血涂片、红细胞形态.ppt
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1、外周血细胞形态学检验外周血细胞形态学检验2021/3/29 星期一11.1.血涂片的制备血涂片的制备:手工推片法手工推片法2.2.血涂片的染色血涂片的染色:瑞氏染色法瑞氏染色法3.3.红细胞的形态检查红细胞的形态检查2021/3/29 星期一2 将将血血标标本本均均匀匀地地涂涂抹抹在在清清洁洁干干燥燥的的载载玻玻片片上上,经经染染色色后后在在显显微微镜镜下下检检查查,是是血血液液细细胞胞形形态态学学检检查查的的基基本本方方法法,临临床床应应用用广广泛泛,特特别别是是对对于于各各种种贫贫血血及及血血液液病病的的诊诊断断和和鉴鉴别别诊断具有重要价值。诊断具有重要价值。血涂片(blood smear
2、)的制备2021/3/29 星期一31.1.新玻片上有新玻片上有游离碱质游离碱质,须清洗后使用。,须清洗后使用。3.3.使用时切勿用手触及玻片表面。使用时切勿用手触及玻片表面。2.2.用过的载玻片须用肥皂水或乙醇除去用过的载玻片须用肥皂水或乙醇除去 染料和油污。染料和油污。2021/3/29 星期一4手工推片法手工推片法灰白层涂片法灰白层涂片法薄血涂片法薄血涂片法厚血涂片法厚血涂片法自动血液涂片法自动血液涂片法2021/3/29 星期一5手持玻片推制血膜手持玻片推制血膜推片推片用推片从血滴前方接触血滴用推片从血滴前方接触血滴推片角度推片角度吸附血液成一线吸附血液成一线推完血片推完血片,迅速干燥
3、迅速干燥手工薄血推片法手工薄血推片法2021/3/29 星期一6厚薄适宜,头体尾分明,厚薄适宜,头体尾分明,细胞分布均匀,边缘整齐,细胞分布均匀,边缘整齐,两边和两端留有一定空隙。两边和两端留有一定空隙。2021/3/29 星期一7血滴越大,推片角度越大,速度越快,血滴越大,推片角度越大,速度越快,血液粘度越高,则血膜越血液粘度越高,则血膜越厚厚。血滴越小,推片角度越小,速度越慢,血滴越小,推片角度越小,速度越慢,血液粘度越低,则血膜越血液粘度越低,则血膜越薄薄。如果取血量较少,在推血片时应如何才能使血膜如果取血量较少,在推血片时应如何才能使血膜的厚薄合适?的厚薄合适?对于严重贫血患者,应如何
4、推制血片?对于严重贫血患者,应如何推制血片?2021/3/29 星期一8角度大角度大,速度快速度快,太厚太厚,太短太短推制适当的血膜推制适当的血膜推片不光滑,呈毛刷状推片不光滑,呈毛刷状用力不均,呈搓板状用力不均,呈搓板状血量过多,无尾血量过多,无尾玻片油腻,有空泡玻片油腻,有空泡2021/3/29 星期一91.1.灰白层涂片法灰白层涂片法抗凝血离心,取灰白层涂片。抗凝血离心,取灰白层涂片。用于白细胞减少者的白细胞分类和红斑用于白细胞减少者的白细胞分类和红斑狼疮细胞狼疮细胞(LEC)LEC)检查。检查。2.2.厚血涂片法厚血涂片法用于疟原虫用于疟原虫、微丝蚴的检查微丝蚴的检查2021/3/29
5、 星期一10血涂片的染色血涂片的染色 染色的目的是使细胞膜、细胞浆、胞染色的目的是使细胞膜、细胞浆、胞浆中颗粒及细胞核等主要结构染上特定的浆中颗粒及细胞核等主要结构染上特定的颜色,以便于显微镜下观察与识别。颜色,以便于显微镜下观察与识别。2021/3/29 星期一11一、一、瑞氏染色法瑞氏染色法(WrightWrights s stainstain)二、吉姆萨染色法(二、吉姆萨染色法(GiemsaGiemsas s stainstain)三、瑞氏三、瑞氏-吉姆萨复合染色法吉姆萨复合染色法 对胞浆和中性颗粒染色较好对胞浆和中性颗粒染色较好,对胞核稍差。对胞核稍差。对胞浆和中性颗粒染色较差对胞浆和
6、中性颗粒染色较差,对胞核和寄对胞核和寄生虫着色较好。生虫着色较好。取二者之长,染色效果好取二者之长,染色效果好。2021/3/29 星期一12瑞氏染色法瑞氏染色法染料:酸性染料染料:酸性染料伊红伊红和碱性染料和碱性染料美兰美兰(亚甲蓝)(亚甲蓝)的复合染料。亚甲蓝氧化为次级染料天青。的复合染料。亚甲蓝氧化为次级染料天青。溶剂:甲醇。溶解溶剂:甲醇。溶解+固定。固定。磷酸盐缓冲液(磷酸盐缓冲液(PBS):):pH6.46.82021/3/29 星期一13染色原理染色原理 1.血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质,与酸性伊红血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质,与酸性伊红结合染成结合染成粉红色粉红色,称为,称
7、为嗜酸性物质嗜酸性物质。2.嗜碱性颗粒和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性美兰嗜碱性颗粒和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性美兰结合,染成结合,染成紫色或蓝色紫色或蓝色,称为,称为嗜碱性物质嗜碱性物质。3.中性颗粒呈等电点状态与伊红美兰均可结合,染成中性颗粒呈等电点状态与伊红美兰均可结合,染成紫红色紫红色,称为,称为中性物质中性物质。2021/3/29 星期一14pHpH对细胞染色的影响对细胞染色的影响 在酸性环境中染色偏红;在碱性在酸性环境中染色偏红;在碱性环境中染色偏蓝。因此要求用磷酸盐环境中染色偏蓝。因此要求用磷酸盐缓冲液,使染色环境维持在缓冲液,使染色环境维持在6.46.8之间,以达到满意的染色效果。
8、之间,以达到满意的染色效果。2021/3/29 星期一151.1.用玻璃笔在血膜两端划线。用玻璃笔在血膜两端划线。2.2.瑞氏染液覆盖血膜瑞氏染液覆盖血膜,染染 0.50.51 1minmin。3.3.加等量或稍多的缓冲液,混匀,加等量或稍多的缓冲液,混匀,染染5 51 10min0min。4.4.流水冲去染液,干燥后镜检。流水冲去染液,干燥后镜检。2021/3/29 星期一16正常血膜外观为淡紫红色。正常血膜外观为淡紫红色。镜下镜下RBCRBC和嗜酸性颗粒染粉红色,嗜碱和嗜酸性颗粒染粉红色,嗜碱性颗粒染紫黑色,中性颗粒染淡紫红性颗粒染紫黑色,中性颗粒染淡紫红色,细胞核染紫红色。色,细胞核染紫
9、红色。2021/3/29 星期一175.5.若有染料残渣,可用少量甲醇溶解,并立即若有染料残渣,可用少量甲醇溶解,并立即 用流水冲洗。用流水冲洗。1.1.血膜正面朝上,血膜正面朝上,干透后再染色。干透后再染色。2.2.染色时间与染液浓度、室温和细胞多少有关。染色时间与染液浓度、室温和细胞多少有关。3.3.染色过程中染色过程中防止蒸发沉淀防止蒸发沉淀。4.4.冲洗时应以冲洗时应以流水流水冲洗,冲洗时间不能太久。冲洗,冲洗时间不能太久。6.6.复染时应先加缓冲液再加染液,或加染液与复染时应先加缓冲液再加染液,或加染液与 缓冲液的混合液缓冲液的混合液。2021/3/29 星期一181 1载玻片要清洁
10、。载玻片要清洁。2 2制备良好的血涂片。制备良好的血涂片。3 3选择抗凝剂。选择抗凝剂。4 4处理白细胞浓度较低的标本。处理白细胞浓度较低的标本。5 5血细胞比容与涂片关系。血细胞比容与涂片关系。6 6新配置染液的处理。新配置染液的处理。7 7染色过深、过浅的处理。染色过深、过浅的处理。2021/3/29 星期一19红细胞形态检查红细胞形态检查 在贫血或其他血液系统疾病时红细在贫血或其他血液系统疾病时红细胞除有数量变化外,往往伴有形态改变,胞除有数量变化外,往往伴有形态改变,表现在表现在红细胞大小、形状、染色性质和红细胞大小、形状、染色性质和内涵物内涵物的异常。因此,红细胞形态检查的异常。因此
11、,红细胞形态检查对贫血的诊断和鉴别诊断有重要的临床对贫血的诊断和鉴别诊断有重要的临床价值。价值。2021/3/29 星期一20 低倍镜:低倍镜:油镜:油镜:制备血涂片制备血涂片染色染色镜检镜检检查区域:检查区域:体尾交界处,细胞分布均匀,体尾交界处,细胞分布均匀,红细胞紧密排列但不重叠。红细胞紧密排列但不重叠。估计细胞分布和染色情况,浏估计细胞分布和染色情况,浏览全片是否存在异常细胞。览全片是否存在异常细胞。观察红细胞形态。观察红细胞形态。2021/3/29 星期一21正常红细胞形态正常红细胞形态 双凹圆盘形,淡桔红色,中央双凹圆盘形,淡桔红色,中央1/3为生为生理性淡染区,呈正常色素性。红细
12、胞直径理性淡染区,呈正常色素性。红细胞直径为为6.77.7m,平均直径,平均直径7.2m左右,厚左右,厚约约2m。无核,胞质内无异常结构。除健。无核,胞质内无异常结构。除健康人外,还见于急性失血、再生障碍性贫康人外,还见于急性失血、再生障碍性贫血和部分白血病。血和部分白血病。2021/3/29 星期一22正常红细胞正常红细胞形态形态2021/3/29 星期一23异常红细胞形态异常红细胞形态红细胞大小异常红细胞大小异常红细胞形状异常红细胞形状异常 血红蛋白充盈度与着色异常血红蛋白充盈度与着色异常 红细胞内出现异常结构红细胞内出现异常结构 红细胞排列异常红细胞排列异常 有核红细胞有核红细胞 202
13、1/3/29 星期一24红细胞大小异常红细胞大小异常1小红细胞小红细胞(microcyte):直径直径10m。最。最常见于缺乏叶酸和维生素常见于缺乏叶酸和维生素B12所致的所致的巨幼细巨幼细胞性贫血胞性贫血(MA)。也可见于溶血性贫血)。也可见于溶血性贫血(HA)、骨髓增生异常综合症()、骨髓增生异常综合症(MDS)。)。3巨红细胞巨红细胞(megalocyte):直径:直径15m。常。常见于见于巨幼细胞性贫血巨幼细胞性贫血(MA)和骨髓增生异)和骨髓增生异常综合症(常综合症(MDS)。)。2021/3/29 星期一27大红细胞大红细胞 巨红细胞巨红细胞2021/3/29 星期一28红细胞大小
14、异常红细胞大小异常4红细胞大小不均红细胞大小不均(anisocytosis):指红细:指红细胞之间直径相差一倍以上。见于严重的增胞之间直径相差一倍以上。见于严重的增生性贫血的血涂片中。生性贫血的血涂片中。巨幼细胞性贫血巨幼细胞性贫血尤尤为明显,与骨髓造血紊乱有关。为明显,与骨髓造血紊乱有关。2021/3/29 星期一29红细胞大小不均红细胞大小不均2021/3/29 星期一30红细胞大小异常红细胞大小异常小红细胞小红细胞(microcyte)大红细胞大红细胞(macrocyte)巨红细胞巨红细胞(megalocyte)红细胞大小不均红细胞大小不均(anisocytosis)2021/3/29
15、星期一31红细胞形状异常红细胞形状异常1球形红细胞球形红细胞(spherocyte):直径小于正常,:直径小于正常,厚度增加大于厚度增加大于2m。无中心淡染区。常见于。无中心淡染区。常见于遗遗传性球形红细胞增多症传性球形红细胞增多症(HS)和伴有球形细胞)和伴有球形细胞增多的其他溶血性贫血如增多的其他溶血性贫血如AIHA、HDN等。等。2021/3/29 星期一32球形红细胞球形红细胞2021/3/29 星期一33红细胞形状异常红细胞形状异常2椭圆形红细胞(椭圆形红细胞(elliptocyte):):细胞呈卵圆细胞呈卵圆形、杆状,长度可大于宽度形、杆状,长度可大于宽度34倍。这类红细倍。这类红
16、细胞成熟后在高渗、等渗、低渗及正常血清内,胞成熟后在高渗、等渗、低渗及正常血清内,其椭圆形保持不变。常见于其椭圆形保持不变。常见于遗传性椭圆形红细遗传性椭圆形红细胞增多症胞增多症(HE),可高达),可高达25%75%(正常人(正常人为为1%)。也见于巨)。也见于巨幼细胞贫血幼细胞贫血。2021/3/29 星期一34椭圆形红细胞椭圆形红细胞2021/3/29 星期一35红细胞形状异常红细胞形状异常3靶形红细胞(靶形红细胞(target cell):):红细胞中心部位红细胞中心部位染色较深,其周围为苍白区域,而细胞边缘又深染色较深,其周围为苍白区域,而细胞边缘又深染,形如射击之靶。常见于各种染,形
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