蛋白质的颜色反应和沉淀反应.pptx

蛋白质的颜色反应和沉淀反应蛋白质的颜色反应和沉淀反应蛋白质的颜色反应和沉淀反应第1页蛋白质颜色反应原理蛋白质颜色反应原理 蛋白质分子中某种或一些基团与显色剂作用，蛋白质分子中某种或一些基团与显色剂作用，可产生特定颜色反应。不一样蛋白质所含氨基酸不可产生特定颜色反应。不一样蛋白质所含氨基酸不完全相同，颜色反应亦可不一样。颜色反应不是蛋完全相同，颜色反应亦可不一样。颜色反应不是蛋白质专一反应，白质专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同颜一些非蛋白物质亦可产生相同颜色反应，色反应，所以不能仅依据颜色反应结果决定被测所以不能仅依据颜色反应结果决定被测物是否是蛋白质。颜色反应是一些常见蛋白质定量物是否是蛋白质。颜色反应是一些常见蛋白质定量测定依据测定依据。蛋白质的颜色反应和沉淀反应第2页常见蛋白质颜色反应常见蛋白质颜色反应1.米伦氏反应米伦氏反应 2.2.双缩脲反应双缩脲反应 3.3.黄色反应黄色反应 4.4.茚三酮反应茚三酮反应 5.5.乙醛酸反应乙醛酸反应 蛋白质的颜色反应和沉淀反应第3页（一）米伦氏（一）米伦氏（MillonMillon）反应）反应原理：米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞和亚硝酸汞之原理：米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞和亚硝酸汞之混合物，能与苯酚、双酚及一些羟苯衍生物产生颜色反应。混合物，能与苯酚、双酚及一些羟苯衍生物产生颜色反应。这些反应最初产生有色物质可能为羟苯之亚硝基衍生物，经这些反应最初产生有色物质可能为羟苯之亚硝基衍生物，经变位作用变成颜色更深邻醌肟，最终形成红色稳定产物。组变位作用变成颜色更深邻醌肟，最终形成红色稳定产物。组成蛋白质氨基酸中只有酪氨酸为羟苯衍生物，所以该反应为成蛋白质氨基酸中只有酪氨酸为羟苯衍生物，所以该反应为酪氨酸显色反应（酚羟基反应）。酪氨酸显色反应（酚羟基反应）。注意事项：加热时轻注意事项：加热时轻易产生暴沸，要注意安全，易产生暴沸，要注意安全，应温和加热。应温和加热。蛋白质的颜色反应和沉淀反应第4页（二）双缩脲反应（二）双缩脲反应原理：将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱原理：将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成红紫色络合物，此反应为双缩脲反应。蛋白质分性环境中，能与硫酸铜结合成红紫色络合物，此反应为双缩脲反应。蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相同，故能呈此反应。普通子中含有肽键与缩脲结构相同，故能呈此反应。普通肽键越多颜色越深，而且肽键越多颜色越深，而且受蛋白质特异性影响小受蛋白质特异性影响小注意事项：硫酸铜不能多加，不然会产生影响观察蓝色络离子注意事项：硫酸铜不能多加，不然会产生影响观察蓝色络离子Cu(NHCu(NH3 3)4 42+2+蛋白质的颜色反应和沉淀反应第5页（三）黄色反应（三）黄色反应原理：蛋白质分子中含有苯核结构氨基酸（如酪氨酸、色氨原理：蛋白质分子中含有苯核结构氨基酸（如酪氨酸、色氨酸等），碰到硝酸可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变酸等），碰到硝酸可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变为橘黄色硝苯衍生物。这是含酪氨酸和色氨酸蛋白质所特有反为橘黄色硝苯衍生物。这是含酪氨酸和色氨酸蛋白质所特有反应。皮肤、指甲和毛发等遇浓硝酸变黄，原因在此。应。皮肤、指甲和毛发等遇浓硝酸变黄，原因在此。（四）茚三酮反应（四）茚三酮反应原理：蛋白质与茚三酮共热，则产生蓝色还原茚三酮、茚三原理：蛋白质与茚三酮共热，则产生蓝色还原茚三酮、茚三酮和氨缩合物。此反应为一切蛋白质及酮和氨缩合物。此反应为一切蛋白质及 氨基酸所共有。氨基酸所共有。注意事项：反应必注意事项：反应必须在须在pH 5-7pH 5-7进行。进行。蛋白质的颜色反应和沉淀反应第6页（五）乙醛酸反应（五）乙醛酸反应含色氨酸蛋白质在浓硫酸中与一些醛类反应能形成有色含色氨酸蛋白质在浓硫酸中与一些醛类反应能形成有色物质。此反应可作为色氨酸定性定量反应。物质。此反应可作为色氨酸定性定量反应。、在蛋白质溶液中加入、在蛋白质溶液中加入HCOCOOHHCOCOOH，将浓硫酸沿管壁，将浓硫酸沿管壁迟缓加入，不使相混，在液迟缓加入，不使相混，在液面交界处，即有紫色环形成面交界处，即有紫色环形成、色氨酸反应（吲哚环反、色氨酸反应（吲哚环反应）应）、判定蛋白质中是否含有、判定蛋白质中是否含有色氨酸色氨酸试验步骤试验步骤蛋白质的颜色反应和沉淀反应第7页蛋白质沉淀反应原理蛋白质沉淀反应原理 在水溶液中蛋白质分子表面因为形成水化层和双电层，而在水溶液中蛋白质分子表面因为形成水化层和双电层，而成为稳定胶体颗粒。但这种稳定性是有条件、相正确。在一成为稳定胶体颗粒。但这种稳定性是有条件、相正确。在一定物理化学原因影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至定物理化学原因影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性而丧失稳定原因，即以固态形式从溶液中析出，这种作变性而丧失稳定原因，即以固态形式从溶液中析出，这种作用称为蛋白质沉淀反应。用称为蛋白质沉淀反应。可逆沉淀反应可逆沉淀反应：在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析：在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，蛋白质分子内部结构并未发生显著改变，基础上保持原出，蛋白质分子内部结构并未发生显著改变，基础上保持原有性质。除去沉淀原因后，蛋白质沉淀可再溶于原来溶剂中。有性质。除去沉淀原因后，蛋白质沉淀可再溶于原来溶剂中。不可逆沉淀反应：不可逆沉淀反应：在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部在发生沉淀反应时，蛋白质分子内部结构，尤其是天然结构遭到破坏，失去其天然蛋白质原来性结构，尤其是天然结构遭到破坏，失去其天然蛋白质原来性质，这种蛋白质沉淀不能再溶解于原来溶剂中。质，这种蛋白质沉淀不能再溶解于原来溶剂中。蛋白质的颜色反应和沉淀反应第8页常见蛋白质沉淀反应常见蛋白质沉淀反应1.蛋白质盐析作用蛋白质盐析作用 2.2.酒精沉淀蛋白质酒精沉淀蛋白质 3.3.重金属盐沉淀蛋白质重金属盐沉淀蛋白质4.4.生物碱试剂沉淀蛋白质生物碱试剂沉淀蛋白质5.5.有机酸沉淀蛋白质有机酸沉淀蛋白质 6.6.无机酸沉淀蛋白质无机酸沉淀蛋白质7.7.加热沉淀蛋白质加热沉淀蛋白质 蛋白质的颜色反应和沉淀反应第9页（一）蛋白质盐析作用（一）蛋白质盐析作用原理：向蛋白质溶液中加入中性盐（硫酸铵、硫酸钠或氯原理：向蛋白质溶液中加入中性盐（硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等）至一定浓度，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。沉淀化钠等）至一定浓度，使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。沉淀不一样蛋白质所需中性盐浓度也不一样。不一样蛋白质所需中性盐浓度也不一样。注意事项：注意事项：、应先加蛋白质溶液，然后加饱和硫酸铵溶液；、应先加蛋白质溶液，然后加饱和硫酸铵溶液；、固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉、固体硫酸铵若加到过饱和则有结晶析出，勿与蛋白质沉淀混同。淀混同。（二）酒精沉淀蛋白质（二）酒精沉淀蛋白质原理：酒精为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质点水化层而使原理：酒精为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质点水化层而使其沉淀析出。其沉淀析出。蛋白质的颜色反应和沉淀反应第10页（三）重金属盐沉淀蛋白质（三）重金属盐沉淀蛋白质原理：当溶液原理：当溶液PHPH大于等电点时，蛋白质颗粒带负电荷，这大于等电点时，蛋白质颗粒带负电荷，这么它就轻易与重金属盐（如么它就轻易与重金属盐（如CuCu2+2+、AgAg+、HgHg2+2+、PbPb2+2+等）结合形成不等）结合形成不溶性盐类而沉淀。溶性盐类而沉淀。注意事项：使用乙酸铅或硫酸铜沉淀蛋白质时，试剂不可加过注意事项：使用乙酸铅或硫酸铜沉淀蛋白质时，试剂不可加过量，不然可使沉淀出蛋白质重新溶解。为何？量，不然可使沉淀出蛋白质重新溶解。为何？（四）生物碱试剂沉淀蛋白质（四）生物碱试剂沉淀蛋白质原理：植物体内含有显著生理作用含氮碱性化合物称为生原理：植物体内含有显著生理作用含氮碱性化合物称为生物碱。能沉淀生物碱或与其产生颜色反应物质称为生物碱试剂，物碱。能沉淀生物碱或与其产生颜色反应物质称为生物碱试剂，如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等。当溶液如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等。当溶液PHPH小于等电点时，蛋白质小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，轻易与生物碱试剂发生反应生成不溶性盐而沉颗粒带正电荷，轻易与生物碱试剂发生反应生成不溶性盐而沉淀。淀。蛋白质的颜色反应和沉淀反应第11页（五）有机酸沉淀蛋白质（五）有机酸沉淀蛋白质原理：当溶液原理：当溶液PHPH小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，轻小于等电点时，蛋白质颗粒带正电荷，轻易与一些有机酸如三氯乙酸和磺基水杨酸等酸根负离子发生反易与一些有机酸如三氯乙酸和磺基水杨酸等酸根负离子发生反应生成不溶性盐而沉淀。这个反应可将生物体液中蛋白质完全应生成不溶性盐而沉淀。这个反应可将生物体液中蛋白质完全去除。去除。（六）无机酸沉淀蛋白质（六）无机酸沉淀蛋白质原理：浓无机酸（磷酸除外），能使蛋白质发生不可逆沉原理：浓无机酸（磷酸除外），能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。这种沉淀作用可能是蛋白质颗粒脱水结果。淀反应。这种沉淀作用可能是蛋白质颗粒脱水结果。蛋白质的颜色反应和沉淀反应第12页（七）加热沉淀蛋白质（七）加热沉淀蛋白质原理：几乎全部蛋白质都因加热变性而凝固，变成不可逆不原理：几乎全部蛋白质都因加热变性而凝固，变成不可逆不溶状态。盐类和氢离子浓度对蛋白质加热凝固有主要影响。少许溶状态。盐类和氢离子浓度对蛋白质加热凝固有主要影响。少许盐类促进蛋白质加热凝固。当蛋白质处于等电点时，加热凝固最盐类促进蛋白质加热凝固。当蛋白质处于等电点时，加热凝固最完全、最快速。在酸性或碱性溶液中，蛋白质分子带有正电荷或完全、最快速。在酸性或碱性溶液中，蛋白质分子带有正电荷或负电荷，虽加热蛋白质也不凝固。若同时有足量中性盐存在，则负电荷，虽加热蛋白质也不凝固。若同时有足量中性盐存在，则蛋白质可因加热而凝固。蛋白质可因加热而凝固。加热变性引发蛋白质凝固沉淀原理可能是因为热变性使蛋白加热变性引发蛋白质凝固沉淀原理可能是因为热变性使蛋白质天然结构解体，疏水基外露，因而破坏了水化层，同时因为蛋质天然结构解体，疏水基外露，因而破坏了水化层，同时因为蛋白质处于等电点也破坏了带电状态。白质处于等电点也破坏了带电状态。蛋白质的颜色反应和沉淀反应第13页试验注意事项试验注意事项1.试验中使用试剂种类繁多，注意预防所试验中使用试剂种类繁多，注意预防所使用试剂交叉污染。使用试剂交叉污染。2.2.注意滴管正确使用，预防酸、碱或有机注意滴管正确使用，预防酸、碱或有机试剂污染滴头。试剂污染滴头。3.3.在试验中，尤其是酒精灯加热过程中要在试验中，尤其是酒精灯加热过程中要注意操作规范，注意试验安全注意操作规范，注意试验安全.双缩脲反双缩脲反应时试管口对着墙。应时试管口对着墙。4.4.除取蛋清液外，其它都用滴管取液除取蛋清液外，其它都用滴管取液,大致大致估算体积估算体积.5.5.试验汇报中注意解释各种现象和讲义中提试验汇报中注意解释各种现象和讲义中提出问题。出问题。蛋白质的颜色反应和沉淀反应第14页思索题思索题请说出在上述蛋白质沉淀反应中，哪些为请说出在上述蛋白质沉淀反应中，哪些为可逆沉淀，哪些为不可逆沉淀？可逆沉淀，哪些为不可逆沉淀？蛋白质的颜色反应和沉淀反应第15页