床用药等；,进行不同疾病的鉴别诊断。,自身抗体常用检测方法,自身抗体的检测方法：,（1）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：,该法检测自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检测就必须多种单独的抗原，因此该法在临床免疫实验室的应用受到一定限制,。,（2）酶免疫斑点(条带)实验,【,优点,】,将经亲和层析纯化的抗原包被在固定的位置,，,每一种抗原只对应一条条带,，,不会产生非特异性反应条带,，,结果灵敏度高,、,特异好,，,判断实验结果简单,，,每个反应区均有质控带，可以显示操作是正确,，,阴性与阳性的结果明显,，,容易判断,，,条带显色与抗体滴度相关,。,(3),间接免疫荧光法(,IFT),:检测ANA的金标准，,具有很高的敏感性和特异性。,间接免疫荧光法原理,将稀释的血清与生物载片（反应区内固定有包被基质的生物薄片）温育，如果样本是阳性的，特异性IgG、IgA和 IgM抗体与相应的核抗原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式。,抗核抗体(ANA),是以自身真核细胞成分作为,靶抗原的一组自身抗体的总称，泛指各种核,成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。,抗核抗体(ANA),均质型,与AHA（抗组蛋白抗体,）,、抗DNA有关，引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮,核膜型,与抗ds-DNA有关，,多见于SLE，特别是有肾炎者,抗核抗体(ANA),斑点型,与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体,核仁型,多见于系统性硬皮病,项目,检验方法,SLE四项,ANA,间接免疫荧光,抗DSDNA抗体,间接免疫荧光,抗组蛋白抗体,ELISA,抗核小体抗体,ELISA,ENA系列,抗RNP,免疫印迹、ELISA,抗SM,免疫印迹、ELISA,抗SSA,免疫印迹、ELISA,抗SSB,免疫印迹、ELISA,抗JO-1,免疫印迹、ELISA,抗SCL-70,免疫印迹、ELISA,抗核糖体P蛋白,免疫印迹、ELISA,RA三项,AKA（抗角质蛋白抗体）,间接免疫荧光,抗RA33,ELISA,抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）,ELISA,ANCA四项,P-ANCA（荧光模型为核周模型）,间接免疫荧光,C-ANCA（荧光模型为细胞质模型）,间接免疫荧光,MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）,ELISA,PR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）,ELISA,常见的自身抗体及其检测方法,(1),(2),自身免疫肝炎七项,检验方法,ANA,间接免疫荧光,抗LMA抗（肝细胞膜抗体）,间接免疫荧光,ASMA（抗平滑肌抗体）,间接免疫荧光,抗LKM（抗肝肾微粒体抗体）,间接免疫荧光,抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）,间接免疫荧光,AMA（线粒体抗体）,间接免疫荧光,抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗体）,间接免疫荧光,RF三项,RF-IgG,ELISA,RF-IgA,ELISA,RF-IgM,ELISA,抗磷脂综合征三项（ASP）,ELISA,PT-IgG（凝血素抗体）,ELISA,PT-IgM,ELISA,抗2-糖蛋白1抗体,ELISA,常见的自身抗体及其检测方法,ds-DNA,判断疾病活动性-ELISA,诊断疾病-IFT,自身抗体检测结果正确解读,检测方法局限性：假阳性，假阴性,临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期,临床表现阳性，实验室检查阴性,实验室检查阳性，临床表现阴性,自身免疫病自身抗体非常复杂,SLE,患者中存在,100,多种自身抗体,Semin Arthritis Rheum.2004 Oct;34(2):501-37.,自身免疫病自身抗体非常复杂,APS,患者中存在,30,种自身抗体,J Autoimmun,2008.30(1-2):p.74-83.,N Engl J Med 2003;349:1526-33.,疾病预警,自身抗体在SLE发病前9.4年出现,疾病预警,AMA在PBC发病前10年出现,临床复杂性,急性肝衰患者出现2和PBC特异性抗体,临床复杂性,抗CCP抗体在丙肝中8.5,指标阴性是否意味着疾病的排除？,指标阳性意味着什么？,特异性的局限,各指标与对应疾病之间：,如 SLE 抗Sm抗体特异性99%,敏感性仅为25%,RA RF阳性可出现在SLE,pSS,SSc,慢性肺结核，高球蛋白血症等，5%正常人可出现低滴度的RF。,“自相矛盾”的结果,ANA(间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性,ANA(间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性,（膜条法），占10%，为客观存在,ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5%）,特异性指标阳性，人无相应症状,健康人 -一过性阳性（感染、焦虑、疲劳等），2月后,复查可能转阴或者下降。,貌似健康人-检测自身抗体（微观）,影像-组织,表现-器官（最晚）,患者 -但不是自身免疫性疾病，如传染病，观察滴,度变化，一般会下降,自身免疫性疾病-但不是指标对应的疾病,自身抗体检测结果的解释,疾病标记（志）性自身抗体,疾病特异性自身抗体,疾病相关性自身抗体,疾病非特异性自身抗体,生理性自身抗体,疾病前期存在,检测方法及检测程序局限性,检测质量,:,假阴性假阳性,解读困难,四、常见自身抗体的检测及应用,自身抗体种类很多，这里只是简单介绍几种,常见的自身抗体的检测,：,（1）,类风湿因子,（RF）,（2）,抗,ENA,抗体谱,类风湿因子（RF）的检测及应用,RF是一种抗人或动物,IgG,分子,Fc,片段抗原决,定簇的抗体,，,是以变性,IgG,为靶抗原的自身抗,体,，,可与人或动物的变性,IgG,结合,，,而不与正常,IgG,发生凝集,，,最多见于类风湿性关节炎患者,，,RF,有,IgM、IgG、IgA和IgE,型,，IgM型为主要类型。,类风湿因子（RF）,检测方法,：,a.,胶乳凝集试验,：,只能定性或定量,，,灵敏度及特异性不变,，,只能检测,I,gM型RF。,b.速率散射比浊法：定量检测，准确、快速，准确性和敏感性高于,胶乳凝集试验,，,也只能检测,I,gM型RF。,c.,ELISA,法,：,可检出不同,I,g类型的RF,。,类风湿因子（RF）,临床应用,RF在RA中的阳性率为70%，是诊断RA的重要标准之一。,RF含量与病情的活动性和严重性成正比，持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良。,RF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断不具特异性,SLE 30%,SS 70%90%,SSc 20%30%,MCTD 50%60%,5%以下的正常人,RF阳性不等于一定就是RA,RF阴性也不等于一定就不是RA,抗ENA抗体谱,是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体,的总称,，,它主要包括抗,S,m、抗,RNP、,抗,SSA、,抗,SSB、,抗,J,o,-1、,抗,S,cl,-70、,抗组蛋白抗体、抗核,小体抗体、抗核糖体,P-,蛋白抗体,、,抗着丝点抗体,抗ds,DNA。,不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗,ENA,抗体,，ENA,抗体的检测对自身免疫性疾病的诊,断和鉴别具有重要意义,。,抗ENA抗体谱,检测方法,免疫印迹法,（IBT）、ELISA,法、双扩散法,对流免疫电流、金标法等,。,免疫印迹技术不需要纯化抗原,，,灵敏度高,、,特异性强,、,操作简单,，,是广泛采用检测抗,ENA,抗体的技术。,临床意义,nRNP,Sm,SS-A,SS-B,Scl-70,Jo-1,CENP B,dsDNA,核小体,组蛋白,核糖体P蛋白,nRNP,高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率为95-100，抗体滴度与疾病活动性相关。在30-40的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体。,Sm,抗Sm抗体是系统性红斑狼疮的特异性标志，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断指标，但阳性率仅为5-10。,抗Sm抗体的检测对早期,不典型的SLE或治疗后的回顾性诊断具有很大帮助。,SS-A,抗SS-A抗体与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（40-80）、也见于系统性红斑狼疮（30-40）和原发性胆汁性肝硬化（20）中，偶见于慢性活动性肝炎。此外，在100的新生儿红斑狼疮中可出现抗SS-A抗体。该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。,SS-B,抗SS-B抗体几乎仅见于干燥综合征（40-80）和系统性红斑狼疮（10-20）的女性患者中，男女比例为29:1。在干燥综合征中抗SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现。,Scl-70,抗Scl-70抗体见于25-75的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异（Scl=硬化症）。在局限型硬化症中不出现。,Jo-1,抗Jo-1抗体见于多肌炎，阳性率为25-35。常与合并肺间质纤维化相关。,dsDNA,抗dsDNA抗体对系统性红斑狼疮具有很高的特异性。除抗Sm抗体外，抗dsDNA抗体也可作为该病的一个血清学指标，阳性率为40-90%。,1.简述免疫荧光法的原理,2.抗核抗体的定义及临床意义,谢谢大家,