JJF 1654-2017平板电泳仪校准规范-(高清版).pdf
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1、中华人民共和国国家计量技术规范J J F1 6 5 42 0 1 7平板电泳仪校准规范C a l i b r a t i o nS p e c i f i c a t i o nf o rP l a t eE l e c t r o p h o r e s i sA p p a r a t u s 2 0 1 7-1 1-2 0发布2 0 1 8-0 2-2 0实施国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布平板电泳仪校准规范C a l i b r a t i o nS p e c i f i c a t i o nf o rP l a t eE l e c t r o p h o
2、r e s i sA p p a r a t u sJ J F1 6 5 42 0 1 7 归 口 单 位:全国生物计量技术委员会 主要起草单位:中国计量科学研究院南京市计量监督检测院 参加起草单位:河南省计量科学研究院广州计量检测技术研究院 本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释J J F1 6 5 42 0 1 7本规范主要起草人:盛灵慧(中国计量科学研究院)陈鸿飞(南京市计量监督检测院)参加起草人:王 晶(中国计量科学研究院)高运华(中国计量科学研究院)丁峰元(河南省计量科学研究院)张力玲(广州计量检测技术研究院)J J F1 6 5 42 0 1 7目 录引言()1 范围(1)2 引
3、用文件(1)3 术语和计量单位(1)3.1 漂移(1)3.2 电泳谱带(1)3.3 迁移距离(1)4 概述(1)5 计量特性(1)5.1 示值误差(1)5.2 漂移(1)5.3 迁移距离重复性(1)6 校准条件(1)6.1 环境条件(1)6.2 校准设备及标准物质(2)7 校准项目和校准方法(2)7.1 示值误差(2)7.2 漂移(3)7.3 迁移距离重复性(3)8 校准结果表达(4)9 复校时间间隔(4)附录A 水平板电泳仪校准溶液的配制(5)附录B 垂直板电泳仪校准溶液的配制(6)附录C 电压示值误差校准的不确定度评定示例(7)附录D 校准原始记录推荐格式(8)附录E 校准证书内页推荐格式
4、(9)J J F1 6 5 42 0 1 7引 言 本规范主要参考了G B/T2 9 2 4 82 0 1 2 基础电泳装置、J J G1 2 42 0 0 5 电流表、电压表、功率表及电阻表。本规范为首次发布。J J F1 6 5 42 0 1 7平板电泳仪校准规范1 范围本规范适用于平板电泳仪(水平板电泳仪和垂直板电泳仪)计量性能的校准,对于其他类型的电泳仪,可参照本规范执行。2 引用文件本规范引用了下列文件:J J G1 2 42 0 0 5 电流表、电压表、功率表及电阻表J J F1 0 7 12 0 1 0 国家计量校准规范编写规则G B/T2 9 2 4 82 0 1 2 基础电泳
5、装置凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本规范。3 术语和计量单位3.1 漂移d r i f t在规定的工作条件下,单位时间内电泳仪输出电压或电流的变化量。3.2 电泳谱带e l e c t r o p h o r e s i ss p e c t r u m电泳后载体上的样品所形成的条带。3.3 迁移距离m i g r a t i o n l e n g t h规定电泳条件下电泳谱带中心和加样孔中心的距离,单位毫米。4 概述电泳是指在分散体系中,荷电粒子在外加电场的作用下,向电极定向移动的现象。电泳仪是利用带电粒子如核
6、酸、蛋白等物质的带电性质不同,在同一电场条件下其移动方向和迁移率不尽相同的原理实现对带电粒子分离与鉴定的仪器。平板电泳仪通常分为水平板和垂直板两类,一般由电源、电泳槽等主要部件以及制胶、冷却部分等辅助部件组成。5 计量特性5.1 示值误差5.2 漂移5.3 迁移距离重复性6 校准条件6.1 环境条件1J J F1 6 5 42 0 1 7环境温度:(1 53 5)。相对湿度:不大于7 5%。6.2 校准设备及标准物质6.2.1 电源校准装置经检定合格的标准电压表、标准电流表。最小分辨力:电压0.1 V,电流0.1mA。6.2.2 有证标准物质3 0 0b p片段D NA标准物质(Ur3%,k=
7、2);细胞色素C相对分子质量标准物质(U2 0,k=2)。6.2.3 游标卡尺经检定合格的游标卡尺,分度值(分辨力)0.0 5mm。7 校准项目和校准方法7.1 示值误差7.1.1 输出电压示值误差按照图1方式连接电路,将平板电泳仪电源设为恒压模式,依次测定最大工作电压的1 0%、2 0%、3 0%、5 0%、8 0%时输出电压,每个校准点分别重复测量3次,计算其算术平均值,按公式(1)计算输出电压示值误差。U=U-Us(1)式中:U 平板电泳仪输出电压示值误差,V;U 平板电泳仪输出电压示值,V;Us 平板电泳仪输出电压实测值的平均值,V。图1 电压测试电路示意图7.1.2 输出电流示值误差
8、按照图2方式连接电路,将电泳仪电源设为恒流模式,依次测定电源最大工作电流1 0%、2 0%、3 0%、5 0%、8 0%处的输出电流,每个校准点分别重复测量3次,计算其算术平均值,按公式(2)计算输出电流示值误差。2J J F1 6 5 42 0 1 7图2 电流测试电路示意图I=I-Is(2)式中:I 平板电泳仪输出电流示值误差,mA;I 平板电泳仪输出电流示值,mA;Is 平板电泳仪输出电流实测值的平均值,mA。7.2 漂移按照图2方式连接电路,将平板电泳仪电源的输出电压(电流)设定为1 5 0V(5 0mA),采用电压表(电流表)监测其3 0m i n内的电压(电流)变化,记录电压表(电
9、流表)显示的最大值和最小值。按公式(3)计算电压(电流)的漂移。X=Xm a x-Xm i n(3)式中:X 电压(电流)的漂移;Xm a x 最大电压(电流);Xm i n 最小电压(电流)。7.3 迁移距离重复性7.3.1 水平板电泳仪将琼脂糖凝胶和适量1浓度的琼脂糖凝胶电泳缓冲液放入电泳槽,电泳缓冲液以高出凝胶表面(12)mm为宜。取浓度为1 0n g/L片段D NA标准物质溶液3 2L与5D NA上样缓冲液8L均匀混合配制工作标准溶液。移取5L工作标准溶液加载到胶孔中,平行加载6个样品孔,盖好电泳槽盖子。根据电泳槽大小按7V/c m的标准选择适当的电泳电压,运行3 0m i n或当色素
10、距凝胶前端约1/5处时,停止电泳。随后将凝胶样品放在成像系统下成像(如果之前没有加入染料,在进行此步骤之前需要将凝胶放入适当染料中染色3 0m i n)。按公式(4)计算片段D NA标准物质谱带的平均迁移距离重复性(R S D)。R S D=ni=1di-d()2n-11d1 0 0%(4)3J J F1 6 5 42 0 1 7 式中:di i泳道标准物质迁移距离,mm;n 泳道数;d 标准物质谱带的平均迁移距离,mm。7.3.2 垂直板电泳仪将S D S-聚丙烯酰胺凝胶放入垂直板电泳仪,加入适当1浓度的T r i s-G l y c i n e电泳缓冲液,以高出凝胶表面(12)mm为宜。将
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