病毒培养技术.ppt
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1、病毒增殖技病毒增殖技术 1.动物增殖病毒技物增殖病毒技术禽胚增殖病毒技禽胚增殖病毒技术细胞增殖病毒技胞增殖病毒技术2.一、一、动物增殖病毒技物增殖病毒技术 选择动物的物的标准:准:大动物应来源于非疫区,最好是未接种过相应病毒疫苗、青壮年和健康(经临床检查、检疫);对相应病毒易感,并十分敏感;经隔离饲养和观察检查证明健康;家兔、小鼠、大鼠等应符合普通级或清洁级实验动物标准;鸡应属非免疫鸡或SPF级标准;犬和猫应品种明确,并符合普通级实验动物标准;体重、年龄要基本一致,个体差别不宜过大。3.二、禽胚增殖病毒技二、禽胚增殖病毒技术(一)禽胚的(一)禽胚的选择 SPF鸡胚胚 据国家据国家标准,无准,无
2、22种特定病原体种特定病原体 非免疫非免疫鸡胚胚 应无特定病原的母源抗体,无特定病原的母源抗体,普通普通鸡胚胚 可能可能带有有鸡的多种病原体,不适用于疫苗生的多种病原体,不适用于疫苗生产 异源性性疫苗:异源性性疫苗:鸭胚和胚和鸽胚胚4.(二)禽胚接种途径与收(二)禽胚接种途径与收获 绒毛尿囊膜接种法 尿囊腔接种法 卵黄囊接种法 羊膜腔接种法 静脉接种法 脑内接种法5.鸡胚胚绒毛尿囊膜接种法毛尿囊膜接种法 6.尿囊腔接尿囊腔接种法种法 7.尿囊液收尿囊液收获方法方法 8.鸡胚卵黄囊接种法胚卵黄囊接种法9.1种蛋种蛋质量量病原微生物:垂直传递,如白血病、脑脊髓炎、腺病毒、支原体及传染性贫血因子等。
3、母源抗体:抗生素:立克次氏体和鹦鹉热衣原体 2孵化技孵化技术温度:3739.5。传染性支气管炎病毒37 湿度:鸡胚5357,水禽胚比鸡胚高510。通风:氧气,二氧化碳。翻蛋:(三)影响禽胚增殖病毒的因素(三)影响禽胚增殖病毒的因素10.3接种技接种技术 不同病毒的增殖有不同的接种途径,同一种病毒接种不同日龄禽胚获得的病毒量也不同。接种日龄:鸡胚1314日龄。鸭胚1516日龄,尿囊液含 量最高,平均约68ml,羊水约12ml。接种部位:不应伤及胚体和血管,以免影响其发育严格防止禽胚污染 鸡胚接种时严格无菌操作;定期清扫消毒孵化室,保持室内空气新鲜;种蛋入孵前先用温水清洗,消毒,凉干。11.三、三
4、、细胞增殖病毒技胞增殖病毒技术 1细胞培养的概念胞培养的概念 细胞培养(cell culture)是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至24个细胞团悬液进行培养。细胞分胞分类:根据细胞染色体和繁殖特性 原代细胞(primary cell)细胞株(cell strain)传代细胞(continued cell line)细胞系(cell line)12.(1)原代)原代细胞胞(primary cell)指由新指由新鲜组织经剪碎和胰剪碎和胰酶消化制消化制备的的细胞,如胞,如CEF细胞。胞。(2)细胞株胞株(cell strain)又称二倍体又称二倍体细胞胞 指指自自继代代培培
5、养养的的细胞胞中中选育育出出具具有有特特殊殊生生物物学学性性质和和标记的的细胞胞。这类细胞胞且且能能保保持持原原来来的的二二倍倍染染色色体体数数目目,能能连续传很很多多代代(50100代代),但但为有有限限生生命命;没没有有肿瘤瘤原原。如如PKl5、BHK21和和Vero(3)传代代细胞(胞(continued cell line)细胞系胞系(cell line)能能在在体体外外无无限限传代代,应用用方方便便,其其染染色色体体数数目目及及增增殖殖特特性性均均类似于似于恶性性肿瘤瘤细胞,且多来源于癌胞,且多来源于癌细胞,如胞,如HeLa细胞系胞系 13.静置培养静置培养 转瓶培养瓶培养悬浮培养浮
6、培养(suspension cell culture)微微载体培养体培养(microcarrier cell culture)中中 空空 纤 维 细 胞胞 培培 养养(hollow fibre cell culture)微囊化微囊化细胞培养胞培养2细胞培养方法胞培养方法14.悬浮培养浮培养 通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法,主要用于一些在振荡或搅拌下能生长繁殖的细胞,如生产单克隆抗体的杂交瘤细胞。微微载体培养体培养微载体直径应为60105nm,无毒性,透明,颗粒密度与培养液密度相近似,略重于液体,低速搅拌即能悬浮,不吸收培养液和化学反应,表面光滑、硬度小、有弹性,易
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