猴痘防控技术指南（2022年版）.pdf

猴痘防控技术指南（2022年版）猴痘是由猴痘病毒（Monkeypox virus,MPXV）感染所致的 一种病毒性人兽共患病，临床表现主要为发热、皮疹、淋巴结肿 大。其既往主要发生在中非和西非，病死率为通过接种 疫苗可获得有效保护。由于在1980年消灭了天花并随后停止接种 天花疫苗，猴痘已成为公共卫生领域最重要的正痘病毒。2022年 5月初以来，已有20多个非地方性流行国家发现多例猴痘病例，且已出现人际传播。为指导各地规范处理猴痘疫情，特制定本防 控技术指南。一、疫情概况猴痘病毒于1958年在绿猴中被发现，1970年在刚果民主共 和国一名疑似天花患者的标本中首次分离到猴痘病毒，为首例确 诊的人类猴痘病例。人类猴痘病例主要分布在非洲中、西部热带雨林地带。自 1970年以来，已有H个非洲国家（贝宁、刚果民主共和国、刚 果共和国、喀麦隆、中非共和国、尼日利亚、科特迪瓦、利比里 亚、塞拉利昂、加蓬和南苏丹）报告人类猴痘病例。1996至1997 年，刚果民主共和国曾发生一次大规模暴发疫情，累计报告511 例，死亡5人。2001年和2002年，刚果民主共和国再次报告猴 痘暴发疫情，确诊病例485例，死亡25人。2017年和2018年，尼日利亚报告该国历史上规模最大的猴痘疫情，累计报告122例 2病例，死亡7人。2022年非洲共有5个国家报告猴痘病例，分别 为刚果民主共和国（1月1日至5月8日报告1238例，死亡57 人）、尼日利亚（1月1日至5月30日报告46例，无死亡）、喀麦隆（2021年12月15日至2022年5月1日报告25例，死亡 9人）、中非共和国（3月4日至5月17日报告8例，死亡2人）和刚果共和国（5月21日至5月23日报告2例，无死亡）。非洲以外地区的猴痘疫情较少，且本地传播有限。美国2003 年猴痘暴发疫情波及6个州，累计报告病例47例，为非洲以外首 次报告猴痘病例的国家；调查显示多数病例有宠物草原犬鼠接触 史，这些草原犬鼠曾接触加纳进口已感染猴痘病毒的动物。2021 年7月和H月，美国各报告1例尼日利亚输入病例。英国于2018 年、2019年和2021年累计报告7例猴痘确诊病例，其中，输入 病例均有尼日利亚旅行史，回到英国后发生有限续发传播。2022 年5月7日至26日，全球已有英国、西班牙、葡萄牙、美国、加 拿大等23个国家报告猴痘疫情,累计报告确诊病例257例和疑似 病例约120例，波及欧洲、北美洲、南美洲、大洋洲（澳大利亚）和亚洲（阿联酋）。多国疫情显示，猴痘病毒已发生人际传播，主要为男男同性恋聚集性疫情。需要动态严密关注并分析感染和 流行态势。二、疾病概述（一）病原学猴痘病毒（MPXV）是全长约为197kb的双链DNA病毒，属于痘 3病毒科正痘病毒属，该病毒很容易人工培养，在人、猴、鼠、兔 等来源的细胞和鸡胚绒毛尿囊膜中都能很好地生长并引起细胞病 变。猴痘病毒的形态与其它正痘病毒一致，外形为圆角砖形或卵 圆形，大小为200nmX250nm,外周为30nm的外膜,环绕匀质的 核心体。猴痘病毒与天花病毒、痘苗病毒和牛痘病毒是正痘病毒 中对人类致病的4种病毒，它们都含有可溶性抗原、核蛋白抗原 和红细胞凝集素，抗原性质基本相同，彼此之间有交叉免疫性。猴痘病毒存在西非和刚果盆地两个分支，两者具有明确的流行病 学和临床转归差异，西非分支猴痘患者的病死率约为3.6%,刚果 盆地支猴痘患者病死率可达10.6%o 2022年5月以来的猴痘疫情 经测序分析，病毒属于西非分支。猴痘病毒耐干燥和低温，在土壤、痂皮和衣被上可生存数月。该病毒对热敏感,加热至56。30分钟或60C 10分钟即可灭活,紫外线和一般消毒剂均可使之灭活，对次氯酸钠、氯二甲酚、戊 二醛、甲醛和多聚甲醛等敏感。（二）流行病学1.传染源猴痘病毒的主要宿主为非洲啮齿类（非洲松鼠、树松鼠、冈 比亚袋鼠、睡鼠等），灵长类（多种猴类和猿类）由于与感染的 啮齿类动物接触偶可感染。感染动物及猴痘病毒感染者是主要传 染源。2.传播途径4病毒经黏膜和破损皮肤侵入人体。主要通过接触感染动物的 呼吸道分泌物、病变渗出物、血液、其它体液，或被感染动物咬 伤、抓伤而感染。人与人之间主要通过密切接触传播，亦可在长 时间近距离接触时通过飞沫传播，接触病毒污染的物品也有可能 感染。病毒还可通过胎盘从孕妇传播给胎儿。3.人群易感性既往接种过天花疫苗者对猴痘病毒存在一定程度的交叉保 护力，因此，未接种过天花疫苗的人群对猴痘病毒普遍易感。（三）临床表现潜伏期5-21天,多为6-13天。发病早期出现发热、寒战、头痛、嗜睡、乏力、背部疼痛和 肌痛等前驱症状。90%患者出现明显的浅表淋巴结肿大，如颈部、腋窝、腹股沟等。发病后1-3天出现皮疹。首先出现在面部，逐渐蔓延至四肢,手心和脚掌均可出现皮疹。皮疹经历从斑疹、丘疹、疱疹、脓疱 和结痂几个阶段，不同形态的皮疹可同时存在。疱疹和脓疱疹多 为球形，直径约0.5-1厘米，质地较硬，可伴明显痒感和疼痛。疱疹数量从几个到数千个不等，多呈离心性分布。可累及口腔黏 膜、消化道、生殖器、结膜和角膜等。病程约2-4周。结痂脱落后可遗留红斑或色素沉着，甚至瘢痕，瘢痕持续时 间可长达数年。部分患者可出现并发症，包括皮损部位继发细菌感染、呕吐 5和腹泻引起的严重脱水、支气管肺炎、脑炎、角膜感染等。三、预防（一）宣传教育出入境人员和涉疫地区人员需关注所在国的猴痘疫情信息。在猴痘地方性流行地区，尽量避免与啮齿类动物和灵长类动物（包 括患病或死亡的动物）发生接触，不直接接触动物的血和肉，必 须彻底煮熟后才能食用。处理染病动物或感染组织以及在屠宰过 程中，应配戴手套及其他适当的防护用品。同时加强个人手卫生。海关、卫生健康等部门可采取多种形式，积极、广泛地宣传猴痘 病毒病防治知识，使公众及时、有效地采取预防手段；并正确引 导舆论，避免社会恐慌。（二）疫苗接种由于既往猴痘流行地区局限，且是一种自限性疾病，临床症 状通常较轻，猴痘预防一般采取以管理传染源为主的综合性防治 措施，但亦有疫苗可以对特定人群进行预防。由于存在交叉免疫，接种天花疫苗可预防猴痘，我国既往的 天花疫苗为复制型组织培养痘苗，暴露前接种可有效保护人群免 受感染，而暴露后2周内，尤其是最初4天内接种者，约85%可产 生免疫力，减轻症状严重性。2019年美国批准了一款可用于职业暴露风险人群的非复制 型猴痘疫苗Jynneos（MVA-BN）,国内非复制型痘苗正在研发中。（三）主动就医和及时报备6疫区归国人员需注意自我健康监测，出现皮疹等症状时，应 主动就医，并告知接诊医生疫区旅行史，以助于诊断和治疗。若 在国外有过接触史和暴露史，尚未出现症状，可主动联系当地疾 控中心进行咨询和报备。（四）限制动物贸易限制非洲啮齿类动物和灵长类动物的进口贸易，减少病毒向 我国扩散风险。建议将感染动物与其他动物隔离，并立即实施检 疫。对任何可能与感染动物有接触的动物，应进行检疫隔离；根 据标准预防措施处理，观察症状30天。四、诊断（一）疑似病例出现发热、淋巴结肿大伴有皮肤黏膜皮疹表现者，同时具备 以下流行病学史中的任何一项：1.发病前21天内有境外猴痘病例报告地区旅居史；2.发病前21天内与猴痘确诊病例有密切接触；3.发病前21天内接触过啮齿类、非人类灵长类等猴痘病毒 感染动物的血液、体液和分泌物。（二）确诊病例符合疑似病例定义者，经实验室检测，猴痘病毒核酸阳性或 病毒分离阳性者。（三）鉴别诊断主要和其他发热出疹性疾病鉴别，如水痘、带状疱疹、单纯 7疱疹、麻疹、登革热等。大部分猴痘病毒感染者伴有明显的浅表 淋巴结肿大，皮疹呈离心性分布。此外，还要和皮肤细菌感染、疥疮、梅毒和过敏反应等鉴别。五 疾病控制疾病控制旨在实现早发现、早报告、早诊断、早调查、早处 置。其中，病例发现、病例报告、流行病学调查和实验室检测等 部分内容，在国家卫生健康委办公厅关于做好猴痘病例监测工 作的通知（国卫明电2022）224号）文件要求的基础上进一 步细化了工作内容和要求。（一）病例发现各级各类医疗卫生机构日常接诊发热伴出疹病人时，应注意 询问病例流行病学史，同时进行病原学筛查，排除水痘、风疹、麻疹或其他明确病因引起。现有入境人员隔离期间，在排查新冠病毒感染的同时，各地 应主动对入境人员进行猴痘病毒排查,特别是入境前21天内有猴 痘疫情报告国旅居史的人员，密切监测出疹情况，发现可疑人员 或疑似病例，应按相关规定及时报告辖区疾控机构并转送定点收 治医疗机构。（二）病例报告各级各类医疗卫生机构发现疑似或确诊病例后，应于24小 时内通过中国疾病预防控制信息系统的监测报告管理模块进行网 络直报，报告疾病类别选择“其他传染病”下的“猴痘”。如为 8输入性病例须在备注栏中注明来源地区，统一格式为“境外输入/X国家或地区”或“境内输入/X省X市X县”。不具备网络直报 条件的医疗机构，需在规定时限内将传染病报告卡信息报告属地 乡镇卫生院、城市社区卫生服务中心或县级疾病预防控制机构进 行网络报告，同时传真或寄送传染病报告卡至代报单位。负责病 例网络直报的医疗卫生机构，要根据实验室检测结果、流调进展 及时对病例信息进行复核、订正。各县（区）出现首例猴痘病例或者聚集性病例（2例），辖区疾控中心应当通过突发公共卫生事件报告管理信息系统在2 小时内进行网络直报，事件级别选择“未分级”；并根据风险评 估结果，及时进行事件级别调整并报告。（三）流行病学调查县（区）级疾控机构接报后要立即按照猴痘疫情流行病学 调查指南、猴痘接触者判定及管理指南的要求（附件1和 2）,组织开展流行病学调查，完成病例个案调查表，搜索密切接 触者和一般接触者。（四）病例和密切接触者管理疑似和确诊病例应由当地卫生健康行政部门指派的专用交 通工具，运送到指定专业传染病治疗机阂进行严格隔离观察和治 疗。对疑似和确诊病例应严格单人单间隔离，落实污染物处置，并尽快采样开展实验室病原学检测以明确诊断。对疑似和确诊病 例的密切接触者要进行登记、集中隔离和医学观察，医学观察期 9限为21天。（五）实验室检测收治病例的医疗机构要采集病例的相关临床标本（包括痘疱 液、皮疹和痘痂和/或病灶的拭子、咽拭子、全血、血清等标本），尽快按程序将标本送至本地疾控机构,进一步开展相关病原检测,具体参照猴痘病毒实验室检测技术指南（附件3）。根据人 间传染的病原微生物名录中的有关规定，猴痘病毒生物危害分 类为第一类，是一种高致病性病毒。涉及活病毒的操作，如病毒 培养、未经培养的阳性或疑似阳性样本灭活、检测等需在BSL-3 及以上实验室开展。采用灭活管采样或使用其他有效方法灭活后 的样本可在生物安全二级（BSL-2）实验室或PCR检测的专门区域 或房间进行，严格按照分区操作原则操作。原则上，病例标本先由省级及以下疾控机构符合上述实验室 生物安全要求的实验室进行初步检测，猴痘阳性标本送中国疾病 预防控制中心病毒病预防控制所复核。省级疾控机构不具备猴痘 病毒检测条件的，应立即送病毒病所进行检测。各省首例需经国 家卫生健康委组织专家会诊后确认。（六）院内感染控制疑似病例和确诊病例应安置在隔离病房。疑似病例单间隔 离。确诊病例需隔离至结痂完全脱落。医务人员执行标准预防，佩戴一次性乳胶手套、佩戴医用防 护口罩、防护面屏或护目镜、一次性隔离衣等，同时做好手卫生。10经专家评估后，可考虑为一线诊疗人员及时安排接种天花疫苗。（七）消毒按照猴痘病毒的传播途径，重点消毒患者的衣物、毛巾、床 单、餐具等个人用品，被患者分泌物污染的物品及其他可能污染 的环境和物体表面。接触患者或其污染的物品和环境时，应加强 个人手卫生。具体消毒措施参见猴痘消毒技术指南（附件4）。六、治疗和预后（一）治疗目前国内尚无抗猴痘病毒药物。治疗主要包括对症支持治疗 和继发性细菌感染的治疗。（二）预后猴痘为自限性疾病，大部分预后良好。严重病例常见于年幼 儿童、免疫功能低下人群，预后与感染的病毒株、病毒暴露程度、既往健康状况和并发症严重程度等有关。附件：1.猴痘疫情流行病学调查指南2.猴痘接触者判定和管理指南3.猴痘病毒实验室检测技术指南4.猴痘消毒技术指南11附件1猴痘疫情流行病学调查指南一、目的流行病学调查是传染病预防控制的关键措施和重要工作环 节。做好猴痘流行病学调查对于猴痘疫情的预防和控制至关重要,其主要目的是：1.核实诊断；2.查找传染源和传播途径；3.追踪和管理患病的人和动物的接触者，阻断传播；4.监测和评价疫情预防和控制措施落实情况及效果。二、工作内容1.猴痘病例个案调查；2.接触者追踪和调查。三、工作程序和方法（一）病例个案调查1.接到猴痘病例（疑似病例、确诊病例）报告后，报告病例的 医疗机构所在地的县区级疾病预防控制机构，应在最短时间内派 出流行病学调查人员，对报告病例进行流行病学个案调查，同时,派出消毒专业人员到病家和病例的其它滞留地点进行终末消毒。2.开展个案调查时，要认真、详细了解和记录患者发病前的 12国外旅游史和患病野生动物接触史等情况，发病后的密切接触者 和一般接触者情况，以及疫苗接种史等信息。调查内容详见猴 痘个案调查表（表1）。（二）接触者追踪和调查疾病预防控制机构根据猴痘病例个案调查获得的信息，及时 开展猴痘病例或可疑动物的密切接触者和一般接触者的追踪和调 查。接触者判定和处理原则详见猴痘接触者判定和管理指南（附 件2）。密切接触者调查内容详见猴痘密切接触者调查表（表 2）o附表：1.猴痘个案调查表2.猴痘密切接触者调查表13 表1猴痘个案调查表国标码 病例编码1.一般情况：1.1 姓名：_1.2 身份证号码：1.3 性别：男 女口1.4 年龄（岁）：1.5 联系电话：_1.6 职业：口（1）幼托儿童（2）散居儿童（3）学生（4）医生 教师（6）保育保姆（7）餐 饮业（8）商业服务（9）工人（10）民工（H）农民（12）牧民（13）渔（船）民（14）干部职员（15）离退人员（16）家务待业（17）其他1.7 现居住地（详填）：省 市 县（区）乡（街道）村（小区）号1.8 户口所在地（详填）：省 市 县（区）乡（街道）村（小区）号1.9 隔离酒店地址：省 市 县（区）乡（街道）号1.10 工作单位：_1.11发病时间：_一年_月_日1.12发病地点：_省_市_县（区）1.13初诊时间：_年_月_31.14 初诊单位：_1.15 初次诊断：（1）疑似病例（2）确诊（3）其它 口1.16 入院时间：一年一月S/1.17所住医院名称：_1.18 住院号：1.19入院诊断：（1）疑似病例（2）确诊（3）其它：142.临床表现:2.1发热有无C2.L1体温（入院时）2.1-2首次发热日期：_年_后32.2寒战有无2.3出汗有无2.4头痛有无2.5背痛有无2.6咽痛有无2.7浅表淋巴结肿大有无2.8咳嗽有无2.9呼吸急促有无2.10嗜睡有无2.11乏力有无2.12皮疹有无2.12.1若出现皮疹，请明确部位：2.12.2首次出现皮疹日期：年 月 日2.13其他临床表现：_3.实验室检查：3.1猴痘病毒分离（1）阴性（2）阳性3.2猴痘病毒核酸检测（1）阴性（2）阳性4.流行病学史调查：4.1发病前21天有无境外旅居史有无 口若有,转4.L14.1.1曾首往国家/城市：_4.1.2接触动物史（包括啮齿类，如非洲松鼠、树松鼠、冈比亚袋鼠、睡鼠等），灵长类如多种猴类和猿类）是否若有，则转4.1.34.1.3动物名称：4.2 若无境外旅居出史，发病苜21天有无暴露于有临床症状（如结膜炎、呼吸症状、或皮疹）的进口或野生啮齿类和灵长类动物（1）有（2）无 口154.3 若无境外旅居出史，发病前21天有无暴露于疑似病例、确诊病例有 无 口4.4发病前21天，是否有同性性行为（1）有（2）无 口4.5发病后密切接触者：姓名性别年龄与患者关系住址联系电话备注5.转归与最终诊断情况（随访或根据医疗报告完成）5.1最后诊断：（1）确诊病例（2）其它疾病诊断日期：一年一月日5.2转归：（1）痊愈（2）死亡 口若病例死亡，则填写5.2.15.2.1 病例死亡日期：年 月 a调查单位：_调查者签名：猴痘病例个案调查表填表说明1.请您月圆珠笔或钢笔填写，字迹要工整。2凡是数字，都填写阿拉伯数字如：0、1、2、3、o3.请将所选择答案的序号写在题后的“口”内。4.使用6位国标码，如吉林省为田血5.所有涉及日期的填写到日，如入院时间为2003年4月5日，则在相应的栏目中填写 叨旺四16表2猴痘密切接触者调查表国标码病例身份证号码：病例所住医院：病例姓名：病例编码口 住院号：接触者序号 1.一般情况：1.1 姓名：1.2 身份证号码：1.3 性别：男 女 1.4 年龄（岁）：1.5 职业：1.5.1 医院工作人员 口（1）医生（2）护士（3）护工（4）检验（5）兽医（6）其他1.5.2 非医院工作者：口（1）幼托儿童（2）散居儿童（3）学生（4）教师（5）保育保姆（6）餐饮业（7）商业服务（8）工人（9）民工（10）农民（11）牧民（12）渔（船）民（13）干部职员（14）离退人员（15）家务待业（16）动物饲养员（17）宠物销售人员（18）其他1.6 现居住地（详填）：省 市 县（区）乡（街道）村（小区）号1.6.1 联系电话：1.7 工作单位：_1.8 户口所在地（详填）：省 市 县（区）乡（街道）村（小区）号1.9 痘苗接种史：（1）有（2）无 口17若有,1.9.11.9.21.9.3转 1.9.1痘苗接种次数 第一次接种日期第二次接种日期1.10管理方式:家中医学观察（2）定点医院隔离观察（3）无隔离观察 口L10.1开始隔离或医学观察日期1.11转归：（1）解除隔离（2）转为疑似病例（4）脱离隔离（5）失访（3）转为确诊病例 其它1.11.1若解除隔离，则解除日期：/口1.11.2 若转为疑似或确诊病例，则是否隔离治疗，（1）是（2）否 口（若否,跳转至2）1.11.3 如是，则治疗医院名称1.11.4 开始隔离治疗日期：/口2.可能的接触地点：2.1家是否2.2工作单位是否2.3学校是否2.4集体宿舍是否2.5医院是否2.5.1若是，则医院名称2.6 室内公共场所（1）是（2）否 口2.7 飞机、火车或轮船（1）是（2）否 口2.7.1若是，则具体班次2.8隔离点（1）是（2）否 口2.8.1 若是，则隔离点名称3.医务人员和兽医与猴痘病人或可疑患病动物接触方式调查:3.1诊查病人或动物是否3.2护理病人是否3.3检验标本是否183.4 辅助检查（1）是（2）否 口3.5 接触病人或可疑患病动物分泌物、排泄物等是 否 口3.6病房保洁和污物处理：（1）是否3.7其它方式：_4.其他与猴痘病例接触方式：4.1与病例同处一室是否4.2与病例同一病区是否4.3与病人共用卧具、食具、茶具、毛巾、玩具等（1）是否 口4.4接触病人分泌物、排泄物等是否4.6探视病人是否4.7发生性行为是否4.8其他方式：_5.与可能感染猴痘的动物接触方式5.1接触动物（1）是否接触方式：（1）宰杀（2）临时照顾（3）饲养（4）参观（5）其他 口5.2接触生病动物（1）是否接触方式：（1）宰杀（2）临时照顾（3）饲养（4）参观（5）其他口5.3接触动物排泄物（1）是否5.4 其他接触方式：_6.最后一次接触日期：/口调查单位：_调查时间：年月3调查者签名：_19附件2猴痘接触者判定和管理指南猴痘接触者判定和处理原则主要参考世界卫生组织和欧盟 疾病控制中心等猴痘相关防治技术指南。一、判定标准（一）密切接触者1.日常生活、学习、工作中密切接触者（1）接触过猴痘疑似病例、确诊病例的人，包括：性伴侣;居住在同一家庭或类似环境中的人（如露营等）；在病例出现皮 疹时共用衣物、被褥、餐具等的人；长时间共用同一封闭工作空 间/办公室的人；照顾有症状的猴痘病例的护理人员；与病例或病 例的体液或气溶胶接触时没有采取适当个人防护的医护人员。（2）接触2过有病症（如：结膜炎、呼吸系统症候、和/或皮 疹）的进口哺乳动物类宠物3的人。（3）接触过进口的有或没有临床病症的哺乳动物类宠物的 人，但该哺乳动物类宠物曾接触过有猴痘临床症状的人或哺乳动 物类宠物二1皮肤接触或长时间面对面近距离接触。2拥有宠物，曾抚摩、照顾过宠物，去过宠物店、兽医诊所或宠物批发处。3进口哺乳动物类宠物包括土拨鼠（草原犬鼠）、冈比亚袋鼠、松鼠等。接触过其他进口 或非进口的哺乳动物类宠物按照病例具体情况定。判定依据应包括接触过感染猴痘或 有猴痘临床病症的哺乳动物。，哺乳动物类宠物之间的接触包括与患猴痘动物共用饲养设施，或该设施内曾饲养过患 猴痘动物。20（4）职业事故中（飞溅、锐器或气溶胶暴露等）暴露于含 病毒样品的实验室工作人员。2.飞机、公共汽车、火车和轮船等交通工具病例相邻座位的乘客，或在同一交通工具内有过皮肤接触或 长时间面对面近距离接触的乘客和工作人员。（二）一般接触者1.日常生活、学习、工作中，除了密切接触者之外，其他与 确诊或疑似病例有过短时间间接接触的人员，如不共用同一办公 室的同事、不共用同一教室的师生等一般社会接触者。2.飞机、火车、公共汽车、轮船等交通工具中，座位在病例 的前后三排且不是密切接触者的乘客。3.为病例提供诊疗服务且正确使用个人防护设备的医务人 员。二、处理原则（一）密切接触者处理原则1.交通工具中的密切接触者和日常生活、学习、工作中曾接 触猴痘病人或疑似病人或可疑动物的密切接触者，需进行医学观 察。具体观察地点可以根据具体情况安排在统一地点隔离观察。如果密切接触者曾有过二次痘苗接种史，可按一般接触者处理。2.医学观察期限为21天（自最后接触之日算起），医学观察 期间应采取如下措施：（1）由当地卫生健康行政部门指定的医疗卫生人员每日对 21病人的健康状况进行视察并给予健康教育和指导。（2）密切接触者应每天观察的症状包括发热（力37.4。0、浅表淋巴结肿大皮疹等，每天测体温两次。（3）密切接触者一旦出现上述相关症状，应由当地卫生行 政部门安排指定的交通工具运送到指定的医疗机构进行诊断。（二）一般接触者的处理原则一般接触者原则上可正常工作、学习和生活。1.对交通工具中的一般接触者，疾控工作人员应登记有关信 息，并通报旅行者目的地疾病预防控制机构。同时应向一般接触 者讲明情况，告知其回到家中或住地后，应及时与当地疾病预防 控制机构联系。2.一般接触者需在接触后的21天内实行自我健康监测。观 察期间内，尽量减少与他人接触，每天早晚各测量1次体温，一 旦出现以下症状，包括发热（237.4。0、浅表淋巴结肿大和皮疹 等，应及时与当地疾病预防控制机构联系。22附件3猴痘病毒实验室检测技术指南为指导各级疾控部门和其他相关机构开展猴痘病毒实验室 检测工作，特制定本技术指南。本指南主要介绍目前已经比较成 熟、易于实施的核酸检测方法。一、检测对象（一）猴痘确诊和疑似病例；（二）密切接触者；（三）感染或疑似感染猴痘病毒的动物；（四）环境或其它生物材料。二、技术人员基本要求（一）采样人员。从事猴痘病毒核酸检测标本采集的技术人 员应当经过生物安全培训（培训合格），熟悉标本种类和采集方 法，熟练掌握标本采集操作流程及注意事项，做好标本信息记录,确保标本质量符合要求、标本及相关信息可追溯。（二）检测人员。实验室检测技术人员应当具备相关专业大 专以上学历或具有中级及以上专业技术职务任职资格，并有2年 以上实验室工作经历和基因检验相关培训合格证书。实验室配备 的工作人员应当与所开展检测项目及标本量相适宜，以保证及时、熟练地进行实验和报告结果，保证结果的准确性。三、标本采集、保存和运输-23（一）标本采集要求1.从事猴痘病毒标本采集的技术人员应经过生物安全培训（培训合格）并具备相应的实验技能。采样人员个人防护装备要 求：N95或以上防护口罩、护目镜或面罩、连体防护服、双层乳 胶手套、防水靴套；如果接触了患者血液、体液、分泌物或排泄 物，应及时更换外层乳胶手套。2.住院病例的标本由所在医院医护人员在当地疾控机构专业 人员指导下采集。3.密切接触者标本由当地疾控机构负责采集。4.感染或疑似感染猴痘病毒的动物由兽医部门专业采样人员 负责采集。5.环境或其它生物材料根据检测需要由专业采样人员负责采 集。6.根据实验室检测工作的需要，可结合病程多次采样。（二）标本采集种类用于实验室确认猴痘的推荐标本类型是皮肤病变标本，包括 病变皮疹、痘疱表面和/或渗出物的拭子、痘疱液、痘疱表皮或痘 痂。同时，需采集病例急性期呼吸道标本（咽拭子）和急性期血 液标本，可根据临床表现与采样时间间隔进行采集；血液标本尽 量采集发病后7天内的急性期EDTA抗凝血。采集量5ml,以空腹血为 佳，建议使用含有EDTA抗凝剂的真空采血管。24其他研究材料如直肠和/或生殖器拭子、尿液、精液根据需要 采集。（三）标本采集方法L皮肤病变标本：视病变情况进行相应病变标本采集，需后 期进行病毒分离的样本，收集管不含样本保存液。（1）病变皮疹、痘疱表面和/或渗出物的拭子:使用无菌聚酯 或涤纶拭子用力涂抹病变部位，以确保收集足够的病毒DNA,将拭 子放置无菌收集管中。（2）痘疱液：用酒精棉球对皮损处进行消毒，并自然干燥。用无菌针头和注射器吸取液体,放置于L 5至2毫升的无菌带0型橡 胶圈的螺旋盖塑料管。（3）皮疹或痘疱表皮、皮疹内液体拭子采集：用酒精棉球 对皮损处进行消毒，并自然干燥。用一次性手术刀（或无菌26 号针头）打开并移除小泡或脓疱的顶部皮肤，将小泡顶部皮肤放 置于1.5至2毫升的无菌带0型橡胶圈的螺旋盖塑料管中。用无 菌聚酯或涤纶拭子擦拭皮损底部，将拭子放置于无菌收集管中。（4）痘痂或硬皮：用酒精棉球对皮损处进行消毒，并自然 干燥。用无菌26号针头或剪刀取至少4块痂皮，每块痂皮要来自 不同的身体部位。将痂皮放置于1.5至2毫升的无菌带0型橡胶 圈的螺旋盖塑料管中。注意：可以将两个相同类型的病变标本收集在一个管中，最 好是从身体的不同部位收集的，且外观不同。不同类型病变（如 25痘疱液和痘痂）不能放在同一管中。尽量每种类型标本收集两份,检测时先对其中一份进行检测，仅在第一份结果不确定时再对第 二份进行检测。2.咽拭子：用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧 咽扁桃体及咽后壁，将拭子放入无菌采样液管中，尾部弃去，旋 紧管盖。3.血液标本：尽量采集急性期、恢复期双份血清。第一份血 清应尽早（最好在发病后7天内）采集，第二份血清应在发病后第 34周采集。采集量5nli，以空腹血为佳，建议使用含有EDTA抗凝 剂的真空采血管采集血液标本5ml后，室温静置30分钟，1500 2000rpm离心10分钟,分别收集血浆和血液中细胞于无菌螺口塑料 管中。4.血清标本：用真空负压采血管采集血液标本5ml,室温静 置30分钟，15002000rpm离心10分钟，收集血清于无菌螺口塑料 管中。5.其他材料：依据设计需求规范采集。（四）标本保存标本应在收集后一小时内冷藏（2至89）或冷冻（-2（TC或更 低），并尽快进行检测。能在一周以内检测的标本可置于4七保存;无法检测的标本，短期可在-20匕中保存，长期应置于-7CTC以下 保存（收集后60天）。全血分离血浆前冷藏（2至8七），然后-2CTC 或以下保存。应设立专库或专柜单独保存标本。标本应避免反复26冻融。(五)标本送检标本采集后应尽快送往实验室，如果需要长途运输标本，建 议采用冷冻运输方式进行保藏。L上送标本：病例标本先由省级及以下疾控机构进行初步检 测，猴痘阳性标本送中国疾控中心病毒病所复核。省级疾控机构 不具备猴痘病毒检测条件的，应立即送中国疾控中心病毒病所进 行检测，样本送检单见附表。2.病原体及标本运输(1)国内运输。猴痘毒株或其他潜在感染性生物材料的运输 包装分类属于A类，对应的联合国编号为UN2814,包装符合国际民 航组织文件Doc9284危险品航空安全运输技术细则的PI602分 类包装要求，通过其他交通工具运输的可参照以上标准包装。猴 痘毒株或其他潜在感染性材料运输应按照可感染人类的高致病 性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理规定(原卫生部令第 45号)办理准运证书。(2)国际运输。猴痘毒株或样本在国际间运输的，应规范包 装，按照出入境特殊物品卫生检疫管理规定办理相关手续，并满足相关国家和国际相关要求。四、实验室管理基本要求(-)实验室资质要求开展猴痘病毒核酸检测的实验室，应当符合病原微生物实 27验室生物安全管理条例（国务院令第424号）和医疗机构临 床基因扩增检验实验室管理办法（卫办医政发（2010）194号）有关规定，具备国家卫生健康委备案的生物安全三级（BSL-3）实 验室及以上实验室条件，并获得从事猴痘病毒实验活动的批准，具备临床基因扩增检验实验室条件。独立设置的医学检验实验室 还应当符合医学检验实验室基本标准（试行）医学检验实 验室管理规范（试行）等要求。（二）实验室生物安全要求根据人间传染的病原微生物名录中的有关规定，猴痘病 毒生物危害分类为第一类，是一种高致病性病毒。涉及活病毒的 样本灭活操作需在BSL-3及以上实验室的生物安全柜内进行。灭 活样本中的病毒DNA提取可在生物安全二级（BSL-2）实验室或PCR 检测的专门区域或房间进行，严格按照分区操作原则操作。（三）实验室分区要求原则上开展猴痘病毒核酸检测的实验室应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增和产物分析区。三个区域 在物理空间上应完全相互独立，不能有直接空气流通。各区功能 分别是：1.试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增 反应混合液的制备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。2.标本制备区：转运桶开启、标本灭活，核酸提取及加入至 扩增反应管等。283.扩增和产物分析区：核酸扩增和产物分析。根据使用仪器的功能，区域可适当合并。如采用标本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，标本制备区、扩增 和产物分析区可合并。(四)主要仪器设备实验室应当配备与开展检验项目相适宜的仪器设备，包括：二级生物安全柜、高速台式离心机、干浴恒温器、荧光定量PCR 仪、计时器、组织匀浆仪、移液器(100 PL,200 u L,1000 uL)。五、实验室猴痘病毒核酸检测实验室接到标本后，应当在BSL-3及以上实验室的生物安全 柜内对标本进行清点核对，并对标本进行灭活处理。按照标准操 作程序进行试剂准备、标本前处理、核酸提取、核酸扩增、结果 分析及报告。实验室应当建立可疑标本和阳性标本复检流程。(一)试剂与材料1.标本：包括痘疱液、病变皮疹、痘痂、全血或血清、咽拭 子、皮疹和痘疱表面或渗出液拭子和其它可疑标本。2.核酸提取试剂盒(基因组DNA提取试剂盒)：组织基因组 DNA提取试,剂盒或血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒。3.核酸检测试剂：(1)试剂：DNA聚合酶或预混的PCR反应试剂(PCR Master Mix)o(2)猴痘病毒检测引物、探针：29名称浓度序列(5,-一3,)与荧光标记Primer-FF3L-FIOpM5-CTCATTGATTTTTCGCGGGATA-3Primer-RF3L-RIOpM5-GACGATACTCCTCCTCGTTGGT-3ProbeF3L-PIOuM5 FAM-CATCAGAATCTGTAGGCCGT-MGB 3(3)阳性对照：涵盖检测部位序列的质粒。4.灭菌去离子水、无水乙醇5.消毒液(1)75%医用酒精：用于手部和物体表面常规消毒，整瓶开 启有效期1周。(2)含氯消毒液：每次现用现配，含有效氯1000mg/L的消 毒液用于手部和物体表面常规消毒，含有效氯5000mg/L的消毒液 用于感染性材料溢洒时的应急处理。6.耗材：包括带滤芯的吸头、螺旋口的离心管、非螺旋口的 离心管、含错珠的粉碎管、PCR反应板和透明封膜或PCR反应管 和透明盖。7.BSL-3个人防护用品：包括医用防护口罩、医用连体防护 服、防护眼罩、一次性帽子、鞋套、靴套和手套。8.BSL-2或PCR室个人防护用品：包括反穿衣、一次性手套、口罩、帽子、鞋套(或工作鞋)。(二)实验前的样品接收1.核对被检样本编号、姓名、性别、年龄及检测项目；2.待检样本的状态如有异常，需注明；3.待检样本长期存放在-70C,短期存放可在-2CTC,避免反30复冻融。(三)核酸检测操作步骤及注意事项1.病毒核酸(DNA)的制备需注意：未灭活样本必须在BSL-3及以上实验室的生物安全 柜内进行，至病毒灭活后方可从实验室中取出进行下一步操作。操作方法按DNA提取试剂盒相应说明书进行操作，具体如下：(1)提取试剂准备：第一次开启试剂盒，在使用前请先在 漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上标签。所有试剂在 使用前应平衡至室温；所有离心步骤应在室温下进行。(2)处理样本：A.痘疱液：将痘疱液用适当体积的含PS的PBS或DMEM重 悬，取100PL样本，加入80 PL缓冲液，总量为180uL；样本不 足100 uL时用缓冲液补足至总量180uL；B.病变皮疹或痘痂：取1块痂皮按质量/体积(lmg：5uL)加入相应体积含PS的PBS,研磨或匀浆处理，取80pL,然后加 入lOOuL缓冲液；C.咽拭子、其它拭子：若拭子在样本保存液中可直接取 200 HL样本，若为干拭子可用3nli含PS的PBS或DMEM重悬，然 后取200 HL样本；D.全血或血清：直接取200 uL样本。(3)加入20 uL蛋白酶K溶液，混匀，溶液会变清亮。若 样本为病变皮疹或其它组织时，加入蛋白酶K混匀后，在56七放 31置，直至组织溶解，再进行下一步骤。(4)加200 口 L裂解缓冲液,充分混匀，701放置10 min,或至溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁水珠。需注意：加入裂解缓冲液后可能会出现白色絮状沉淀，在 7(rc放置后会消失。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可 能导致提取DNA量少或提取出的DNA不纯。(5)加200 uL无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮 状沉淀，简短离心以去除管盖内壁水珠。通过以上操作，病毒灭活。若需要从BSL-3及以上实验室取 出继续其它操作,可将样本管表面用含有效氯1000mg/L的消毒液 擦拭，从生物安全柜中取出，放入样本盒中。对样本管表面及样 本盒(内外)完全消毒后带出BSL-3实验室。(6)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中(吸附 柱放入废液收集管中)，8000 rpm/min离心Imin,弃掉废液。(7)加入500 uL漂洗缓冲液1(使用前请先检查是否已 加入无水乙醇)，8000 rpm/min离心lmin,弃掉废液。(8)加入500 UL漂洗缓冲液2(使用前请先检查是否已 加入无水乙醇)，最大转速13000rpm/min离心3nlin,弃掉废液。(9)将吸附柱放回废液收集管中，最大转速13000rpm/min 离心lmin,尽量去除漂洗液。(10)将吸附柱转入一个干净的离心管中(需自己准备，试 剂盒中未提供)，加入50 uL洗脱缓冲液或灭菌去离子水，室温放32置2-5 nlin,8000rpm/niin离心lmino收集滤出液，做好标记,4 或-20七(短期)保存备用，-70T长期保存。2.核酸检测：实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测猴痘病毒 核酸(PCR实验室进行)。(1)反应体系的准备：每孔20uL,加入5uL样本DNA,共计25uL；每次PCR反应，除了检测样本外，应加无DNA对照(用水代替DNA)、阳性对照；所有样本.，包括对照，应设复孔。试剂体积(uL)终浓度水(灭菌去离子水)62x Mix master12.5lx正向/反向引物(5 uM)10.2uM探针(1011M)0.50.2uMDNA5合计25(2)加样：每反应管中加入核酸或对照各5uL,盖紧管盖或封好透明膜,置于荧光定量PCR检测仪上。(3)扩增条件设定：循环类型温度(七)时间(分:秒)循环数热启动*502:001预变性9510：001扩增性火 变退950:3040延伸601：00备注：*若用的试剂不是.ABI的试剂可省略出步骤。(4)仪器检测通道选择:使用荧光定量PCR检测仪，选择Fam 荧光信号检测通道，收集设在60C。具体设置方法请参照各仪器