DB21∕T 2472-2015 H1N1亚型不同谱系猪流感病毒核酸RT-PCR鉴别诊断技术规范.pdf
《DB21∕T 2472-2015 H1N1亚型不同谱系猪流感病毒核酸RT-PCR鉴别诊断技术规范.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《DB21∕T 2472-2015 H1N1亚型不同谱系猪流感病毒核酸RT-PCR鉴别诊断技术规范.pdf(9页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、ICS 11.220 B 41 DB21 辽宁省地方标准 DB 21/T 24722015 H1N1 亚型不同谱系猪流感病毒核酸 RT-PCR鉴别诊断技术规范 Diagnostic Techniques procedures of RT-PCR assay for differenting subtypes of H1N1 Swine Influenza Virus nucleic acid 2015-04-30 发布 2015-06-30 实施 辽宁省质量技术监督局 发 布 DB21/T 24722015 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由辽宁省动物疫病预
2、防控制中心提出。本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。本标准起草单位:辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。本标准主要起草人:兰德松、顾贵波、赵凤菊、魏澍、李晓楠、孙世宇、杨作丰、李清竹、李红魁、申贯男、王海丰 DB21/T 24722015 II 引 言 猪流感(SI)是由A型猪流感病毒(SIV)感染猪引起的一种严重的呼吸道及免疫抑制传染病,已在世界大部分国家广泛存在并造成严重经济损失,是目前危害养猪业的重大疾病之一。同时猪被认为是流感病毒重组的“混合器”,SIV对流感病毒的流行、遗传衍化、跨物种传播以及在公共卫生学上都具有重要意义。从国内和我省近年来猪群中的检测结果来看,猪群主要以H1
3、N1亚型SIV流行为主并危害严重。H1N1亚型SIV主要以经典型、类禽型和甲型H1N1三个谱系感染最为普遍,危害最大。针对H1N1三个不同谱系的SIV,国内尚无RT-PCR检测方法方面的技术规范,应用本技术规范可在实验室对经典型、类禽型和甲型H1N1三个不同谱系的SIV做出快速、准确诊断,进而有针对性地采取综合防控措施。因此,本规范对于猪流感的检测和控制具有重要的意义,同时也为人、猪、禽流感防控提供预警信息奠定重要基础。DB21/T 24722015 1 H1N1 亚型不同谱系猪流感病毒核酸 RT-PCR 鉴别诊断技术规范 1 范围 本标准规定了H1N1亚型不同谱系(甲型H1N1、经典H1N1
4、及类禽型H1N1)猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)RT-PCR检测方法。本标准适用于甲型H1N1、经典H1N1及类禽型H1N1亚型猪流感的鉴别诊断和监测,适用于猪鼻咽拭子、脏器、鸡胚尿囊液及细胞培养物中H1N1亚型SIV核酸的检测。本标准中的试验操作应在生物安全级(BSL-2)以上的实验室进行。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。兽医实验室生物安全技术管理规范 3 缩略语 下列缩略语适用于本标准。SIV:猪流感病毒(Swi
5、ne influenza virus)DEPC:焦炭酸二乙酯(Diethylpyrocarbonate)RNA:核糖核酸(Ribonucleic acid)DNA:脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid)bp:碱基对(Base pair)RT-PCR:反转录聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction)dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(Deoxy-ribonucleoside triphosphate)MLV:莫洛尼鼠白血病病毒(Murine leukemia virus)DTT:二硫苏糖醇(DL-Dithioth
6、reitol)PBS:磷酸缓冲液(Phosphate buffer soulution)TAE:Tris-乙酸电泳缓冲液(Tris acetate-EDTA buffer)4 原理 SIV是一种RNA病毒。RNA反转录产生的cDNA可作为PCR模板进行扩增。根据PEDV保守基因序列设计一对引物,在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以引物为延伸起点,通过变性、退火和延伸,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA。5 仪器和器材 DB21/T 24722015 2 高速台式冷冻离心机(最大离心力12 000 g以上)。冰箱(28,-20 和-70)。PCR扩增仪。电泳仪。凝胶成像系统。微波
7、炉。微量移液器。6 试剂和材料 6.1 Trizol:RNA 提取抽提试剂,外观为粉红色,分装至棕色瓶中,于 48 保存。6.2 氯仿:4 预冷。6.3 异丙醇:4 预冷。6.4 75%乙醇:用新开启的无水乙醇和 DEPC 水配制,-20 预冷。6.5 DEPC 水:去离子水中加入 0.1%DEPC,37 作用 1 h;(121 士 2),高压灭菌 15 min。6.6 RNA 酶抑制剂(40 U/L)。6.7 DNA 聚合酶:HS Taq DNA 聚合酶(5 U/L)。6.8 dNTP(2.5 mmol/L)。6.9 用于 RT-PCR 反应的引物浓度为 20mol/L,其序列如下:经典型上
8、游引物F:GGACATGTTACCCAGGAGA 经典型下游引物R:ACTGGTAGGTGGATGGTGAA 类禽型上游引物F:TGGAGCATGCTACCCCGGAGA 类禽型下游引物R:CCATACATCCAAAAACCCATC 甲型上游引物F:TATTCCCCAAGACAAGTTCA 甲型下游引物R:ATCGTGGACTGGTGTATCTG 6.10 反转录酶:M-MLV 反转录酶(5 U/L)。6.11 DTT(0.1 mmol/L)。6.12 反转录引物 Uni 12:AGCAAAAGCAGG(20 mol/L)。6.13 阴性对照:DEPC 水。6.14 阳性对照:不同谱系 SIV
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- DB21T 2472-2015 H1N1亚型不同谱系猪流感病毒核酸RT-PCR鉴别诊断技术规范 DB21 2472 2015 H1N1 不同 谱系 流感病毒 核酸 RT PCR 鉴别 诊断 技术规范
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【fangha****n2009】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【fangha****n2009】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。
链接地址:https://www.zixin.com.cn/doc/213485.html