免疫细胞功能检测技术课件:细胞免疫学技术.pdf
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1、课件5774免疫细胞功能检测技术第一节淋巴细胞的功能检测一、T细胞功能检测二、B细胞功能检测三、NK细胞活性测定课件5774课件5775第二节吞噬细胞功能检测技术一、中性粒细胞功能检测二、巨噬细胞功能检测第三节免疫细胞功能检测的临床应用思考题 小结课件5775课件5776对淋巴细胞群,中性粒细胞、巨 噬细胞、树突状细胞等功能测定可 以有效评价机体特异性和非特异性 免疫功能。课件5776课件5777第一节 淋巴细胞的功能检测淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外 实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对 抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应;体 外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂 原刺激后的增殖反
2、应、细胞毒性试验及淋巴 细胞分泌产物的测定课件5777课件5778淋巴细胞AT细胞(负责细胞免疫功能)AB细胞(执行体液免疫功能)ANK和K细胞(非特异性免疫作用)课件5778课件5779、T细胞功能的检测AT细胞增殖试验AT细胞分泌功能测定AT细胞介导的细胞毒试验A体内试验课件5779课件5780T淋巴细胞增殖试验1.原理:刺激物淋巴细胞DNA合成母细胞分化课件5780细胞变大 细胞浆扩大 空泡 核仁明显 核染色质疏松课件5781未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞-未转化的淋巴细胞淋巴母细胞 过渡型细胞大小(直径um)核大小、染色质核仁有丝分裂胞质、着色浆内空泡伪足12 20增大、
3、疏松 清晰、14个 有或无 增多、嗜碱 有或无 有或无12 16增大、疏松 有或无 无增多、嗜碱 有或无 有或无68不增大、密集无无极少、天青色无无课件5781课件57822.淋巴细胞转化的刺激物非特异性刺激物:PHA-T细胞ConA-T细胞PWM-T、B 细胞LPS-B细胞特异性刺激物:异种抗原同种组织抗原课件5782课件57833.检测方法形态法:刺激物一 淋巴细胞(4-6天厂一 母细胞-同位素法:PHA 麻巴细胞(54h)DNA合成期+3 HTdR掺入收集弱胞检测B射线测定细胞内的3 H-TdR课件5783课件5784(1)形态学检查法转化率=转化的淋巴细胞数转化和未转化的淋巴细数xlO
4、O%图15-1淋巴细胞转化的形态特征示意图课件5784课件5785方法学评价:优点:形态学方法简便易行,普通光 学显微镜便能观察结果,适于基层实验 室应用。缺点:是依靠肉眼观察形态学变化,判断结果易受主观因素影响,重复性和 准确性较差。课件5785课件5786(2)3 H-TdR掺入法ST试验孔A 570nm均值 一对照孔A 57。.均值A优点:3H-TdR掺入法敏感性高,客观性 强,重复性好。A缺点:但需一定设备条件,同时还存在 放射性核素污染问题。课件5786课件5787(二)T细胞分泌功能测定体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺 激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞 生物学及分子生
5、物学技术分别检测细胞因子含 量、生物学活性或基因表达水平,以反映T细 胞功能。课件5787课件5788(三)T细胞介导的细胞毒试验1.原理:靶细胞抗原T细胞 一,致敏CTL靶细胞观察杀伤活力课件5788课件57892.方法形态学方法:淋巴细胞+肿瘤细胞计数残留肿瘤细胞 同位素法:淋巴细胞(CTL)+含51Cr的肿瘤细胞肿瘤细胞破释放测定丫射线意义:肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力课件5789课件5790Noeffector cells=backgroundEffector/targetratio1:1Effector/target ratio 5:1Effector/target ratio
6、20:1;r Maximal cell lysis +Triton 图15-2 T细胞细胞毒试验示意图课件5790课件5791(四)体内试验A特异性抗原皮肤试验APHA皮肤试验课件5791课件5792二、B细胞功能检测AB细胞增殖能力的试验A溶血空斑试验AB细胞抗体形成功能的检测体内试验课件5792课件5793(一)B细胞增殖能力的试验抗IgM 细菌脂多糖-B细胞增殖SAC的SPA J r形态学3H-TdR掺入法课件5793课件5794(二)1.原理:溶血空斑试验Sheep erythrocytes coated with anti-lg serum课件5794课件57952.方法学:经典溶血
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