DB50∕T 953-2019 饲料中大肠杆菌O157的快速检测方法环介导等温扩增(LAMP)法.pdf
《DB50∕T 953-2019 饲料中大肠杆菌O157的快速检测方法环介导等温扩增(LAMP)法.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《DB50∕T 953-2019 饲料中大肠杆菌O157的快速检测方法环介导等温扩增(LAMP)法.pdf(6页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、 ICS 65.120 B 46 DB50 重庆市地方标准 DB50/T 9532019 饲料中大肠杆菌 O157 的快速检测 环介导等温扩增(LAMP)法 Rapid determination of Escherichia coli O157 in feeds Loop-mediated isothermal amplification detection method 重庆市市场监督管理局 发 布 2019-12-12 发布 2020-03-15 实施 DB50/T 953-2019 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由重庆市农业农村委员会提出并归口
2、。 本标准起草单位:重庆市动物疫病预防控制中心,重庆市兽药饲料检测所。 本标准主要起草人员:胡健、周莉、侯亚莉、朱英才、盛欣、丁平、何义刚、张毅、王美珍、张军等。DB50/T 953-2019 1 饲料中大肠杆菌 O157 的快速检测方法 环介导等温扩增(LAMP)法 1 范围 本标准规定了用环介导等温扩增(LAMP)法检测饲料中大肠杆菌 O157 的原理、试剂、仪器和设备、操作步骤、结果判定和表述。 本标准适用于饲料中大肠杆菌 O157 的筛选检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最
3、新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB 4789.36 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌 O157 :H7/NM 检验 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 3 生物安全措施 培养物和废弃物处理应按照GB 19489的规定执行。 4 原理 用热裂解法提取大肠杆菌O157的基因组DNA作为环介导等温扩增模板,根据大肠杆菌O157的rfbE基因特异序列,设计5条LAMP引物(参见附录A),建立LAMP反应体系,恒温反应结束后根据添加的染料显色情况进行结果判断。 5 试剂 5.1 除另有规定外,试剂为分析纯试剂,试验用水
4、符合 GB/T 6682 的要求。 5.2 改良 EC 肉汤(mEC+n)。 5.3 营养肉汤。 5.4 生理盐水。 5.5 双蒸水(ddH2O)。 5.6 合成大肠杆菌 O157 检测用引物,包括外引物一对,内引物一对,环状下游引物一条。外引物 F3:5-TCTCAATTCTAACTAGGACCGCAGA-3; 外引物 B3: 5-ATAACTTGCTCATTCGATAGGCTGG-3;内引物 FIP:5-ACAGGGTAAAAAACTGGCCTGAGGAATTAAGGAATCACCTTGC-3;内引物 BIP:5-CACGATGCCAATGTACTCGGAAAAATAATTCCACGCCA
5、ACCAAGA-3;环状下游引物 LB:5-ATCAAAAGCACCCTATAGCTGAG-3。将各引物用双蒸水溶解,配置成 100 mmol/L 的储备浓度,用双蒸水稀释为 10 mmol/L 工作浓度备用。 5.7 Bst DNA 聚合酶。 5.8 脱氧核糖核苷三磷酸(dNTPS),包括 dATP、dTTP、dGTP、dCTP 各 10 mmol/L。 5.9 MgCl2溶液(50 mmol/L)。 5.10 10Bst DNA 聚合酶缓冲液(200 mmol/L Tris-HCl(pH8.8)、100 mmol/L KCl、100 mmol/L (NH4)2SO4、20 mmol/L M
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- DB50T 953-2019 饲料中大肠杆菌O157的快速检测方法环介导等温扩增LAMP法 DB50 953 2019 饲料 大肠杆菌 O157 快速 检测 方法 环介导 等温 扩增 LAMP
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【li****ok】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【li****ok】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。
链接地址:https://www.zixin.com.cn/doc/78188.html