Sf9细胞的培养及转染.ppt
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1、Sf-9细胞的培养及转染Sf-9细胞Sf-9Sf-9细胞是由细胞是由G.E.Smith G.E.Smith 和和 C.L.Cherry C.L.Cherry 在在19831983年从细胞株年从细胞株IPLB-SF 21 AEIPLB-SF 21 AE得来的一得来的一个克隆。个克隆。IPLB-SF 21 AEIPLB-SF 21 AE是是19771977年由年由VaughnVaughn等从草地夜蛾蛹的卵巢组织得到的。等从草地夜蛾蛹的卵巢组织得到的。Sf-9Sf-9是半贴壁的细胞,贴壁性不强,可贴是半贴壁的细胞,贴壁性不强,可贴壁培养也可悬浮培养。壁培养也可悬浮培养。Sf-9细胞的形态培养细胞生长
2、的条件1、细胞的营养需要2、细胞的生存环境温度:28氧pH:7.2-7.4渗透压3、无污染4、无毒实验材料:实验用品实验用品:超净工作台,压力蒸汽消毒器,电热干燥箱,滤器,酸缸生化培养箱倒置显微镜酶标仪、微孔板震荡器液氮罐自动双重纯水蒸馏器,纯水仪耗材耗材:培养瓶,吸管,电动吸引器,培养板,冻存管超净台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃粒,使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面,使工作台内构成无菌环境。生化培养箱生化培养箱设定的条件为28。使用生化培养箱培养细胞时应注意的问题:1)保持培养箱内空气干净。定期消毒(90,14h)。2)箱内灭菌蒸馏水3000ml
3、蒸馏水槽中以保持箱内湿度,避免培养液蒸发。培养瓶拿培养瓶的正确姿势:拇指和食指夹住培养瓶,拿培养瓶的正确姿势:拇指和食指夹住培养瓶,瓶口向外,中指托住瓶底。保持瓶子的水平,瓶口向外,中指托住瓶底。保持瓶子的水平,防止培养液倒向瓶口。防止培养液倒向瓶口。血球计数板细胞冻存和复苏冻存和复苏的原则:慢冻快融当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反结晶就大,大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。慢冻程序标准程序:当温度在-25
4、以上时,12/min当温度达-25以下时,510/min当温度达-100时,可迅速放入液氮中细胞冻存简易程序:将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降12的速度,在40分钟内降至液氮表面,停30分钟后,直接投人液氮中。细胞复苏方法(1)从液氮中取出冷冻管,迅速投入3738水浴中,使其融化(1分钟左右)。(2)5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上。(3)低速离心10分钟。(4)去上清,加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。Sf9细胞的传代判断分离(散)细胞培养物是否需要传代的主要指标就是观察培养物是否已基本长满培养瓶皿的底壁。一般来说,原
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