LAMP技术及应用.ppt
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1、LAMP技术及应用LAMPLAMP技术简介技术简介 环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是由日本研究人员发明的一种新型的体外等温扩增特异核酸片段的技术。该技术可以在等温条件下(约65)进行核酸扩增反应,克服了传统PCR反应需要通过反复的热变性过程获得单链模板的缺点,从而实现在恒温条件下进行连续快速的核酸扩增,并且可以通过简易直观的目测判读结果,相比传统PCR大大节省了时间和实验操作步骤。LAMP法和其他PCR法的比较LAMP法和其他PCR法的比较技术特点特异性高4条引物靶向目标基因6个区段,特异性高于PCR和qPCR灵敏度
2、高扩增模板可低至每测试10拷贝或更少。检测时间短恒温扩增,省却温度循环,扩增时间60min。设备简易,可同时检测多批样本不需特定或高端检测仪器,恒温设备即可,例如水浴锅,可以随时放入后续批次样本。LAMP法使用的酶链置换型链置换型DNADNA聚合酶聚合酶:Bst DNA Polymerase:Bst DNA Polymerase扩增对象为双链扩增对象为双链DNADNA时,其中一条链解离的同时进行链延长。时,其中一条链解离的同时进行链延长。LAMPLAMP法使用最适温度法使用最适温度6565的聚合酶。的聚合酶。LAMP法的引物设计LAMP法的原理LAMP法的原理LAMP法所需的试剂LAMP法常规
3、操作步骤LAMP法的检测方法琼脂糖凝胶电泳法琼脂糖凝胶电泳法 由由LAMPLAMP原理可知,原理可知,LAMPLAMP反应的最终扩增产物是茎环反应的最终扩增产物是茎环DNADNA组组成的混合物,即有若干倍茎长度的茎环结构和类似花椰菜的结构。成的混合物,即有若干倍茎长度的茎环结构和类似花椰菜的结构。因此,因此,LAMPLAMP扩增产物在扩增产物在2 2的琼脂糖凝胶糖上呈现的是典型的梯的琼脂糖凝胶糖上呈现的是典型的梯状条带。(图状条带。(图A A)肉眼观察法肉眼观察法 在在LAMPLAMP反应过程中,可以通过产生的副产物焦磷酸镁白色反应过程中,可以通过产生的副产物焦磷酸镁白色沉淀的产生来肉眼直接判
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