细胞工程实验室配置及基本技术.pptx
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1、第三章第三章 细胞工程实验室配置及基本技术细胞工程实验室配置及基本技术1 1 实验设置实验设置2 2 基本技术要求无菌环境与无菌操作基本技术要求无菌环境与无菌操作3 3 培养条件培养条件4 4 离体培养的营养需求离体培养的营养需求1 1 实验室设置实验室设置细胞工程实验室必须满足三个基本的需要:细胞工程实验室必须满足三个基本的需要:l实验准备,包括培养基配制,洗涤与灭菌等;实验准备,包括培养基配制,洗涤与灭菌等;l无菌操作;无菌操作;l控制培养。控制培养。1.1.实验室设置实验室设置 一一.实验室组成实验室组成 1 1基本实验室基本实验室 准备室准备室 准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备
2、工作。要求准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮,通风条件好。宽敞明亮,通风条件好。接种室接种室 接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好,干燥清洁,接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好,干燥清洁,能较长时间保持无菌。为了保持清洁,接种室应防止空气对流。能较长时间保持无菌。为了保持清洁,接种室应防止空气对流。培养室培养室 培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照和温度,其次为防止微生物感染,培养室应保持干燥要能控制光照和温度,其次为防止微生物感染,培养室应保持干燥和清洁。和清洁。1.1.实验室设置实
3、验室设置 一一.实验室组成实验室组成2 2辅助实验室辅助实验室 细胞学实验室细胞学实验室 其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥,使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。洁、明亮、干燥,使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。摄影室及暗室摄影室及暗室 其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有条件的情况下可建立此实验室。条件的情况下可建立此实验室。生化分析室生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室中,应建立相应在以培养细胞产物为主要目的的实验室中,应建立相应的分析化验实验室,以便于对
4、培养物的有效成分随时进行取样检查。的分析化验实验室,以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。1.1.实验室设置实验室设置 一一.实验室组成实验室组成Culture roomPreparation roomsterilizingSterile operationCytology roomTransition area实验室布局示意图2.2.实验室设置实验室设置 二二.基本设备配置基本设备配置基本设备基本设备 冰箱、天平、酸度计、纯水器、电炉、培养基分装器、冰箱、天平、酸度计、纯水器、电炉、培养基分装器、搅拌器。搅拌器。灭菌设备灭菌设备 蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾蒸汽压力灭菌
5、锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾 消毒器、紫外灯。消毒器、紫外灯。无菌操作设备无菌操作设备 净化工作台、接种箱。净化工作台、接种箱。光温控制设备光温控制设备 时间程序控制器、空调及温度感应器。时间程序控制器、空调及温度感应器。细胞培养设备细胞培养设备 培养设备根据需要而定,包括培养架、培养箱、培养设备根据需要而定,包括培养架、培养箱、摇床、摇床、生物反应器等。生物反应器等。细胞学鉴定设备细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜。2.2.实验室设置实验室设置 二二.基本设备配置基本设备配置灭菌设备灭菌设备2.2.实验室设置实验室设置 二二.
6、基本设备配置基本设备配置无菌操作设备无菌操作设备2.2.实验室设置实验室设置 二二.基本设备配置基本设备配置光光照照培培养养及及控控制制设设备备2.2.实验室设置实验室设置 二二.基本设备配置基本设备配置2.2.实验室设置实验室设置 二二.基本设备配置基本设备配置2.2.基本技术基本技术 一一.洗涤技术洗涤技术l洗涤液:洗涤液:弱弱 用重铬酸钾用重铬酸钾5050g g加入蒸馏水加入蒸馏水1 1L L,加热溶化,冷却后加热溶化,冷却后再缓慢加入浓硫酸再缓慢加入浓硫酸9090mlml。中中 用重铬酸钾用重铬酸钾5050g g加入蒸馏水加入蒸馏水100100mlml,加热溶化,冷却加热溶化,冷却后再
7、缓慢加入浓硫酸后再缓慢加入浓硫酸875875mlml。强强 与浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾,直与浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾,直到重铬酸钾达到饱和为止。一般浓硫酸到重铬酸钾达到饱和为止。一般浓硫酸1 1L L加入重铬酸钾加入重铬酸钾5050g g。2.2.基本技术基本技术 一一.洗涤技术洗涤技术l洗涤方法洗涤方法 玻璃器皿洗涤玻璃器皿洗涤 新的玻璃器皿新的玻璃器皿 已使用过的试管、烧杯、三角瓶已使用过的试管、烧杯、三角瓶 吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品 塑料用品洗涤塑料用品洗涤 一般用合成洗涤剂洗涤,因其附着力较一般用合成洗涤剂洗涤,因其附着力
8、较 强,因此冲洗时必须反复多次,最后用强,因此冲洗时必须反复多次,最后用 蒸馏水冲洗。蒸馏水冲洗。金属用品洗涤金属用品洗涤 金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤,金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤,需要清洗时,一般用酒精擦洗,然后火需要清洗时,一般用酒精擦洗,然后火 焰干燥。焰干燥。2.2.基本技术基本技术 二二.灭菌、消毒灭菌、消毒 物理方法:物理方法:物理灭菌物理灭菌 干热、湿热、射线处理干热、湿热、射线处理、过滤、过滤、离心沉淀等离心沉淀等 化学方法:化学方法:消毒剂、抗菌素灭菌消毒剂、抗菌素灭菌 外植体灭菌技术:外植体灭菌技术:对外植体伤害小,灭菌效对外植体伤害小,灭菌效 果好果好2.2.基
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