细胞工程--C4.5-细胞的冻存、复苏和运输.ppt
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1、第四章第四章 细胞培养细胞培养.细胞培养4.1 培养细胞的生物学特征4.2 细胞培养液4.3 细胞的基本培养技术4.4 细胞系和细胞株的建立4.5 细胞的冻存、复苏和运输.细胞冻存和复苏细胞低温冷冻贮存是细胞室的常规工作。细胞冻存与细胞传代保存相比可以减少入力、经费,减少污染,减少细胞生物学特性变化。.冻存和复苏的原则:慢冻快融F当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。F如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反结晶就大,大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。
2、.慢冻程序标准程序:当温度在-25 以上时,12/min当温度达-25 以下时,510/min当温度达-100时,可迅速放入液氮中细胞冻存器简易程序:将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降12 的速度,在40分钟内降至液氮表面,停30分钟后,直接投人液氮中。.低温保护剂的应用在细胞冻存时加入温保护剂,能大大提高冻存效果。常用的低温保护剂是DMSO,它是一种渗透性保护剂,可迅速透入细胞,提高胞膜对水的通透性,降低冰点,延缓冻结过程,能使细胞内水分在冻结前透出细胞外,在胞外形成冰晶,减少胞内冰晶,从而减少冰晶对细胞的损伤。.细胞冻存方
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