血凝及血凝抑制实验.ppt
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1、实验二实验二 血凝及血凝抑制血凝及血凝抑制实验实验 实验目的实验目的血凝试验:滴定病毒的血凝效价(病毒的凝集价),采用一定的病毒量,通常采用4个血凝单位。血凝抑制试验:应用标准病毒液测定血清中的相应抗体或应用特异性抗体鉴定新分离的血凝性病毒检测实验用鸡群有无病毒感染和监测鸡的免疫状态。掌握基本操作技术,了解其实用价值 实验原理实验原理 血凝素(HA)柱状流感病毒结构模式图刺突:亚型特异性抗原,易变异 血凝素(HA,从H1H15):呈柱状 功能:吸附细胞:与细胞上受体结合,使病毒侵入细胞凝集多种动物的红细胞(血凝试验)具抗原性:其抗体能中和病毒-中和抗体 抑制血凝(血凝抑制试验)血凝试验原理血凝
2、试验原理血凝素(hemagglutinin HA):由病毒基因编码的糖蛋白刺突。与病毒吸附和传入宿主细胞有关。HA能与人或其它动物多种红细胞表面N乙酰神经氨酸酶受体结合引起红细胞凝集。为病毒的 红细胞凝集反应或血凝反应。血凝原理血凝抑制原理血凝抑制试验原理血凝抑制试验原理病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗体所抑制,即抗体与病毒结合后,血凝素无法吸附于红细胞表面的受体上,用免疫血清阻止红细胞凝集的现象,称为血凝抑制血凝抑制实验材料实验材料器材:U型或V型微量反应板、微量移液器、枪头试剂:1%鸡红细胞、NDIV血凝素、NDIV抗血清、生理盐水实验步骤实验步骤1.取96孔V型反应板1块置于水平实
3、验台上,在第1排1-10孔内加入25ul生理盐水,第11孔不加。第12孔加25ul生理盐水2.在第1孔内加入血凝素25ul,混匀后吸出25ul加入第2孔内,再混匀后吸出25ul加入第3孔内,依次类推至第10孔时弃掉25ul。第12孔不加作阴性对照孔。3.在1-12孔均加入25ul的生理盐水。4.在每孔内加入25ul1%的鸡红细胞悬液,震荡,室温静止感作15-30min,每5min观察一次结果。5.计算血凝效价,稀释使成为四价备用血凝试验结果判定效价判定:凝集特别显著:“”凝集现象次之:“”凝集清楚可见:“”稍显凝集者:“”血凝效价:呈“”凝集时的最高稀释度。此时的稀释度即为1个血凝单位。结果判
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