结核分枝杆菌实验室检测方法.ppt
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1、结核分枝杆菌实结核分枝杆菌实验室检测方法验室检测方法分枝杆菌属分枝杆菌属一类细长略带弯曲,有时呈分枝状的杆菌,本属细菌多具有抗酸性,又称抗酸杆菌(acid-fast bacillus),细菌体内含有分枝菌酸,细胞壁含有大量脂类,这与分枝杆菌的染色性、抵抗力和致病性等密切相关。本属细菌已经被鉴定的有70多种,可分为三大类:结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌、麻风分枝杆菌结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌、麻风分枝杆菌;按生长速度可分为三类,即缓慢生长菌、迅速生长菌和不能培养菌三种类型结核分枝杆菌群结核分枝杆菌群结核分枝杆菌,是人和动物结核病的病原体,包括人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuber
2、culosis)、牛分支杆菌(M.bovis)、非洲分支杆菌(M.africanum)和田鼠分枝杆菌(M.microti),前三种对人类治病,其中人型结核分枝杆菌感染发病率最高。结核分枝杆菌属于缓慢生长分支杆菌非典型分枝杆菌非典型分枝杆菌偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟/脓肿、胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶然分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、浅黄分枝杆菌、土分枝杆菌、草分枝杆菌、不产色分枝杆菌、海-溃疡分枝杆菌、金色分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌等偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟亚种、龟分枝杆菌脓肿亚种属于迅速生长型,鸡蛋培养基上3-5天可见菌落其他非典型分枝杆菌多为缓慢生长型麻
3、风分枝杆菌麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌(M.leprae)是麻风病的病原体,也是抗酸杆菌,但较结核分枝杆菌短而短而粗,两端尖细粗,两端尖细,抗酸染色着色均匀,呈束状束状或团状或团状排列,结核分枝杆菌多散在,偶有聚集。为典型的胞内寄生菌,有麻风杆菌存在的细胞胞浆呈泡沫状,称麻风细胞。体外不能培养。全球约有全球约有1/31/3的人口已经感染结核分枝杆菌,有的人口已经感染结核分枝杆菌,有20002000万活动性肺结核患者,每年新发病例万活动性肺结核患者,每年新发病例900900万万人,每秒钟有人,每秒钟有1 1人感染结核,每年有人感染结核,每年有300300万人死万人死于结核病。于结核病。随着抗结核药物
4、的不断发展和卫生生活状况的随着抗结核药物的不断发展和卫生生活状况的改善,结核的发病率和死亡率曾一度大幅下降改善,结核的发病率和死亡率曾一度大幅下降2020世纪世纪8080年代后,由于艾滋病和结核分枝杆菌年代后,由于艾滋病和结核分枝杆菌耐药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、耐药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、贫困及人口流动等因素,全球范围内结核病的贫困及人口流动等因素,全球范围内结核病的疫情骤然恶化疫情骤然恶化结核分枝杆菌结核分枝杆菌6生物学形状生物学形状结核分枝杆菌为结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌细长略带弯曲的杆菌,有时可见,有时可见分枝状,无芽孢和鞭毛,因衰老或抗结核药物的分枝状,无
5、芽孢和鞭毛,因衰老或抗结核药物的作用可出现多形态,如球状、串珠状或丝状,作用可出现多形态,如球状、串珠状或丝状,大小为大小为14X0.4m。细胞壁中含有大量脂质而不易着色,特别是有细胞壁中含有大量脂质而不易着色,特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面,一般大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面,一般用抗酸染色。用抗酸染色。萋尼染色呈红色萋尼染色呈红色,背景为蓝色,背景为蓝色;荧光染料金胺荧光染料金胺“O”染色,荧光显微镜下为橘黄色染色,荧光显微镜下为橘黄色培养特性培养特性培养基培养基营养要求高,营养要求高,必必须在含血清,卵黄,在含血清,卵黄,马铃薯,薯,甘油及无机甘油及无机盐类的特殊培养基上生的
6、特殊培养基上生长,常用的常用的有罗氏固体培养基有罗氏固体培养基培养条培养条件件专性需氧,性需氧,3%-5%CO2能促能促进其生其生长最适温最适温度度为35-37,最适最适pH为6.5-6.8菌落特菌落特点点菌落菌落粗糙型,表面干燥成粗糙型,表面干燥成颗粒状,不透明,乳粒状,不透明,乳白色或淡黄色,菜花白色或淡黄色,菜花样8实验室检测方法实验室检测方法 萋尼染色萋尼染色+荧光染色光染色 罗氏培养氏培养+分枝杆菌快速培养分枝杆菌快速培养 抗原抗体抗原抗体检测 细胞因子胞因子检测 荧光定量光定量PCR 芯片芯片杂交交 病原学病原学病原学病原学 免疫学免疫学免疫学免疫学 分子生物学分子生物学分子生物学
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