GB 5009.245-2016 食品安全国家标准 食品中聚葡萄糖的测定.pdf
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1、中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B5 0 0 9.2 4 52 0 1 6食品安全国家标准食品中聚葡萄糖的测定2 0 1 6 - 0 8 - 3 1发布2 0 1 6 - 0 9 - 2 0实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发 布G B5 0 0 9.2 4 52 0 1 61 食品安全国家标准食品中聚葡萄糖的测定1 范围本标准规定了食品中聚葡萄糖的测定方法。本标准适用于食品中添加的聚葡萄糖的测定。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1 聚葡萄糖 (C6H1 0O5)n由葡萄糖、 山梨糖醇和柠檬酸( 或磷酸) 按一定比例混合, 在高温下加热聚合并精制、 干燥而成
2、的多聚体, 平均聚合度1 2。属于可溶性膳食纤维。3 原理食品中聚葡萄糖经热水浸提、 超滤离心后, 滤液经酶解去除淀粉、 果聚糖等干扰物后, 再用离子色谱-脉冲安培检测器定量测定聚葡萄糖含量。4 试剂和材料除非另有说明, 本方法所用试剂均为分析纯, 水为G B/T6 6 8 2规定的一级水。4.1 试剂4.1.1 氢氧化钠溶液(5 0%) : 色谱纯, 离子色谱专用。4.1.2 冰乙酸(CH3C OOH) 。4.1.3 三水合乙酸钠(CH3C OON a3 H2O) 。4.1.4 无水乙酸钠(CH3C OON a) 。4.1.5 果聚糖酶(f r u c t a n a s e) :20 0
3、0U/m L。4.1.6 淀粉葡糖苷酶(Am y l o g l u c o s i d a s e) :32 6 0U/m L( 可溶性淀粉) ;2 0 0U/m L( 对硝基酚-麦芽糖苷,p - N P -m a l t o s i d e) 。4.1.7 异淀粉酶(I s o a m y l a s e) :10 0 0U/m L。4.2 试剂配制4.2.1 乙酸溶液(0.2m o l/L) : 准确吸取1.2m L冰乙酸, 用水稀释至1 0 0m L。4.2.2 乙酸钠溶液(0.2m o l/L) : 准确称取2.7 2g三水合乙酸钠, 用水溶解并稀释至1 0 0m L。4.2.3 乙
4、酸盐缓冲液(p H为4.5) : 将2 8m L乙酸溶液(0.2m o l/L) 与2 2m L乙酸钠溶液(0.2m o l/L) 混G B5 0 0 9.2 4 52 0 1 62 合, 用水稀释至1 0 0m L。4.2.4 混合酶液: 分别吸取6 8 0L果聚糖酶、8 4L淀粉葡糖苷酶、1 7L异淀粉酶混合, 加乙酸盐缓冲液稀释至2 0m L。混合酶液临用现配。4.3 流动相4.3.1 流动相A( 含0.1 5m o l/L氢氧化钠) :准确吸取1 5.7m L氢氧化钠溶液(5 0%) , 用预先脱气的水稀释2L, 惰性气体保护。4.3.2 流动相B( 含0.1 5m o l/L氢氧化钠
5、,0.5 0m o l/L乙酸钠) : 准确称量4 1g无水乙酸钠( 或6 8g三水合乙酸钠) , 用流动相A溶解定容至1L, 混匀, 过0.4 5m膜, 脱气。注:配制流动相时, 去离子水需预先脱气0.5h, 定容后的流动相混匀时倒置混匀56次, 不可剧烈振摇。配好的流动相沿储液瓶壁缓缓倒入, 脱气0.5h后惰性气体保护。4.4 参考物质聚葡萄糖 (C6H1 0O5)n : 纯度大于9 0%,C A S:6 8 4 2 4 - 0 4 - 4。注:为保证结果的准确性, 如能确定添加的聚葡萄糖来源, 应选用食品中添加的聚葡聚糖同源的参考物质, 并达到F C C级。4.5 参考物质溶液的配制4.
6、5.1 参考物质储备液(2.0 0m g/g) : 准确称取0.2 0g聚葡萄糖参考物质( 精确至0.0 0 01g) 至已预先称重的1 0 0m L具螺口塞的试样瓶中( 精确至0.0 0 1g) 。加入约1 0 0g预热至8 0的去离子水, 拧紧螺口塞, 涡旋振荡3 0s, 将试样瓶置于8 0水浴1 0m i n, 每隔5m i n振荡一次, 以使聚葡萄糖充分溶解, 取出试样瓶, 冷却至室温, 称重( 精确至0.0 0 1g) 。参考物质储备液于4保存, 有效期1个月。4.5.2 参考物质中间液: 分别精确称量1 0.0g、7.5 0g、5.0 0g、3.7 5g、2.5 0g、1.5 0g
7、参考物质储备液( 精确至0.0 0 01g) 加水至2 0.0g( 精确至0.0 0 01g) , 得到浓度为1.0 0 0m g/g、0.7 5 0m g/g、0.5 0 0m g/g、0.3 7 5m g/g、0.2 5 0m g/g、0.1 5 0m g/g的参考物质中间液。4.5.3 参考物质工作液: 取2m L离心管, 称量( 精确至0.0 0 01g) , 精确称量参考物质中间液0.2 0g( 精确至0.0 0 01g) 转移至已称重的离心管中, 加入酶混合液0.8m L, 称量( 精确至0.0 0 01g) , 振荡混合均匀, 于5 0水浴6 0m i n, 沸水浴1 0m i
8、n, 取出, 冰浴5m i n, 于1 00 0 0r/m i n离心1 0m i n。上清液过0.2 2m滤膜, 进样分析, 得到 浓度分别为2 0 0g/g、1 5 0g/g、1 0 0g/g、7 5. 0g/g、5 0. 0g/g、3 0.0g/g的参考物质工作液系列, 进样分析。以此6点参考物质工作液上机获得工作曲线, 其回归方程的决定系数(R2值) 应不小于0.9 9 5。5 仪器与设备5.1 分析天平: 感量分别为1m g,0.1m g。5.2 恒温水浴箱: 控温精度1。5.3 高速离心机: 转速1 00 0 0r/m i n。5.4 涡旋振荡器。5.5 微量可调移液器:2 0L2
9、 0 0L、2 0 0L10 0 0L。5.6 针筒式过滤器: 孔径0.2 2m。5.7 超滤离心设备:1 0 00 0 0D a分子截留, 聚醚砜膜,0.5m L容积。5.8 磁力搅拌器: 带搅拌子。5.9 离子色谱仪:配备脉冲安培检测器、 梯度泵。G B5 0 0 9.2 4 52 0 1 63 6 操作步骤6.1 试样处理6.1.1 固体试样: 研磨、 粉碎, 分析前密闭保存, 避免水分变化。6.1.2 液体试样: 测定前需混合摇匀。6.2 聚葡萄糖提取6.2.1 固体试样: 取1 0 0m L具塞试样瓶, 加入1粒磁力搅拌子, 盖上螺口塞, 称量( 精确至0.0 0 1g) , 记为m
10、1。准确称取一定量试样( 约含聚葡萄糖0.0 5g, 精确至0.0 0 01g, 记为m2) 至试样瓶中, 加1 0 0m L预热至8 0的水, 磁力搅拌3 0s,8 0水浴1 0m i n, 每5m i n磁力搅拌3 0s。取出试样瓶冷却至室温后称量( 精确至0.0 0 1g) , 记为m3。6.2.2 液体试样( 饮料、 液态奶等) : 取1 0 0m L具塞试样瓶, 称量( 精确至0.0 0 1g) , 记为m1。准确吸取一定量试样( 约含聚葡萄糖0.0 5g, 精确至0.0 0 01g, 记为m2) 至试样瓶中, 加1 0 0m L水, 振荡混合均匀, 称量( 精确至0.0 0 1g)
11、 , 记为m3。6.2.3 适量吸取样液至2.0m L的离心管中,1 00 0 0r/m i n离心1 5m i n, 取上清液过0.2 2m滤膜, 取0.4 5m L滤液加入1.5m L带有分子截留膜的离心管中, 于1 00 0 0r/m i n超滤离心3 0m i n。注意观察是否离心完全及离心液的澄清度, 如截留膜上方留有样液或离心液混浊, 可加大转速、 延长离心时间, 或增加稀释倍数(F) 。6.3 酶解6.3.1 取2m L离心管, 称量( 精确至0.0 0 01g) , 记为m4。6.3.2 吸取0.2 m L超滤离心液加入离心管中, 称量( 精确至0.0 0 01g) , 记为m
12、5; 加入酶混合液0.8m L,称量( 精确至0.0 0 01g) , 记为m6; 振荡混合均匀, 于5 0水浴6 0m i n, 沸水浴1 0m i n, 取出,冰浴5m i n, 于1 00 0 0r/m i n离心1 0m i n。上清液过0.2m滤膜, 进样分析。上清液需在7 2h内检测。6.4 色谱参考条件检测条件见附录B。6.5 分析结果的表述试样中聚葡萄糖含量按式(1) 计算:X=Fcm6-m4m5-m4m3-m1m21 0 01 06(1) 式中:X 试样中聚葡萄糖的含量, 单位为克每百克(g/1 0 0g) ; 由标准曲线计算得到的聚葡萄糖的浓度, 单位为微克每克(g/g)
13、;F 稀释倍数;c 聚葡萄糖参考物质的纯度,%;m6 离心管、 酶解样液、 混合酶液的总质量, 单位为克(g) ;m4 空离心管质量, 单位为克(g) ;m5 离心管、 用于酶解样液总质量, 单位为克(g) ;m3 加水后试样瓶总质量, 单位为克(g) ;m1 试样瓶总质量, 单位为克(g) ;G B5 0 0 9.2 4 52 0 1 64 m2 试样质量, 单位为克(g) ;1 0 0 将结果表示为百分含量的系数;1 06 微克(g) 与克(g) 的转换系数。以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示, 结果保留三位有效数字。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差
14、值不得超过算术平均值的1 0%。8 其他最小称样量为5g时, 固体试样检出限为0.2m g/1 0 0g, 定量限为0.5m g/1 0 0g; 液体试样为检出限为0.1 5m g/1 0 0g, 定量限为0.5m g/1 0 0g。G B5 0 0 9.2 4 52 0 1 65 附 录 A酶活性测定A.1 果聚糖酶酶活力测定方法A.1.1 原理在p H4.5, 温度4 0, 底物( 蔗果三糖) 浓度为1 0mm o l/L的标准条件下,1m i n释放1m o l果糖所需的酶量为1U。A.1.2 试剂和溶剂A.1.2.1 乙酸(0.2m o l/L) : 准确吸取1 2m L冰乙酸, 用水
15、稀释至10 0 0m L。A.1.2.2 乙酸钠溶液(0.2m o l/L) : 准确称取2 7.2g三水合乙酸钠, 用水溶解并稀释至10 0 0m L。A.1.2.3 乙酸盐缓冲液(p H为4 .5) : 将2 8 0m L乙酸溶液(0 .2m o l/L) 与2 2 0m L乙酸钠溶液(0.2m o l/L)混合, 用水稀释至10 0 0m L。A.1.2.4 氢氧化钠溶液(2m o l/L) : 准确称取8 0g氢氧化钠, 用水溶解并稀释至10 0 0m L。A.1.2.5 3,5 -二硝基水杨酸试剂(D N S) : 将6.3g3,5 -二硝基水杨酸试剂和2 6 2m L2m o l/
16、LN a OH溶液, 加到5 0 0m L含有1 8 5g酒石酸钾钠的热水溶液中, 再加5g苯酚和5g亚硫酸钠, 搅拌溶解, 冷却后加蒸馏水定容至10 0 0m L, 贮于棕色瓶中备用。A.1.2.6 果糖标准液(1m g/m L) : 准确称取8 0烘至恒重的分析纯果糖1 0 0m g, 置于小烧杯中, 加少量乙酸盐缓冲液溶解后, 转移到1 0 0m L容量瓶中, 用乙酸盐缓冲液定容至1 0 0m L, 混匀,4冰箱中保存备用。A.1.2.7 蔗果三糖溶液(1 0 mm o l/L) : 精确称取5.0 4g蔗果三糖, 用乙酸盐缓冲液溶解并稀释至10 0 0m L。A.1.3 仪器A.1.3
17、.1 分析天平。A.1.3.2 电热恒温水浴锅。A.1.3.3 可见光分光光度计。A.1.3.4 计时器。A.1.4 分析步骤A.1.4.1 果糖标准曲线的绘制吸取乙酸盐缓冲液4.0m L至2 5m L刻度试管中, 加入D N S试剂5.0m L, 沸水浴加入5m i n, 冷却至室温, 用水定容至2 5m L, 制成标准空白样。分别吸取果糖标准液1.0 0m L、2.0 0m L、3.0 0m L、4.0 0m L、5.0 0m L、6.0 0m L、7.0 0m L于1 0 0m L容量瓶中, 用乙酸盐缓冲液定容至1 0 0 m L, 配制成浓度0.1 0 m g/m L、0.2 0 m
18、g/m L、0.3 0 m g/m L、0.4 0m g/m L、0.5 0 m g/m L、0.6 0 m g/m L、0.7 0 m g/m L果糖标准使用液, 吸取果糖标准使用液各2.0m L,分别加入到2 5m L刻度试管中, 再分别加入2.0m L乙酸盐缓冲液和5.0m LD N S试剂。将各管摇匀, 在沸水浴中准确加热5m i n, 取出, 冷却至室温, 加水定容至2 5m L, 加塞后颠倒混匀, 放置3 0m i n,以标准空白液为对照调零, 在5 4 0n m处测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标, 果糖含量(m g)G B5 0 0 9.2 4 52 0 1 66 为横坐标, 绘
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