某医院检验科临检室作业指导书.pdf
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1、临检室作业指导书文件编号:ABCD-3-LJ-0150第A版编制:审核:批准:ABCD人 民医院检验科ABCD人民医院检验科 临检室作业指导书文件编号:版本/修订号:A/0主题内容n 录生效口期:20060808第2页共143页目 录序号主题内容代号页号1血红蛋白电泳检查(电泳法)AB C D-3-L J-0152精液常规检查AB C D-3-L J-0293粪便常规检查(直接涂片法)AB C D-3-L J-03124粪便潜血试验定性(纸片法)AB C D-3-L J-04145尿沉渣检查(UD-S仪器法)AB C D-3-L J-05166血疟原虫(MP)厚血片检查法AB C D-3-L
2、J-06217血疟原虫(MP)薄血片检查法AB C D-3-L J-07238尿人绒毛膜促性腺激素定性AB C D-3-L J-08259阴道分泌物常规检查AB C D-3-L J-092710一小时尿沉渣计数AB C D-3-L J-102911Xt2000i红细胞计数AB C D-3-L J-113112Xt2000i白细胞检验AB C D-3-L J-123313Xt2000i白细胞分类计数AB C D-3-L J-133614Xt2000i血红蛋白检测AB C D-3-L J-143915全血血细胞沉降率测定AB C D-3-L J-154116Xt2000i红细胞比积的测定AB C
3、D-3-L J-164317Xt2000i平均红细胞体积检测AB C D-3-L J-174618Xt2000i血小板(P L T)测定AB C D-3-L J-184819红细胞平均血红蛋白含量测定AB C D-3-L J-195120红细胞平均血红蛋白浓度测定AB C D-3-L J-205321尿液酸碱度测定(干法学法)AB C D-3-L J-215522尿葡萄糖定性实验(干化学法)AB C D-3-L J-225823尿蛋白定性测定(干法学法)AB C D-3-L J-236124尿血红蛋白测定(干化学法)AB C D-3-L J-2464ABCD人民医院检验科 临检室作业指导书文件
4、编号:版本/修订号:A/0主题内容n 录生效口期:20060808第3页共143页25尿胆原定性测定(干法学法)AB C D-3-L J-256726脑脊液蛋白定性试验(潘氏法)AB C D-3-L J-267027脑脊液外观检查(目测法)AB C D-3-L J-277328脑脊液有形成分检查(显微镜法)AB C D-3-L J-287529尿亚硝酸盐定性测定(干法学法AB C D-3-L.T-297930凝血酶原时间(P T)测定AB C D-3-L J-308131活化部分凝血活酶时间测定AB C D-3-L J-318532凝血酶时间(TT)测定AB C D-3-L J-328933血
5、浆纤维蛋白原(Fbg)测定AB C D-3-L J-339334骨髓巨核细胞计数AB C D-3-L J-349735过氧化物酶染色(W ashburn法)AB C D-3-L J-359936糖原染色(Schif f法)AB C D-3-L J-3610137中性粒细胞碱性磷酸酶染色AB C D-3-L J-3710338尿微量白蛋白定量AB C D-3-L J-3810539全血C-反应蛋白定量AB C D-3-L J-3911040尿乳糜定性检查AB C D-3-L J-4011441前列腺液常规检查(玻片法)AB C D-3-L J-4111642血浆硫酸鱼精蛋白副凝固时间AB C D
6、-3-L J-4211743异常白细胞检查(显微镜法)AB C D-3-L J-4311944异常红细胞检查(显微镜法)AB C D-3-L J-4412345浆膜腔积液粘蛋白定性检查AB C D-3-L J-4512846浆膜腔积液化学检查AB C D-3-L J-4613147浆膜腔积液外观检查(目测法)AB C D-3-L J-4713448浆膜腔积液有形成分检查AB C D-3-L J-4813649血球分析仪操作维护规程AB C D-3-L J-4913950血球分析仪操作手册AB C D-3-L J-50143ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号:AB C D-3-L J
7、-01 版本/修订号:A/0主题内容 血红蛋白电泳检查生效口期:20060808 第4页共143页修订页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期123456789101112131415161718192021ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号:AB C D-3-L J-01版本/修订号:A/0主题内容血红蛋白电泳检查生效口期:20060808第5页共143页血红蛋白电泳检查(电泳法)1.原理血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子 的卜啾。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称 之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括a
8、、6、6和丫。血红蛋白的结构、分子 特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白,其表面电荷不同,在电场中的泳动率不同。本实验在碱性(P H=8.60)条件下,以琼 脂糖凝胶电泳的方法进行,对红细胞洗涤后造成溶血,电泳分离血红蛋白后以氨基 黑染色。多余的染色液用酸性液体洗去。待琼脂糖凝胶板干燥后,肉眼可直接判别 有无电泳条带异常。运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。血红 蛋白异常有二种类型:血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中 的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常,称之为地中海贫血。2.标本采集2.1标本采集前病人准备:受检者应空腹。2.
9、2标本种类:抗凝血2.3标本要求:抗凝剂选用E DTA,柠檬酸或肝素均可,避免碘乙酸。常规静脉采血 1.8ml,加入含有109mmol/L枸椽酸钠溶液0.2ml的干燥。清洁试管中,充分混匀。4.标本储存:储存于2-8冰箱中,5天。5.标本运输:储存于2-8状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。6.标本拒收标准:细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。7.试剂7.1试剂名称:血红蛋白电泳检查试剂7.2试剂生产厂家:法国Se bia公司7.3包装规格:150te sts7.4试剂盒组成琼脂糖凝胶 10块缓冲液条带 10包X2条氨基黑(浓缩液)1瓶XlOOml7.5试剂储存条件及有效期:贮存于室温 冻。有效期两
10、年。溶血素 1瓶薄滤纸 1X10张点样模具滤纸 10条XI盒(1530)或冰箱(28),不能冷ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号:AB C D-3-L J-01版本/修订号:A/0主题内容血红蛋白电泳检查生效口期:20060808第6页共143页8.仪器设备8.1仪器名称:SE B IA电泳仪8.2仪器厂家:法国Se bia公司8.3仪器型号:HYDRASYS9.操作步骤9.1血红蛋白液制作:抗凝血离心,5000rpm,5分钟,去掉血浆,用10倍体积的 生理盐水洗涤红细胞3次,若红细胞体积小于10ul,需特别小心。取10ul红细胞 加入130ul溶血液造成溶血。震荡混匀10秒钟,室
11、温下培育5分钟待测。9.2启动电泳仪9.3将加样器放在一平板上,有数字的一端向上。各加样孔加入10ul溶血的样品,2分钟内加样完毕。将加样器放入保湿盒内,齿端向上(转运时用塑料齿保护架)。等待5分钟,使样品扩散至齿端。打开电泳仪盖,抬起电极和加样器支架。9.4使用HYDRAGE L 15 HE MOGL OB IN C E时选择仪器的“HB TOTAL”程序(位于链盘左 侧)。9.5从包装袋内取出缓冲条,拿出末端的塑料片,将缓冲条两端塑料片固定在电极 支架背侧的钉上,塑料片应紧贴支架。9.6取出凝胶板。将薄的滤纸轻轻吸去凝胶板表面的多余液体,然后立即丢弃滤纸。在电泳仪温度控制板表面的边线内加2
12、00ul蒸储水或去离子水。凝胶面朝上,放置 凝胶板,边缘对齐边线。略略将凝胶弯曲,然后放平,使水均匀分布在凝胶板下面 而不含气泡。9.7降低支架,使缓冲条不接触到凝胶板。9.8从保温盒里取出加样器。取时拿保护框。折断加样器齿端保护框。将加样器放 在4号位置。9.9关上电泳仪盖子,按下键盘左侧的绿色箭头START”键,电泳开始。9.10凝胶染色扫描9.10.1打开盖子9.10.2取出并丢弃加样器9.10.3升高两个支架,握住塑料端取出并丢弃缓冲条。9.10.4打开凝胶托架,平放,将干燥的凝胶片放入两层间,然后关上托架。9.10.5将凝胶支架放入染色池9.10.6取出凝胶支架,打开盖子,取出干燥的
13、凝胶片。9.10.7在光密度仪的570nm处或以黄色滤光片扫描测定。使用HYDRYS,DVSE或ABCD人民医院检验科临检室作业指导书文件编号:AB C D-3-L J-01版本/修订号:A/0主题内容血红蛋白电泳检查生效口期:20060808第7页共143页P RE FE RE N C E光密度仪时,使A2片段的标记置于扫描板5mm的标志处。10.结果判断与参考范围扫描得到的只是每种血红蛋白条带的相对浓度值。取出胶片后,首先清洁胶片的 背面。判断溶血液的浓度是否合适,主要看基质带的浓度,如基质带浓度过淡,说 明溶血液的浓度太淡。正常时A2浓度大约为基质带浓度的1-2倍。半岁-成人:HbA 叁
14、 94.5%,HbF 2.0%,HbA2 3.5%1 个月:HbA 12-40%,HbF 60-93%,HbA2 0.1-1.0%6 个月:HbA 86-98%,HbF 0.84-10.7%,HbA2 0.87-2.9%脐带血:HbA 4-40%,HbF 30-96%,HbA2 15%,应怀疑有血红蛋白C或E的异常。12.3.3血红蛋白E:与血红蛋白C不同的是,E在酸性凝胶电泳中不与总分离。12.3.4血红蛋白D:在碱性缓冲条件下,血红蛋白D和S的条带重叠在一起,但D 在酸性凝胶电泳中不与A2分离。13.操作性能:灵敏度高、特异性强、操作简便,重复性好。14.注意事项:ABCD人民医院检验科临
15、检室作业指导书文件编号:AB C D-3-L J-01版本/修订号:A/0主题内容血红蛋白电泳检查生效口期:20060808第8页共143页14.1试剂贮存于室温(1530)或冰箱(28)内,不能冷冻。14.2不要应用溶血标本14.3若检测到异常血红蛋白,而又与常见的异常血红蛋白S,C,D或E不同,可使 用其他方法(如球蛋白链电泳)检测,或求助于有关专门实验室。14.4 HbF小于全部血红蛋白的2%-3%时,扫描检测HbF(或其它一些较少见的血 红蛋白)只是半定量的,结果不十分准确。14.5对于中度或重度贫血的病例,点样量应增大为15ul或20ul,其结果不受影响。14.6电泳过程中不能打开盖
16、子。在染色脱色以及干燥过程中,仪器的一些程序处 于锁定状态。14.7最后染色后立即扫描测定。若欲保存,可用一保护物覆盖后置于干燥、暗处,避免受热,可保存约3个月。ABCD人民医院检验科 临检室作业指导书文件编号:AB C D-3-L J-02版本/修订号:A/0主题内容精液常规检查生效口期:20060808第9页共143页精液常规检查1.实验原理纪录精液量、颜色、透明度、粘稠度和是否液化。显微镜检查包括精子计数、活动力、活动率、形态。2.标本采集2.1标本采集前病人准备:必须禁欲(包括遗精和手淫)37天。这是因为少于 48小时采取的精液,因相距时间太短,精液中精子的数量可能偏少,容易造成少 精
17、症的假象。如果超过7天,精子活率、活力都有所下降,也可造成弱精子症的 假象。精液检查应间隔一周或两周,要进行23次检查。因为一个人精子的产生 在一年中,可因季节、气候等,诸多因素的影响而有一些变化。2.2标本种类:精液2.3标本要求:用清洁干燥小瓶收集,不应采用避孕套内精液。3.标本储存:立即送检。4.标本运输:室温运输,冬季需保温运输。5.标本拒收标准:久置标本,污染标本,避孕套内标本。6.操作步骤7.1纪录精液量、颜色、透明度、粘稠度和液化时间。7.2精子活动率:取新鲜标本混匀后,在温玻片上用高倍镜观察100个精子,计 数活动精子与不活动精子的比例,计算精子活动的百分率。精子活动率=活动精
18、子数/(活动精子数+不活动精子数)X100%7.3取上述新鲜湿片标本,观察精子的活动力,可按下列五级报告:。级:精子完全不活动,加温后仍不活动;I级:精子运动不良,运动迟缓,原地打转或抖动,向前运动能力差;H级:精子活动较好,运动速度尚可,游动方向不定,呈直线或非直线运动,带有回旋;III级:为中速运动;IV级:精子活动好,快速直线运动,很快超越一个视野,活泼有力。7.4精子计数:7.4.1于试管内加精子稀释液0.38ml,吸液化精液20膜,加入稀释液内摇匀。7.4.2充分摇匀后,滴入血细胞计数池内,静置l-2min,待精子下沉后,以精子ABCD人民医院检验科 临检室作业指导书文件编号:AB
19、C D-3-L J-02版本/修订号:A/0主题内容精液常规检查生效口期:20060808第10页共143页头部作为基准进行计数。7.4.3如精子数少,可计数两个大方格内精子数,总数乘以10万即为每毫升精液 内精子数,再换算成XIO/L报告。7.4.4如精子数多,可计数5个中方格内精子数,总数乘以100万即为每毫升精液 内精子数,再换算成X109/L报告。7.5精子形态观察:革兰氏或瑞氏染色后用油镜观察。异常精子可有:头部过大、过小、尖细、外缘不齐、双头等;中部消失、分枝或肿胀;尾部呈双尾,卷曲度 短或消失(缺尾)。7.6细胞:红、白细胞5/高倍视野。7.7 pH:7.2-8.0,平均 7.8
20、。7.8其它成分:精液中可有结晶体、卵磷脂小体、淀粉样体、脂滴、脱落上皮细 胞等。8.结果判断与分析8.1 一般性状检查8.1.1量:正常人一次排精25ml。8.1.2颜色和透明度:正常刚射出的精液呈乳白色或灰白色,液化后呈半透明乳 白色,久未排精者可呈淡黄色。鲜红色或暗红色的血精见于生殖系统炎症、结核、和肿瘤,黄色脓样精液,见于精囊炎或前列腺炎。8.1.3粘稠度和液化:正常新鲜的精液排出后数秒呈粘稠胶冻状,在精液中纤溶 酶的作用下30分钟后开始液化。如果粘稠度降低呈米汤样,可能是精子数量减少,见于生殖系统炎症,精液不凝固见于精囊阻塞或损伤;如果精液1小时后不液化,可能是由于炎症破坏纤溶酶所致
21、,如前列腺炎,精子不液化可以抑制精子活动力 而影响受孕。8.1.4酸碱度:pH值。正常精液呈弱碱性pH 7.2-8.0,以利于中和酸性的阴道分 泌物,pH值小于7或大于8都能影响精子的活动和代谢,不利于受孕。8.2显微镜检查。8.2.1精子存活率:排精后3060分钟,正常精子存活率应为80%90%,精 子存活率降低是导致不育的重要原因。8.2.2精子活动力:正常精子活动力应在IH级以上,若40%的精子活动不良,常是导致男性不育的重要原因。精子活动力低,主要见于精索静脉曲张、泌尿生 殖系统非特异性感染,应用某些药物如抗疟药、雄激素等所致。8.2.3精子计数:正常人精子计数为10 130 X 10
22、9/L,相当于一次排出的精子总ABCD人民医院检验科 临检室作业指导书文件编号:AB C D-3-L J-02版本/修订号:A/0主题内容精液常规检查生效口期:20060808第11页共143页数为400 X 106-600 X 106o当精子计数值20X 或一次排精总数 100 X 1()6为精子减少,超过致孕极限而导致不育。精液直接涂片或离心沉淀后均未查到精 子为无精症。见于先天性睾丸发育不全、畸形或后天睾丸损伤和萎缩(如睾丸结核、炎症、淋病、垂体或肾上腺功能异常的内分泌性疾病等)、输精管阻塞或是先天性 输精管及精囊缺陷,是导致少精或无精的重要原因,也是导致不育的重要原因。检杳有无精子也是
23、检杳输精管结扎术的效果观察。结扎六周后,连续检杳无精子,说明手术成功,如果结扎两个月后,精液中仍有精子,说明手术不成功。8.2.4精子形态:正常精液中,异常形态精子应少于10%15%,如果精液中异 常形态精子数20%,将会导致不育,可能是由于精索静脉曲张、血液中有毒代谢 产物、铅污染等或应用大剂量放射线及使用细胞毒性药物导致的精子形态异常。如果精液中发现1%的病理性未成熟细胞,包括精原细胞、精母细胞和发育不完 全的精细胞,提示睾丸的曲细精管的生精功能受到药物或其他因素影响或损伤。如果精子凝集10%,提示生殖道感染或免疫功能异常。9.注意事项9.1出现一次异常结果,应隔一周后复查,反复查2-3次
24、才能得出比较正确的结 果。9.2如低倍镜、高倍镜检查均无精子,应将精液离心沉淀后再涂片检查,如两次 均无精子,报告“无精子”。10.操作性能:快速简便11.方法局限性:易受人为主观经验不足影响结果判断。12.参考文献中国人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程(第二 版).1997,149-150ABCD人民医院检验科 临检室作业指导书文件编号:AB C D-3-L J-03版本/修订号:A/0主题内容粪便常规检查生效口期:20060808第12页共143页粪便常规检查(直接涂片法)1.实验原理:本实验是利用肉眼观察粪便的颜色和性状,以及利用粪便生理盐水 涂片在显微镜下观察涂片中是否有虫
25、卵、幼虫、各种细胞、包囊、结晶等。2.标本采集2.1标本采集前病人准备:无须特殊准备。2.2标本种类:粪便2.3标本要求:标本应取自粪便的不同部位特别是病理性改变比较明显的部位。3.标本储存:粪便应取指头大小存放于干燥、清洁、无吸水性的容器内。粪便的 容器必须有盖且有明显的标记。4.标本运输:室温运输。5.标本拒收标准:尿液、植物、泥土、污水等污染标本;干结粪便6.操作步骤6.1肉眼观察粪的颜色、性状。6.2再用竹片搜集少量不同部位的粪便标本,涂抹于滴有一滴生理盐水的洁净玻片 上06.3盖上盖玻片,涂片的厚度以能透过印刷物字迹为准。6.4先在低倍镜下观察有无包囊、虫卵、幼虫等,再在高倍镜下观察
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