化学发光法检测传染病.ppt
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1、化学发光法快速检测传化学发光法快速检测传化学发光法快速检测传化学发光法快速检测传染病染病染病染病 更灵敏、更特异、更准确更灵敏、更特异、更准确.放免酶联免疫化学发光荧光免疫60年代70年代80年代90年代免疫标记技术发展免疫标记技术发展国产进口酶促化学发光直接化学发光直接化学发光.化学发光技术的优势与应用前景化学发光技术的优势与应用前景.敏感度高,(10-21mol/L)超过酶免,荧光免疫等方法.精密度,准确度超过放免,酶免,荧光免疫等方法.试剂稳定,无放射性,污染或生物毒性;.测定耗时短,方便快速提供结果报告;.测定项目齐全;已发展成全自动的测定系统。.包被微粒子包被微粒子包被磁珠包被磁珠包
2、被微孔包被微孔包被试管包被试管包被技术的发展包被技术的发展-磁微粒子磁微粒子.包被磁微粒包被磁微粒 标记异鲁米诺标记异鲁米诺Eg:双抗夹心法分析模式双抗夹心法分析模式 磁微粒子上包被的抗体与待检测抗原及异鲁米诺标记抗体结合提升检测功能灵敏度增加检测线性范围比吖啶酯更稳定延长试剂效期.*Y YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y*Y YY YY YY YY YY YY YY Y微粒包被微粒包被液相反应液相反应.磁微粒、直接化学发光反应反应充分速度更快酶标板,板式磁微粒,纳米级,均相.CLIA板式
3、载量Y YY YY YY YY YY YY YY YY Y磁微粒子磁微粒子直接化学法直接化学法Ag/AbAg/Ab酶标板酶标板发光板发光板Ag/AbAg/Ab微粒子化学发光法抗体载量优势微粒子化学发光法抗体载量优势.分配样品分配样品,磁颗粒磁颗粒和试剂和试剂孵育孵育使反应物使反应物结合结合在磁场中在磁场中清洗去除清洗去除未结合物质未结合物质加入加入激发液激发液产生产生信号信号信号信号检测检测微粒子化学发光原理微粒子化学发光原理.磁性微粒子及其分离技术磁性微粒子及其分离技术磁性微粒子技术的优点:快速分离结合相与游离相提高与Ag或Ab包被亲和力提高接触表面积/反应容量比例,实现微量分析不需要抗体分
4、离步骤,杜绝干扰与交叉反应允许共价耦合反应,因此可以检测大/小分子的各种物质成分能应用各种分析设计与反应模式,扩大应用范围 如:夹心法,竟争法,抗体检测法等利于检测自动化与微量分析.v磁微粒子直接化学发光是最新一代免疫检测新技术最新一代免疫检测新技术v具有液相、快速、灵敏、准确液相、快速、灵敏、准确的特点v通过多中心的临床评估,基本上验证了LICA在乙肝、丙肝、梅毒、艾滋、肿瘤标志物、甲状腺功能等项目的临床可用性v多家临床试验显示产品的质量不亚于进口的雅培、罗氏和西门子等厂家的产品媲美。.v1)磁性微粒子技术:便于分离,反应均匀,提高灵敏度v2)泉涌内外壁清洗技术:最小的交叉污染率v3)试剂盒
5、盖设计:减少人工操作误差和交叉污染,避免试剂挥发影响结果准确性v4)试剂冷藏系统:保证在仪器操作的过程中试剂能够一直保持稳定v5)磁性分离技术:保证了清洗效率,对于灵敏度要求极高的标记免疫分析是十分关键的技术技术.雅培雅培 免疫项目免疫项目甲状腺功能甲状腺功能甲状腺素三碘甲状腺原氨酸游离甲状腺素游离三碘甲状腺原氨酸促甲状腺素性腺激素性腺激素人绒毛膜促性腺激素催乳素雌二醇卵泡刺激素黄体生成素孕酮睾酮肿瘤标志物肿瘤标志物甲胎蛋白癌胚抗原前列腺特异性抗原游离前列腺特异性抗原糖类抗原125糖类抗原15-3糖类抗原19-92微球蛋白铁蛋白神经元特异性烯醇化酶人钙结合蛋白肿瘤相关抗原72-4鳞状上皮癌相关
6、抗原细胞角蛋白CYFRA 21-1心血管及心肌标志物心血管及心肌标志物N末端脑钠肽肌钙蛋白肌酸激酶同工酶C反应蛋白心肌脂肪酸结合蛋白脂蛋白相关磷脂酶A2髓过氧化物酶肌红蛋白肝纤维化四项肝纤维化四项透明质酸型前胶原N端肽型胶原蛋白层粘连带白传染病传染病乙型肝炎病毒前S1抗原乙型肝炎病毒e抗体乙型肝炎病毒e抗原乙型肝炎病毒核心抗体乙型肝炎病毒表面抗体乙型肝炎病毒表面抗原丙型肝炎抗体(HCV)梅毒抗体(TP)人类免疫缺陷病毒抗体糖代谢类糖代谢类胰岛素C-肽.全自动、管式、直接化学发光法全自动、管式、直接化学发光法 -特异性强、性能稳定特异性强、性能稳定 超长时间无人值守超长时间无人值守 (1)试剂区
7、)试剂区15个试剂位,个试剂位,(2)样本区)样本区12 12=144 个样本位个样本位 (3)码垛区一次性装载)码垛区一次性装载720个反应杯个反应杯 测试中可随时添加,随时替换测试中可随时添加,随时替换.真正的急诊功能,急诊样本,随到随测。测试速度高达220测试/小时原试管上样,无需倒管。全封闭反应舱,有效减少外界环境干扰和污染全中文软件,图标式界面,操作更简便综合测试成本低 .管式、微粒子包被技术,反应速度更快,结果更准确。管式、微粒子包被技术,反应速度更快,结果更准确。vELISA法检测乙肝表面抗原、梅毒、艾滋、丙肝按照法检测乙肝表面抗原、梅毒、艾滋、丙肝按照2010年年药药典典规定反
8、应时间至少要规定反应时间至少要2小时小时30分钟;而全自动微粒子化学发光分钟;而全自动微粒子化学发光试剂则不到试剂则不到30分钟即可完成。分钟即可完成。v稳定性更好稳定性更好v特异性更好特异性更好 大部分国际一流厂家也都采用直接发光法:大部分国际一流厂家也都采用直接发光法:罗罗 氏氏西门子西门子雅雅 培培.传染病试剂传统酶免法和微粒子化学发光法对比传染病试剂传统酶免法和微粒子化学发光法对比方法学项目传统酶免法微粒子发光法分析敏感度特异性精密度分析敏感度特异性精密度HBsAgadr 0.1IU/mLadw 0.1IU/mLay 0.2IU/mL(-/-)20/20(+/+)3/313.21%ad
9、r 0.1IU/mLadw 0.1IU/mLay 0.2IU/mL(-/-)20/20(+/+)3/38.03%HBsAb10 mIU/mL(-/-)20/2012.05%10 mIU/mL(-/-)20/207.45%HBeAg1#1:642#1:1283#1:32(-/-)15/15(+/+)9/1012.04%1#1:642#1:1283#1:32(-/-)15/15(+/+)10/108.03%HBeAb1#1:322#1:643#1:64(-/-)15/15(+/+)9/1012.31%1#1:322#1:643#1:64(-/-)15/15(+/+)10/108.20%HBcAb1
10、#1:1282#1:1283#1:256(-/-)15/15(+/+)14/1514.03%1#1:1282#1:1283#1:256(-/-)15/15(+/+)15/1510.34%HCVL1、L2阳性,L3阴性,L4阴性(-/-)29/30(+/+)29/3010.05%L1、L2阳性L3阳性,L4阴性(-/-)30/30(+/+)30/307%HIVS1,S2阴性,S3,S4,S5,S6阳性(-/-)18/20(+/+)20/2014.34%S1阴性,S2,S3,S4,S5,S6阳性(-/-)20/20(+/+)20/2010%TPL1、L2阳性,L3阴性,L4阴性(-/-)20/20
11、(+/+)10/1011.26%L1、L2阳性L3阳性,L4阴性(-/-)20/20(+/+)10/107.98%.参比试剂:雅培参比试剂:雅培I2000乙肝灵敏度特异性符合率HBsAg97.92%100%99.78%Anti-HBs95.98%97.38%96.69%hiv95.24%100%99.59%Anti-HBe90.77%97.21%95.36%Anti-HBc91.54%98.9%94.48%试剂性能多中心临床评估(乙肝)试剂性能多中心临床评估(乙肝).免疫测定试剂的关键点免疫测定试剂的关键点v作作为为免免疫疫反反应应,抗抗原原抗抗体体的的选选择择是是整整个个免免疫疫分分析析特特
12、异异性性和总体表现的关键和总体表现的关键如如何何选选择择好好一一个个抗抗体体(单单克克隆隆或或多多克克隆隆)去去检检测测一一个个被被检检物物质质,而而不不与与非非常常相相似似结结构构的的其其它它代代谢谢产产物物有有交交叉叉反反应应,或或着着是是一一些些没没有有临临床床意意义义的的分分解解产产物物等等,这这是是分分析析设设计计的重点中之重点。的重点中之重点。批内、批间的分析重现性批内、批间的分析重现性。.AFPHBsAg4.50%1.79%4.91%2.14%HCV12345MeanSDCV批内86.1186.3688.4087.9086.4386.271.551.79%批间74.59 73.6
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