水质浮游植物的测定滤膜-显微镜计数法(HJ 1215-2021.pdf
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1、中华人民共和国国家生态环境标准 HJ 12152021 水质 浮游植物的测定 滤膜-显微镜计数法 Water qualityDetermination of phytoplankton Filtration membrane-Microscope counting method 本电子版为正式标准文本,由生态环境部环境标准研究所审校排版。2021-11-29 发布 2022-06-01 实施 生 态 环 境 部 发 布 HJ 12152021 i 目 次 前 言.ii 1 适用范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 方法原理.1 5 试剂和材料.2 6 仪器和设备.2 7 样
2、品.3 8 分析步骤.4 9 结果计算与表示.6 10 精密度.6 11 质量保证和质量控制.7 12 废物处置.7 附录 A(规范性附录)方法检出限计算方法.8 附录 B(资料性附录)惠普尔目镜分划板标定.9 附录 C(资料性附录)丝状体、似球形群体浮游植物细胞数量估算.12 参考文献.13 HJ 12152021 ii 前 言 为贯彻中华人民共和国环境保护法 中华人民共和国水污染防治法,防治生态环境污染,改善生态环境质量,规范水中浮游植物的测定方法,制定本标准。本标准规定了测定地表水中浮游植物的滤膜-显微镜计数法。本标准的附录 A 为规范性附录,附录 B 和附录 C 为资料性附录。本标准为
3、首次发布。本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。本标准主要起草单位:浙江省生态环境监测中心。本标准验证单位:上海市环境监测中心、浙江省海洋监测预报中心、浙江省杭州生态环境监测中心、浙江省宁波生态环境监测中心、江苏省常州环境监测中心和自然资源部第二海洋研究所。本标准生态环境部 2021 年 11 月 29 日批准。本标准自 2022 年 6 月 1 日起实施。本标准由生态环境部解释。HJ 12152021 1 水质 浮游植物的测定 滤膜-显微镜计数法 1 适用范围 本标准规定了测定水中浮游植物的滤膜-显微镜计数法。本标准适用于地表水中浮游植物的快速测定。当样品最大过滤体积为 1
4、000 ml 时,方法检出限为 40 cells/L。方法检出限计算方法详见附录 A。2 规范性引用文件 本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本标准。凡是未注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。GB/T 14581 水质 湖泊和水库采样技术指导 HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范 HJ 494 水质 采样技术指导 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。3.1 浮游植物 phytoplankton 在水中营浮游生活的微小藻类植物,通常浮游植物就是浮游藻类,包括原核的蓝藻和其它各类真核藻类。3.2 计数单位 counti
5、ng unit 显微镜视野下选择计数的最小单元,如细胞。3.3 浮游植物密度 density of phytoplankton 单位体积内浮游植物的细胞数,cells/L。3.4 显微镜计数视野 microscope counting field 显微镜视野中限定一定面积的区域,用来定量计数浮游植物。4 方法原理 样品通过一定孔径的滤膜,群体、丝状体及单细胞浮游植物截留在滤膜上,滤膜经透明处理后在显微镜下镜检。HJ 12152021 2 5 试剂和材料 除非另有说明,分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂,实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水。5.1 碘(I2)。5.2 碘化钾(KI)。5.3 甲
6、醛溶液:w(HCHO)37%40%。5.4 鲁哥氏碘液:称取 60 g 碘化钾(5.2)溶解在 100 ml 水中,再加入 40 g 碘(5.1),充分搅拌使其完全溶解,加水定容至 1000 ml,转移至棕色磨口玻璃瓶,室温避光保存。5.5 显微镜浸没油:nD23=1.515 或nE23=1.518,配透明玻璃滴棒。5.6 滤膜:混合纤维素酯膜,直径 25 mm,孔径 0.45 m3 m。注:每批次滤膜应进行水化测试和油透明测试,满足可水化和可透明要求后方可使用。将 1 张未使用的滤膜放入盛水的烧杯中,若滤膜被水完全浸润,则滤膜可水化。取 1 张未使用的滤膜,置于滴有显微镜浸没油的载玻片上,若
7、滤膜被浸没油完全浸润,则滤膜可透明。6 仪器和设备 6.1 25 号浮游生物网:网孔直径 0.064 mm,网呈圆锥形,网口套在铜环上,网底端有出水开关活塞。6.2 定性采样瓶:30 ml100 ml 广口聚乙烯瓶。6.3 采水器:不锈钢或有机玻璃材质,圆柱形。容量和深度规格要满足采样要求。6.4 定量采样瓶:1 L2 L 广口聚乙烯瓶。6.5 冷藏箱。6.6 真空抽滤装置:包括漏斗(直径 25 mm,容积 200 ml)、多孔聚酯滤膜支撑板、收集瓶、真空泵(相对真空度17 kPa,可调)。6.7 载玻片:25 mm76 mm。注:载玻片和盖玻片使用前应用浓盐酸和乙醇浸泡。若条件允许,选择可直
8、接使用的载玻片或盖玻片。6.8 盖玻片:25 mm25 mm。6.9 无齿组织镊子。6.10 载玻片晾片板:适配同规格载玻片。6.11 烘箱:70 2,温度可调。6.12 正置生物显微镜或倒置生物显微镜:物镜 4、10、20、40;目镜 10或 15。6.13 载物台测微计:又称镜台测微计,1 mm/100 DIV,分划值为 0.01 mm。注:DIV 指等分格,1 mm/100 DIV 即 1 mm 等分成 100 格。6.14 惠普尔目镜分划板(Whipple grid):边长为 7 mm10 mm 的正方形大格,划分为 100 个相同的正方形中格,位于中央的 1 个中格进一步划分为 25
9、 个相同的正方形小格。注:不具备惠普尔目镜分划板时,亦可使用同规格的网格型目镜分划板(即中央的中格未细分为 25 小格的网格型目镜分划板)。6.15 计数器。6.16 一般实验室常用设备。HJ 12152021 3 7 样品 7.1 样品采集 7.1.1 定性样品 点位布设及采样频次按照 GB/T 14581、HJ/T 91 和 HJ 494 的相关规定执行。使用 25 号浮游生物网(6.1)采集定性样品。关闭浮游生物网底端出水活塞开关,在水面表层至0.5 m 水深处以 20 cm/s30 cm/s 的速度做“”形往复,缓慢拖动约 1 min3 min,待网中明显有浮游植物进入,将浮游生物网(
10、6.1)提出水面,网内水自然通过网孔滤出,待底部剩少许水样(5 ml10 ml)时,将底端出口移入定性采样瓶(6.2)中,打开底端活塞开关收集定性样品。采集分层样品时,用 25 号浮游生物网(6.1)过滤特定水层样品,其他步骤同采集表层样品。定性样品采集完成后及时将浮游生物网清洗干净。样品采集后放入冷藏箱(6.5)冷藏避光运输。如有定性样品采集技术规范,按技术规范有关要求执行。7.1.2 定量样品 按照 GB/T 14581、HJ/T 91 和 HJ 494 的相关规定采集定量样品。使用采水器(6.3)采集 1 L2 L 样品至定量采样瓶(6.4)中。若水体透明度较高,浮游植物数量较少时,应酌
11、情增加采样体积。定量样品采集完成后,定量采样瓶(6.4)不应装满,以便摇匀。注 1:有些浮游植物(如蓝藻)常上浮在水面或成片、条带分布,可在此水华密集区域采样作为峰值参考。注 2:定量样品采集应在定性样品采集之前。应保持固定时间段采样,以便结果之间可相互比较。7.2 样品保存 7.2.1 定性样品 定性样品采集后应立即加入鲁哥氏碘液(5.4)固定,用量为水样体积的 1.0%1.5%。镜检活体样品不加鲁哥氏碘液(5.4)固定。定性样品在室温避光条件下可保存 3 周;1 5 冷藏避光条件下可保存 12 个月。活体样品 4 10 冷藏避光条件下可保存 36 h。7.2.2 定量样品 定量样品采集后立
12、即加入鲁哥氏碘液(5.4)固定,用量为水样体积的 1.0%1.5%。也可将鲁哥氏碘液(5.4)提前加入定量采样瓶(6.4)中带至现场使用。定量样品在室温避光条件下可保存 3 周;1 5 冷藏避光条件下可保存 12 个月。样品在保存过程中,应每周检查鲁哥氏碘液(5.4)的氧化程度,若样品颜色变浅,应向样品中补加适量的鲁哥氏碘液(5.4),直到样品的颜色恢复为黄褐色。注:若样品需长期保存,应加入甲醛溶液(5.3),用量为水样体积的 4%。HJ 12152021 4 8 分析步骤 8.1 试样制备 8.1.1 预检 按照 8.1.28.1.5 的要求完成预检装片,判断样品浮游植物密度,便于样品的后续
13、分析。8.1.2 混匀样品 每次取样前,采用上下颠倒至少 30 次的方式充分混匀样品,混匀动作要轻。8.1.3 过滤体积 根据预检估算浮游植物密度,调整样品过滤体积,最终使滤膜上约有 40 个105个浮游植物细胞。不同预检估计密度水平下推荐的样品过滤体积见表 1。表 1 推荐选用的样品过滤体积 预估浮游植物细胞密度水平(cells/L)推荐的样品过滤体积 V0(ml)108及以上 0.52 107 510 106 525 105 1050 104 5100 103 50200 102 500 40 1000 注 1:样品过滤体积大于漏斗容量时,应保证后续样品加入时不扰动滤膜上的浮游植物。注 2
14、:样品过滤体积小于 5 ml 时,以实验用水再悬浮样品。首先用移液器(6.16)量取一定体积的样品至 10 ml50 ml 规格的离心管中,再加入一定体积的实验用水,使悬浮后样品总体积在 5 ml 及以上即可,最后用胶头滴管(6.16)加入 2 滴3 滴鲁哥氏碘液(5.4)固定。8.1.4 样品过滤 用量筒或移液器(6.16)快速量取适量样品体积,将样品加入装有滤膜(5.6)的真空抽滤装置(6.6)漏斗中,静置 2 min3 min,真空抽滤,至漏斗中有 0.5 cm 液层时关闭真空泵,使剩余液体完全通过漏斗,切忌抽干滤膜。8.1.5 装片制备 样品过滤完成后,用无齿组织镊子(6.9)取下滤膜
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