JJF 1564-2017 平板电泳仪校准规范(现行有效).pdf
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1、55P中华人民共和国国家计量技术规范JJF 16542017平板电泳仪校准规范Calibration Specification for Plate Electrophoresis Apparatus2017-11-20 发布2018-02-20 实施国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局 发 布JJF 16542017平板电泳仪校准规范Calibration Specification for Plate Electrophoresis ApparatusJJF 16542017归 口 单 位:全国生物计量技术委员会 主要起草单位:中国计量科学研究院 南京市计量监督检测院 参加起草单
2、位:河南省计量科学研究院 广州计量检测技术研究院本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释JJF 16542017本规范主要起草人:盛 灵 慧(中国计量科学研究院)陈 鸿 飞(南京市计量监督检测院)参加起草人:王晶(中国计量科学研究院)高 运 华(中国计量科学研究院)丁 峰 元(河南省计量科学研究院)张 力 玲(广州计量检测技术研究院)JJF 16542017目 录弓 i w.(n)i范围.(i)2 引用文件.(1)3 术语和计量单位.(1)3.1 漂移.(1)3.2 电泳谱带.(1)3.3 迁移距离.(1)4 概述.(1)5计量特性.(1)5.1 示值误差.(1)5.2 漂移.(1)5.3 迁
3、移距离重复性.(1)6 校准条件.(1)6.1 环境条件.(1)6.2 校准设备及标准物质.(2)7 校准项目和校准方法.(2)7.1 示值误差.(2)7.2 漂移.(3)7.3 迁移距离重复性.(3)8 校准结果表达.(4)9 复校时间间隔.(4)附 录 A水平板电泳仪校准溶液的配制.(5)附 录 B垂 直 板 电 泳 仪 校 准 溶 液 的 配 制.(6)附 录 C电压示值误差校准的不确定度评定示例.(7)附 录 D校 准 原 始 记 录 推 荐 格 式.(8)附 录 E 校准证书内页推荐格式.(9)IJJF 16542017引 言本规范主要参考了 GB/T 292482012 基础电泳装
4、置、JJG 1242005 电流表、电压表、功率表及电阻表。本规范为首次发布。nJJF 16542017平板电泳仪校准规范1范围本规范适用于平板电泳仪(水平板电泳仪和垂直板电泳仪)计量性能的校准,对于 其他类型的电泳仪,可参照本规范执行。2引用文件本规范引用了下列文件:JJG 1242 0 0 5 电流表、电压表、功率表及电阻表 JJF 10712 0 1 0 国家计量校准规范编写规则 GB/T 292482012 基础电泳装置凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本规范;凡是不注日期的引用文 件,其 最 新 版 本(包括所有的修改单)适用于本规范。3术语和计量单位3.1 漂移 drift
5、在规定的工作条件下,单位时间内电泳仪输出电压或电流的变化量。3.2 电泳谱带 electrophoresis spectrum 电泳后载体上的样品所形成的条带。3.3 迁移距离 migration length规定电泳条件下电泳谱带中心和加样孔中心的距离,单位毫米。4概述电泳是指在分散体系中,荷电粒子在外加电场的作用下,向电极定向移动的现象。电泳仪是利用带电粒子如核酸、蛋白等物质的带电性质不同,在同一电场条件下其移动 方向和迁移率不尽相同的原理实现对带电粒子分离与鉴定的仪器。平板电泳仪通常分为 水平板和垂直板两类,一般由电源、电泳槽等主要部件以及制胶、冷却部分等辅助部件 组成。5计量特性5.1
6、 示值误差5.2漂移5.3迁移距离重复性 6校准条件6.1环境条件JJF 16542017环境温度:(1535)C。相对湿度:不大于7 5%。6.2校准设备及标准物质6.2.1电源校准装置经检定合格的标准电压表、标准电 流 表。最 小 分 辨 力:电压0.1 V,电流 0.1 mA6.2.2有证标准物质300 bp片段DNA标 准 物 质(汄 3%,=2);细胞色素C相对分子质量标准物质(U 2 0,=2)。6.2.3游标卡尺经检定合格的游标卡尺,分 度 值(分辨力)0.05 mm。7校准项目和校准方法7.1 示值误差7.1.1输出电压示值误差按照图1 方式连接电路,将平板电泳仪电源设为恒压模
7、式,依次测定最大工作电压 的 1 0%、2 0%、3 0%、5 0%、8 0%时输出电压,每个校准点分别重复测量3 次,计算 其算术平均值,按 公 式(1)计算输出电压示值误差。AU=U-US(1)式中:AU平板电泳仪输出电压示值误差,V;U平板电泳仪输出电压示值,V;us平板电泳仪输出电压实测值的平均值,V。电源220 V(0图 1电压测试电路示意图7.1.2输出电流示值误差按照图2 方式连接电路,将电泳仪电源设为恒流模式,依次测定电源最大工作电流 1 0%、2 0%、3 0%、5 0%、8 0%处的输出电流,每个校准点分别重复测量3 次,计算其 算术平均值,按 公 式(2)计算输出电流示值
8、误差。电泳槽电泳仪2JJF 16542017电源220 V(0图 2电流测试电路示意图AI=I h(2)式中:AJ-平板电泳仪输出电流示值误差,mA;-平板电泳仪输出电流7K值,mA;Is平板电泳仪输出电流实测值的平均值,mA。7.2漂移按照图2 方式连接电路,将 平 板 电 泳 仪 电 源 的 输 出 电 压(电流)设 定 为 150 V(50 mA),采 用 电 压 表(电流表)监 测 其 30 m in内 的 电 压(电流)变化,记录电压表(电流表)显示的最大值和最小值。按 公 式(3)计 算 电 压(电流)的漂移。x=x m a-x m in(3)式中:X电 压(电流)的漂移;x ma
9、x最 大 电 压(电流);x min最 小 电 压(电流)。7.3迁移距离重复性 7.3.1水平板电泳仪将琼脂糖凝胶和适量IX浓度的琼脂糖凝胶电泳缓冲液放人电泳槽,电泳缓冲液以 高出凝胶表面(12)mm为宜。取浓度为10ng/iuL片段DNA标准物质溶液32iuL与 5 XDNA上样缓冲液8 pL均匀混合配制工作标准溶液。移 取 5 pL工作标准溶液加载到 胶孔中,平行加载6 个样品孔,盖好电泳槽盖子。根据电泳槽大小按7 V/cm的标准选 择适当的电泳电压,运 行 30 min或当色素距凝胶前端约1/5处时,停止电泳。随后将 凝胶样品放在成像系统下成像(如果之前没有加人染料,在进行此步骤之前需
10、要将凝胶 放入适当染料中染色30 min)。按 公 式(4)计算片段DNA标准物质谱带的平均迁移距 离 重 复 性(RSD)。RSDSJ(d i d)-1X=X 100%d(4)电泳槽电泳仪3JJF 16542017式中:d t-i泳道标准物质迁移距离,mm;n-泳道数;d标准物质谱带的平均迁移距离,mm。7.3.2垂直板电泳仪将SDS-聚丙烯酰胺凝胶放入垂直板电泳仪,加人适当IX浓度 的Tris-Glycine电泳 缓冲液,以高出凝胶表面(12)mm为宜。将细胞色素C相对分子质量标准物质配制 成 1 mg/mL的标准物质溶液与0.1%溴酚蓝溶液1:1 混合,100 C加 热 5 min,将混
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