DB36T+1869-2023香菇菌种生产技术规程.docx
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1、ICS 65.020.20CCS B 30DB36江西省地方标准DB36/T 18692023香菇菌种生产技术规程Technical regulation for spawn production of Lentinula edodes2023 - 11 - 08 发布2024 - 05 - 01 实施江西省市场监督管理局发 布DB36/T 18692023目次前言II1 范围12 规范性引用文件13 术语和定义14 菌种生产要求25 母种生产36 原种、栽培种生产57 贮存与菌种生产档案9I前言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起
2、草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江西省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位:江西省农业科学院农业应用微生物研究所。本文件主要起草人:王赟萍、张诚、马吉平、钟国祥、王素贞、肖银润、熊小文,李伟红。II香菇菌种生产技术规程1 范围本文件规定了香菇(Lentinulaedodes)菌种的术语和定义、菌种生产要求、母种生产、原种与栽 培种生产、贮存与菌种生产档案等内容。本文件适用于江西省区域香菇母种、原种和栽培种菌种生产要求。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期
3、的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 9688 食品包装用聚丙烯成型品卫生标准GB 19170 香菇菌种GH/T 1013 香 菇NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程NY/T 1284 食用菌菌种中杂菌及害虫的检验NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范NY/T 1935 食用菌栽培基质质量安全要求3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1香菇 Lentinula edodes香菇又名香孽、香信、香苑、冬菇、椎茸(日本)。属担子菌门(Basidiomycota)、伞菌亚门(Agaricomycotina)、伞菌纲(Agaricomycetes)、伞菌目(Ag
4、anicales)、光茸菌科(Omphalotaceae)、 小香菇属(Lentinula)的一类木腐菌,子实体肉质或近肉质。来源:GH/T 1013-2015,3.1,有改动3.2菌种 spawn通过生产试验具有特异性、均一性和稳定性,且丰产性好、抗逆性强,生长在适宜基质上的培养物, 包括母种、原种和栽培种。3.3母种 stock culture1NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求经分离、杂交、诱变等各种方法选育得到的具有结实性的香菇菌丝体纯培养物及其继代培养物,以 玻璃试管为培养容器和使用单位,也称为一级种、试管种。来源:GB 19170-2003,3.1,有改动3.4原种 mot
5、her spawn由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以玻璃菌种瓶或塑料菌种瓶或(1217)cm(22 28)cm(0.0040.005)cm聚丙烯塑料袋为容器,也称为二级种。3.5栽培种 planting spawn由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶(玻璃瓶或塑料瓶)或(1517)cm(3335)cm(0.0040.005)cm聚丙烯塑料袋为容器。栽培种只能用于栽培,不可再次扩大繁殖菌 种,也称为三级种。3.6固体菌种 solid spawn以富含木质素、纤维素和淀粉等天然有机物为主要原料,添加适量的有机氮源和无机盐类,具一定 水分含量的固体培养基培养的纯菌丝体。3
6、.7液体菌种 liquid spawn指采用与母种营养成份相似但不添加琼脂的液体培养基培养而得到的纯菌丝体,菌丝体在培养基中 呈絮状或球状,液体菌种可以作为原种或栽培种使用。4 菌种生产要求4.1 人员要求香菇菌种生产所需要的技术人员和检验人员应经过专业培训、掌握香菇基础知识及香菇菌种生产技 术规程要求。4.2 场所和厂房要求香菇菌种生产应选择地势高、通风良好、空气清新、水源近、排水通畅和交通便利的场所。周边无 污染源。香菇菌种生产厂房要求有各自隔离的摊晒场、原材料库和配料分装库。配套有配料室、搅拌室、装 袋(瓶)室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室(通风好,有纱窗)、菌种检测室及菌种冷藏库等各
7、环 节的设施。冷却室、接种室和培养室都应要有净化设施和无菌设施。4.3 生产设备要求2香菇菌种生产需要电子秤、搅拌机、装袋(瓶)机、高压灭菌锅或常压灭菌锅、臭氧离子发生器、 超净工作台或接种箱、恒温培养箱、培养架、摇床、菌种发酵罐、冰箱、空调、显微镜等设备。5 母种生产5.1 生产流程培养基配制分装试管灭菌冷却无菌检验接种培养检验母种。5.2 容器试管一般选用18 mm180 mm或者20 mm200 mm。5.3 培养基培养基配方如下:配方一:PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基):马铃薯200 g,葡萄糖20 g,琼脂20 g,加水至1000 mL。如果配方中的葡萄糖替换成蔗糖,称为PSA
8、培养基。配方二:CPDA培养基(综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基):马铃薯200 g,葡萄糖20 g,磷酸二氢钾2 g, 硫酸镁0.5 g,琼脂20 g,加水至1000 mL。5.4 分装分装培养基至试管1/41/3处,用棉塞或硅胶塞封闭试管口,每5支试管为1捆,牛皮纸或报纸包棉 塞,棉线扎紧,棉塞向上放置。棉塞应采用梳棉,不能使用脱脂棉。5.5 灭菌放入高压灭菌锅灭菌,在121124(0.11 MPa0.12 MPa)下灭菌25 min。5.6 冷却灭菌后温度降到5565 时,在空气清洁的室内摆斜面,要求斜面长度不超过试管长度的2/3。5.7 无菌检验抽取3%5%冷却的试管,在28下培养48 h,
9、无微生物长出为灭菌合格。5.8 母种制备5.8.1 超净工作台消毒先用75%酒精棉球将超净工作台以及接种工具表面擦拭消毒,再打开紫外灯照射30 min。5.8.2 香菇菌种分离挑选生长长势良好、形状规则、未开伞、无虫蛀的香菇子实体作为种菇,用75%的酒精棉球对种菇表面擦洗消毒,并用无菌滤纸充分吸干后放置在洁净的培养皿中。用双手将菇体掰开,用无菌接种刀, 在菌盖与菌柄交界处切取10 mm5 mm“目”字形组织小块为接种材料。用接种针挑取一小块组织片, 迅速地接入试管斜面培养基的中央,然后将试管口和棉塞在酒精灯火焰上过火灭菌后塞好,将接种后的试管放入25的恒温箱内培养,2 d3 d后组织块及周围便
10、长出白色的菌丝,待菌丝长满试管斜面即可。35.8.3 转管培养选取斜面上菌丝茁壮、长势优良的试管,用接种工具挑取(35)mm(35) mm的菌块,按无菌操作要求,转接到新的试管培养基中,置于25的培养箱中培养15 d20 d,当菌丝长满培养基表面, 即成母种,可用于生产原种。5.8.4 菌种检查接种48 h后应做首次检查,挑拣出未萌发或污染母种。母种菌落长至直径2 cm左右时,进行第二次检查,待菌丝长满培养基前再检查一次,剔除或丢弃污染、生长不良的菌种。5.8.5 母种检查要求母种形态要求见表1。表 1香菇母种形态要求项目要求检验方法容器完整、无破损、无裂纹、洁净肉眼观察棉塞或硅胶塞干燥、整洁
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