免疫酶斑点试验.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,myszjpwd-myxr-xm,医学健康系列精品课件,医学健康精品文档库,珍爱生命 关注健康,免疫酶斑点试验,Dot-ELISA,1.免疫酶斑点试验,2.录像:单克隆抗体的制备,实验内容,实验目的,2.了解免疫酶斑点技术的用途。,1.了解免疫酶斑点技术的基本原理及方法。,3.了解单克隆抗体制备过程。,免疫酶斑点技术的特点,1.,Ag-Ab,反应,具有,高特异性;,2.酶催化作用的高效性,具有,高敏感性;,3.,NC,膜的运用,(1)微量抗原的检测,(2)抗体分泌细胞、细胞因子产生细胞的筛选,(3)自身抗体的检查,一、实验内容,免疫酶斑点试验,检测微量人,IgG,二、实验材料,Ag:人,IgG,阴性对照:,NS,酶标记抗体:羊抗人,IgG,酶:,辣根过氧化物酶(,HRP,),底物:邻苯二胺(,OPD,),封闭液:5脱脂奶粉,洗涤液:磷酸盐缓冲液;,结果判断,无色为阴性;,明显棕色斑点为阳性。,免疫斑点试验的影响因素,2.酶结合物浓度对试验成功与否至关重要。最适浓度常与包被抗原浓度有关,应根据试验具体条件作方阵滴定来确定。,1.包被,NC,膜的抗原浓度对试验结果影响较大。多以蛋白质含量5001000,g,ml,为宜。过低则降低试验的敏感性。,3.用抗原包被,NC,检测抗体时,待检样品加样不宜过多。加样过多可使相邻的样品混淆,一般,510,l,即可。,