KJ 201913 食品中玉米赤霉烯酮的快速检测 胶体金免疫层析法.pdf
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1、 附件 13 食品中玉米赤霉烯酮快速检测 胶体金免疫层析法 (KJ201913) 1. 范围 本标准规定了食品中玉米赤霉烯酮快速检测胶体金免疫层析法。 本标准适用玉米、小麦及其碾磨加工品中玉米赤霉烯酮快速筛选测定。 第一法第一法 比色法比色法 2. 原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。 样品中的玉米赤霉烯酮经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制抗体和试纸条中检测线(T 线)上的抗原结合,从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线(T 线)与控制线(C 线)颜色深浅的比较,对样品中玉米赤霉烯酮进行结果判定。 3. 试剂及材料 除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,试验用水为 GB/T 66
2、82 规定的二级水。 3.1. 试剂 3.1.1. 乙腈。 3.1.2. 甲醇+水(7+3,体积比) 。 3.1.3. 稀释缓冲液(胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液或根据产品使用说明书配置) 。 3.2. 参考物质 玉米赤霉烯酮的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1,纯度95%。 表1 玉米赤霉烯酮参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子量 玉米赤霉烯酮 Zearalenone 17924-92-4 C18H22O5 318.36 注:或等同可溯源物质。 3.3. 标准溶液的配制 3.3.1. 标
3、准储备液:称取适量标准品,用乙腈(3.1.1)溶解,配制成浓度为100 g/mL的标准储备液。18 避光保存,有效期6个月。 3.3.2. 标准工作液:准确量取标准储备液(100 g/mL) (3.3.1)100 L,置于10 mL容量瓶中,用乙腈(3.1.1)稀释至刻度,摇匀,制成浓度为1 稀/mL的玉米赤霉烯酮标准工作液,2 8 避光保存,有效期1个月。 3.4. 材料 玉米赤霉烯酮胶体金免疫层析试剂盒,适用基质为玉米、小麦及其碾磨加工品。 4. 仪器和设备 4.1. 移液器:100 L、200 L、1 mL 和 5 mL。 4.2. 旋涡混合器。 4.3. 离心机。 4.4. 电子天平:
4、感量为 0.01 g。 5. 环境条件 环境温度:20 30 。 空气相对湿度:最佳测定湿度 45 %65 %。若湿度低于 45 %,相应延长待测液-试纸条反应时间,以质控实验为准;若湿度为 65 %80 %,微孔与试纸条拆开后立即使用,避免微孔与试纸条长时间暴露在空气中受潮;避免在湿度 80 %以上湿度进行实验。 6. 分析步骤 6.1. 试样制备 按GB 5491扦取的样品充分碾磨或粉碎混匀,过40目筛。 6.2. 提取 准确称取试样5.0 g (精确至0.01 g) 于50 mL离心管中, 加入20 mL 甲醇+水溶液 (3.1.2) ,用旋涡混合器振荡3 min,离心分层或静置分层,上
5、清液备用。 准确移取0.8 mL稀释缓冲液(3.1.3)于1.5 mL离心管中,加入25 L上清液,混匀,待检。 6.3. 测定步骤 依检验所需,取相应数量的金标微孔和试纸条,做好标记。吸取待检液 200 L 于金标微孔中,抽吸至孔底的紫红色颗粒完全溶解,孵育 10 min。将试纸条插入金标微孔中,反应 3 min5 min。 从金标微孔中取出试纸条,弃去试纸条下端的样品垫,观察显色情况,进行结果判定。(若试剂盒冷藏保存,使用前需恢复至实验环境温度。 ) 7. 质控试验 每批样品应同时进行空白试验和阳性质控试验, 可根据检测样品量制定适宜频次的质控试验。 7.1. 空白试验 7.1.1. 试剂
6、空白试验:除不称取试样外,均按6.2和6.3所述步骤操作。 7.1.2. 基质空白试验:准确称取空白试样,按6.2和6.3所述步骤操作。 7.2. 阳性质控试验 准确称取玉米赤霉烯酮含量为60 g/kg的质控样,按6.2和6.3步骤操作。或准确称取空白试样,加入一定体积的玉米赤霉烯酮标准工作液(3.3.2) ,使玉米赤霉烯酮添加量为60 g/kg,按6.2和6.3步骤操作。 8. 结果判定 通过对比控制 C 线和检测 T 线的颜色深浅进行结果判定。 8.1. 无效结果 无论样品中有无玉米赤霉烯酮存在, 控制C线均会出现一条紫红色条带。 若C线未显色,表明操作不正确或试纸条已失效,检测结果无效(
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