《菜花DNA的提取》.ppt
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1、菜花中菜花中DNA的提取的提取1 1整理整理pptppt一一.实验原理实验原理1 1核酸分离提取的原则核酸分离提取的原则核酸分离提取的原则核酸分离提取的原则 1 1)应保证核酸一级结构的完整性)应保证核酸一级结构的完整性)应保证核酸一级结构的完整性)应保证核酸一级结构的完整性 2 2)排除其他分子的污染)排除其他分子的污染)排除其他分子的污染)排除其他分子的污染 A A 核酸样品中不应存在对其有抑制作用的有机溶核酸样品中不应存在对其有抑制作用的有机溶核酸样品中不应存在对其有抑制作用的有机溶核酸样品中不应存在对其有抑制作用的有机溶 剂和过高浓度的金属离子剂和过高浓度的金属离子剂和过高浓度的金属离
2、子剂和过高浓度的金属离子 B B其他生物大分子如:蛋白质,多糖和脂类分子其他生物大分子如:蛋白质,多糖和脂类分子其他生物大分子如:蛋白质,多糖和脂类分子其他生物大分子如:蛋白质,多糖和脂类分子 的污染应降低到最低程度的污染应降低到最低程度的污染应降低到最低程度的污染应降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染(如:提取排除其他核酸分子的污染(如:提取排除其他核酸分子的污染(如:提取排除其他核酸分子的污染(如:提取DNADNA分子分子分子分子 应除去应除去应除去应除去RNARNA;反之亦然);反之亦然);反之亦然);反之亦然)2 2整理整理pptppt2.2.核酸提取的步骤核酸提取的步骤核酸提取的步
3、骤核酸提取的步骤 1 1)破碎细胞(材料不同,方法不同)破碎细胞(材料不同,方法不同)破碎细胞(材料不同,方法不同)破碎细胞(材料不同,方法不同)匀浆器,捣碎器,溶菌酶消化,碱裂解等。匀浆器,捣碎器,溶菌酶消化,碱裂解等。匀浆器,捣碎器,溶菌酶消化,碱裂解等。匀浆器,捣碎器,溶菌酶消化,碱裂解等。2 2)除杂质,提除杂质,提除杂质,提除杂质,提DNADNA 杂质:蛋白,多糖,脂类,杂质:蛋白,多糖,脂类,杂质:蛋白,多糖,脂类,杂质:蛋白,多糖,脂类,RNA RNA,DNaseDNase A.A.DNaseDNase的抑制的抑制的抑制的抑制 DNaseDNase需需需需Mg2+,Ca2+Mg2
4、+,Ca2+激活,所以提取时加激活,所以提取时加激活,所以提取时加激活,所以提取时加0.01M0.01M EDTA EDTA或或或或EDTAEDTA钠盐。(螯合金属离子)钠盐。(螯合金属离子)钠盐。(螯合金属离子)钠盐。(螯合金属离子)加去垢剂或变性剂(加去垢剂或变性剂(加去垢剂或变性剂(加去垢剂或变性剂(SDSSDS),可使),可使),可使),可使DNaseDNase变性失活变性失活变性失活变性失活 3 3整理整理pptpptB.B.除除除除RNARNA酶法酶法酶法酶法:加:加:加:加RNaseRNase调调节节pH:RNA能能在在室室温温条条件件下下被被稀稀碱碱水水解解成成核核甘甘酸酸而而
5、DNA对对碱碱较较稳稳定定(核核酸酸的的理理化化性性质质),所所以以提提DNA一一般般要要在在偏偏碱碱的的环环境境中中提提取取,提提RNA要要在在偏偏酸的环境中稳定。酸的环境中稳定。调调节节盐盐浓浓度度(盐盐的的分分步步沉沉淀淀):在在浓浓NaCl(12M)溶溶液液中中,DNA溶溶解解度度大大,RNA溶溶解解度度小小;在在稀稀NaCl(0.14M)中中,DNA溶溶解解度度小小,RNA溶溶解解度度大大,因因此此可可利利用用不不同同浓浓度度的的NaCl溶溶液液将将DNA和和RNA从样品中分开。从样品中分开。4 4整理整理pptppt C.除蛋白除蛋白加加去去垢垢剂剂或或变变性性剂剂(SDS,十十二
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