第十高效液相色谱分析PPT课件.ppt
《第十高效液相色谱分析PPT课件.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《第十高效液相色谱分析PPT课件.ppt(39页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、该方法的几个突出特点:该方法的几个突出特点:(1)(1)高压:高压:液相色谱以液体作为流动相液相色谱以液体作为流动相(称为载液称为载液),液,液 体流经色谱柱受到的阻力较大,为使体流经色谱柱受到的阻力较大,为使载液迅载液迅 速通过速通过色谱柱,必须对载液施加高压。一般色谱柱,必须对载液施加高压。一般 可达到可达到150150300kg/cm300kg/cm2 2。(2)(2)快速:快速:由于使用了高压,由于使用了高压,HPLCHPLC所需的时间较之经典所需的时间较之经典 液相色谱短得多,如分离苯的羟基化合物七液相色谱短得多,如分离苯的羟基化合物七 个组分,只需个组分,只需1 1分钟;分钟;对氨
2、基酸的分离,对氨基酸的分离,1.经典液相色谱需用经典液相色谱需用2020小时才能分离出小时才能分离出2020种氨基酸,种氨基酸,而而HPLCHPLC只需只需1 1小时即可完成。小时即可完成。载液在色谱柱内的载液在色谱柱内的流速可达流速可达1 110mL10mLminmin-1-1。(3)(3)高效:高效:气相色谱的柱效(气相色谱的柱效(n n值)约为值)约为20002000塔板塔板/m/m,而,而高效液相色谱约为高效液相色谱约为50005000塔板塔板/m/m以上;一根以上;一根高效液高效液相色谱柱可同时分离多达相色谱柱可同时分离多达100100种以上的组分。种以上的组分。(4)(4)高灵敏度
3、:高灵敏度:由于在由于在HPLCHPLC中使用高灵敏度的检测器,如紫中使用高灵敏度的检测器,如紫外检测器的最小检测量可达外检测器的最小检测量可达1010-9-9g g,荧光检测器荧光检测器2.可达可达1010-11-11克;所需试样为微升级。克;所需试样为微升级。HPLCHPLC与与GCGC相比较的突出优点:相比较的突出优点:用用GCGC法分析样品须先气化,目前已知的有机法分析样品须先气化,目前已知的有机 物中,能直接采用物中,能直接采用GCGC法进行分析的仅占法进行分析的仅占20%20%。而而HPLCHPLC法则不受此限制,尤其适合于分析生法则不受此限制,尤其适合于分析生 物、医学方面的大分
4、子及离子型化合物。物、医学方面的大分子及离子型化合物。HPLCHPLC方法中,有两个相与样品分子相互作用方法中,有两个相与样品分子相互作用 ,而,而GCGC方法方法中一般认为只有一个相与样品分中一般认为只有一个相与样品分 子相互作用。所以子相互作用。所以HPLCHPLC的选择性大大提高。的选择性大大提高。3.HPLCHPLC方法中,因为在常温下进行分析,因此方法中,因为在常温下进行分析,因此 固定相的选择比固定相的选择比GCGC多;另一方面可提高色谱多;另一方面可提高色谱 的分离效率。的分离效率。HPLCHPLC方法中,可使用灵敏度较高的光度检测方法中,可使用灵敏度较高的光度检测 器,而在器,
5、而在GCGC方法中则无法使用。方法中则无法使用。HPLCHPLC方法中,样品可以回收,而方法中,样品可以回收,而GCGC方法中样品方法中样品 回收则较困难。回收则较困难。10-2 HPLC10-2 HPLC色谱仪色谱仪4.高效液相色谱仪的结构如下:高效液相色谱仪的结构如下:由贮液瓶由贮液瓶、高压泵、高压泵(梯度洗提装置梯度洗提装置)、进样器、进样器、色谱柱色谱柱(恒温器恒温器)、检测器和记录仪组成。、检测器和记录仪组成。5.主要部件简述:主要部件简述:1.1.高压泵高压泵 其作用是输送其作用是输送载液载液(流动相流动相)。由于色谱柱很细。由于色谱柱很细 (1(16mm)6mm),填充剂粒度小,
6、填充剂粒度小(几十微米几十微米),因此要,因此要 达到快速高效的分离效果,要求压力为达到快速高效的分离效果,要求压力为150150 200kg/cm 200kg/cm2 2。2.2.梯度洗提装置梯度洗提装置 又称又称梯度洗脱梯度洗脱(gradient elution)(gradient elution)和气相色谱和气相色谱 法中的程序升温类似,对复杂混合物的分离带法中的程序升温类似,对复杂混合物的分离带 来方便。来方便。6.所谓梯度洗提,指载液中含有两种或两种以上所谓梯度洗提,指载液中含有两种或两种以上不同极性的溶剂,在分离过程中按一定程序连续不同极性的溶剂,在分离过程中按一定程序连续改变载液
7、中各溶剂的配比。改变载液中各溶剂的配比。由此通过改变载液的由此通过改变载液的极性来达到分离组分,提高分离效果。极性来达到分离组分,提高分离效果。3.3.进样装置进样装置7.因为流路中为高压力工作状态,通常使用耐高因为流路中为高压力工作状态,通常使用耐高 压的六通阀进样装置。压的六通阀进样装置。4.4.色谱柱色谱柱 常用的标准柱型是内径常用的标准柱型是内径4.64.6或或3.9mm3.9mm,长度为,长度为151530cm30cm的直形不锈钢管。填料粒度的直形不锈钢管。填料粒度5 51010 m m,柱,柱效以理论塔板数计大约效以理论塔板数计大约700070001000010000。其。其发展趋
8、势发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。是减小填料粒度和柱径以提高柱效。8.5.5.检测器检测器常用的检测器:常用的检测器:(1)(1)紫外光度检测器紫外光度检测器(UV)(UV):它的作用原理是基于被分析试样对特定波长它的作用原理是基于被分析试样对特定波长紫外光的选择性吸收。池内样品浓度与吸收的光紫外光的选择性吸收。池内样品浓度与吸收的光强度服从比耳定律。强度服从比耳定律。P.304.P.304.最小检测量为最小检测量为1010-9-9g gmLmL-1-1,对流量和温度的波,对流量和温度的波动不敏感,可用于梯度洗脱。动不敏感,可用于梯度洗脱。9.紫外检测器的缺点:不适用于紫外光完全不吸收
9、紫外检测器的缺点:不适用于紫外光完全不吸收的试样,溶剂的选用也受到一定的限制。的试样,溶剂的选用也受到一定的限制。光电二极管阵列光电二极管阵列(photo-diode array(photo-diode array detector)detector)检测器是紫外检测器的重要进展。检测器是紫外检测器的重要进展。10241024个二极管阵列,各检测特定波长,通过计算个二极管阵列,各检测特定波长,通过计算机快速处理,形成三维立体谱图,如图所示。机快速处理,形成三维立体谱图,如图所示。10.11.(2)(2)差示折光检测器:差示折光检测器:偏转式差示折光检测器光路图偏转式差示折光检测器光路图 光源光
10、源1 1射出光线由射出光线由透镜透镜2 2聚焦聚焦,透过遮透过遮光板光板4 4的狭缝的狭缝,经反经反射镜射镜5 5反射后反射后,由透由透镜镜6 6汇聚两次汇聚两次,穿过穿过工作池工作池7 7和参比池和参比池8 8 该检测器是继该检测器是继UVUV检测器之后,第二种广泛使检测器之后,第二种广泛使用的液相色谱检测器。图示:用的液相色谱检测器。图示:12.被平面反射镜被平面反射镜9 9反射出来,成像于棱镜反射出来,成像于棱镜1111的棱口的棱口上,光束均匀分为两束,到达对称的光电管上,光束均匀分为两束,到达对称的光电管1212上。上。如果工作池和参比池皆通过纯流动相如果工作池和参比池皆通过纯流动相,
11、光,光束无偏转,左右两个光电管的信号相等;束无偏转,左右两个光电管的信号相等;如果工作池中有试样通过,由于折射率改变,如果工作池中有试样通过,由于折射率改变,造成光束偏转,从而使到达棱镜的光束偏离棱口,造成光束偏转,从而使到达棱镜的光束偏离棱口,左右两个光电管接受的光能量不等,其差值正比左右两个光电管接受的光能量不等,其差值正比于试样的浓度。于试样的浓度。13.每种物质都有各自不同的折射率,因此都可每种物质都有各自不同的折射率,因此都可用差示折光检测器进行检测,所以是一种通用型用差示折光检测器进行检测,所以是一种通用型的浓度检测器。的浓度检测器。灵敏度为灵敏度为1010-7-7g gmLmL-
12、1-1。缺点:对温度变化很敏感,此检测器不能用缺点:对温度变化很敏感,此检测器不能用于梯度洗提。于梯度洗提。3-3 HPLC3-3 HPLC的理论基础简述的理论基础简述 高效液相色谱法的理论基础基本与气相色高效液相色谱法的理论基础基本与气相色谱法相同,但有其不同之处。两者的主要区别在谱法相同,但有其不同之处。两者的主要区别在于于流动相流动相的不同。的不同。14.根据速率理论,根据速率理论,HPLCHPLC中影响柱效的因素如下:中影响柱效的因素如下:1.1.涡流扩散项涡流扩散项H He e H He e=2=2 d dp p 其含义与气相色谱法相同。其含义与气相色谱法相同。15.2.2.纵向扩散
13、项纵向扩散项 H Hd d 式中式中C Cd d为常数,为常数,D Dm m为分子在流动为分子在流动相中的扩散系数。相中的扩散系数。由于分子在液体中的扩散系数比在气体中小由于分子在液体中的扩散系数比在气体中小4 45 5个数量级,当流动相的线速度个数量级,当流动相的线速度0.5cm0.5cms s-1-1,该项,该项对对H H的影响可忽略不计。而的影响可忽略不计。而GCGC中该项的影响则很中该项的影响则很大。大。3.3.传质阻力项传质阻力项 与与GCGC类似,类似,HPLCHPLC也可分为也可分为固定相传质阻力固定相传质阻力项项和和流动相传质阻力项流动相传质阻力项。16.固定相传质阻力固定相传
14、质阻力H Hs s主要发生在液液分配色谱主要发生在液液分配色谱中,类似于气液色谱中的液相传质阻力项。中,类似于气液色谱中的液相传质阻力项。式中式中C Cs s 为常数为常数(与与k k有关有关);D Ds s为组为组分分子在固定液内的扩散系数;分分子在固定液内的扩散系数;由上式可见,由上式可见,H Hs s与与GCGC中的中的C CL L含义是一致的。含义是一致的。流动相传质阻力流动相传质阻力HPLCHPLC中该项有两种形式,分为中该项有两种形式,分为在流动的流动相中在流动的流动相中和和滞留的流动相中滞留的流动相中的传质阻力,的传质阻力,分别用分别用H Hm m和和H Hsmsm表示。表示。1
15、7.式中式中C Cm m是常数是常数(与与k k有关有关),D Dm m 为组为组分分子在流动相中的扩散系数。分分子在流动相中的扩散系数。式中式中Csm为一常数;为一常数;综上所述,由柱内色谱峰扩展所引起的塔板高度综上所述,由柱内色谱峰扩展所引起的塔板高度的变化可归纳为:的变化可归纳为:将上式简化:将上式简化:H=A+B/u+CuH=A+B/u+Cu18.可见,减小填料的孔径和粒度,采用低粘度可见,减小填料的孔径和粒度,采用低粘度及低流速流动相,适当提高温度等方法都可提高及低流速流动相,适当提高温度等方法都可提高柱效。柱效。由由H H d dp p2 2可知,其中减小填料粒度是提高柱可知,其中
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 第十 高效 色谱 分析 PPT 课件
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【胜****】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【胜****】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。