食品中铜绿假单胞菌检测.ppt
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1、铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌1一、概 述铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)俗称绿脓杆菌,因为在代谢过程中产生水溶性的绿色色素,使伤口与创面呈绿色,故名绿脓杆菌。铜绿假单胞菌能在许多污染物质中存活并繁殖,生长营养需求不高,善于利用各种碳源和氨化合物作为氮源,在水、土壤、食品以及医院等环境广泛存在,甚至在蒸馏水、消毒液也不例外,如季铵类消毒液,特别是含有一些有机物的液体。2铜绿假单胞菌可由多种途径传播,但主要是通过污染医疗器械、用具及带菌医护人员引起医源性感染,因此,对烧伤病房、手术器械及治疗器械应进行严格消毒灭菌,以保证无铜绿假单胞菌的污染。对铜绿假单胞菌感染的治疗,可应用庆大霉素、多粘菌素B
2、和羧苄青霉素。铜绿假单胞菌抵抗力较其他革兰阴性菌强,561h可杀灭,对很多抗生素具有耐受性。对消毒剂、干燥、紫外线等理化因素及不良环境抵抗 力强,对化学药物的抵抗力比一般革兰氏阴性菌强大。3二、生物学特性1.培养特性 本菌属于假单胞菌属,是一种 非发酵革兰阴性无芽孢杆菌,菌体 细长且长短不一,有时呈球杆状或线状,成对或 短链状排列。菌体的一端有单鞭毛,在暗视野显 微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。2菌体形态 无芽孢,无夹膜,革兰阴性杆菌,有单鞭毛或丛鞭毛,运动活泼。菌体的大小为0.51m1.53.0m,菌体笔直或弯曲。43、生化特性 氧化酶和过氧化氢酶阳性。O/F试验为氧化型,还原硝酸盐
3、为亚硝酸盐,分解乙酰胺产生氨。98 菌株产生水溶性荧光色素。铜绿假单胞菌能液化明胶,酪蛋白水解,但淀粉不水解。90 以上的菌株产生蓝绿色色素。分解蛋白质能力强,发酵糖类能力较低,氧化分解葡萄糖,产酸不产气,不分解甘露醇、乳糖及蔗糖,能液化明胶,分解尿素,不形吲哚,氧化酶试验阳性,还原硝酸盐产气,靛基质阴性,不产硫化氢。5三、致病性 主要致病物质是内毒素,此外尚有菌毛、荚膜、胞外酶和外毒素等多种致病因子。可引起局部化脓性炎症,也可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎、胃肠炎、心内膜炎、脓胸,还可引起菌血症、败血症及引起婴儿严重的流行性腹泻。WHO的HACCP评估明确指出铜绿假单胞菌是婴儿瓶装饮用水的危害指
4、示菌,可造成婴儿腹泻。尤其是抵抗力较差的老弱病幼孕人群,饮用含铜绿假单胞菌的瓶装水很可能导致疾病的发生,患者食入103104个菌体细胞即可被侵害。铜绿假单胞菌的生长还将增加亚硝酸盐的含量-参考文献。6 国内外污染情况-参考文献 国内污染情况:-瓶装天然矿泉水铜绿假单胞菌的检出率1.223.6;-瓶装饮用纯净水铜绿假单胞菌的检出率11.6。国外污染情况:-Richards等在104件检品中的4件分离到铜绿假单胞菌;-Rosenberg报告德国1.210.2的瓶装矿泉水检出铜 绿假单胞菌。刚出厂的产品中铜绿假单胞菌数量较少,但有文献报 道5加仑桶装产品(1531天的保存期),铜绿假单胞 菌可生长繁
5、殖达到 CFU/ml。国内卫生标准:0 CFU/250ml7三、实验室检验 GB/T 8538-2008铜绿假单胞菌检测(滤膜法)8原 理 将250mL水样用孔径为0.45m的滤膜过滤,并将滤膜移至CN琼脂培养基上,于36士1恒温箱中培养48h,能够在CN琼脂上生长并产生绿脓菌素,或者能够在CN琼脂上生长并且氧化酶呈阳性、紫外光(36020nm)照射下能发荧光、能够利用乙酰胺产氨的革兰氏阴性无芽孢杆菌,经证实为铜绿假单胞菌,则其检测结果为阳性。9培养基和试剂 假单胞菌琼脂基础培养基/CN琼脂(低温避光保存)金氏B 培养基(低温避光保存)乙酰胺肉汤 营养琼脂 氧化酶试剂 钠氏试剂(配制好之后低温
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