细菌性疫苗讲义.ppt

*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,细菌性疫苗,2008.3,細菌性疫苗种类,1.,死疫苗,2.,活疫苗,3.,蛋白类疫苗,4.,多糖类疫苗,5.,多糖蛋白结合疫苗,细菌性疫苗种类,2,3,白喉,破伤风,百日咳乙型肝炎疫苗,4,5,1,霍乱,伤寒,副伤寒,百日咳,疫苗,卡介苗,鼠疫,布氏杆菌,伤寒,痢疾,霍乱,疫苗,脑膜炎,伤寒,vi,肺炎疫,流感嗜,血杆菌,多糖疫苗,AC,脑膜炎球菌多糖结合疫苗,HIB,脑膜炎,伤寒,vi,肺炎疫,流感嗜,血杆菌,多糖疫苗,白喉疫苗,伤寒疫苗,结合疫苗,白喉疫苗,一、概述,二、病原学,三、,白喉杆菌的致病力及毒素产生的遗传学,四、白喉毒素,五、白喉类毒素,六、生产工艺,七、类毒素的质量检定,概述,外毒素,对神经,系统损,害,细菌产生,的外毒素,对心肌损,害,外毒素,对肾脏,损害,白喉曾经是对儿童威胁非常大的传染病。,它是由白喉棒状杆菌引起的一种呼吸道传染病,主要临床表现为上呼吸道发炎，,常常表现在咽部，有时在鼻腔、喉部和气管，,三、白喉杆菌的致病力及毒素产生遗传学,自然界中动物不感染白喉，只能在敏感动物中造成人工感染。猴、马、家兔和豚鼠对白喉敏感，小白鼠对白喉不敏感，实验室常用的动物是家兔和豚鼠。,白喉是由白喉杆菌产生毒性很强的外毒素引起的，白喉杆菌的产毒基因是由,嗜菌体携带，,嗜菌体感染无毒白喉杆菌后，嗜菌体,DNA,与细菌,DNA,整合，形成溶原性白喉杆菌而获得产毒能力（,PW8,株目前用于白喉类毒素生产,),。,四、白喉毒素,白喉毒素对人和动物都引起致死性毒性，如心脏、肾上腺、肝、肾、胰及神经组织等均受到损害。,白喉毒素是单一多肽，由,560,个氨基酸组成，分子量为,62kDa,等电点,pH4.1,，在,pH6,时加热,55,很快失活。,通过物理和化学方法将其纯化。,五、白喉类毒素,细,菌,毒,素,甲醛,类毒素,类毒素经是,甲醛处理后去除毒性,而保留免疫原性,影响脱毒因素,甲醛,浓度,温度,PH,脱毒,温度、,pH,和甲醛浓度等均影响脱毒效果,温度越高脱毒越快，超过,40,影响抗原性，一般,37,38,。,在酸性时脱毒较慢，但游离甲醛含量高，可导致脱毒过甚；在碱性时脱毒快，但,抗原性损失较大，一般采用弱碱性。,甲醛浓度大则脱毒快，但抗原损失大。,类毒素的毒性逆转,温度升高加快毒性逆转，游离甲醛的浓度越低越易发生毒性逆转，毒素纯度高易发生毒性逆转。,提高脱毒,pH,，提高甲醛浓度，提高脱毒温度和延长脱毒时间均可减轻毒性逆转；精制类毒素中非蛋白氮含量高者逆转程度小，于精制毒素中加入赖氨酸、精氨酸等可明显防止或减轻毒性逆转。,六、白喉疫苗工艺流程示意图,菌种（,PW8,株）,传代扩增,3,4,代,发酵罐培养,34,35,培养,40,48h,对数生长,末期收获，甲苯杀菌。,离心去菌体 收集清液,超滤浓缩,3,万分子量超滤浓缩,硫酸铵盐析 两段盐析,除盐除菌 氨离子及无菌检查,脱毒,0.5,甲醛液,37 40,50,天,脱毒试验（家兔）,原液 检定（浓度、纯度、安全等）,Al(OH),3,吸附,成品,检定（安全、效价等）,七、类毒素的质量检定,絮状单位（,Lf,）,是毒素或类毒素与抗毒素的结合单位，只能代表“量”而不能完全代表活性。使用抗毒素絮状单位标准品来测定类毒素的絮状单位。,絮状单位测定,毒素或类毒素与相应抗毒素在适当的含量、比例、温度反应时间等条件下可在试管中发生抗原抗体结合，产生肉眼可见的絮状凝集反应，,根据抗毒素絮状单位标准品可测定类毒素的絮状单位（,Lf,）值。,七、类毒素的质量检定,纯度：,1500Lf/mgPN,安全性试验（豚鼠）,效价测定（,即类毒素刺激机体产生特异性抗体的免疫应答和对相应抗体的特异性结合反应）。,将标准和待检类毒素不同倍数稀释，免疫小鼠或豚鼠后用毒素攻击，对动物的保护率,80,；或用,vero,细胞检测血清中的抗体滴度。,伤寒疫苗,一、概述,二、伤寒疫发展简史,三、伤寒,Vi,疫苗,一、概述,伤寒病的定义,临床症状,病原学,血清学诊断,伤寒病的定义,伤寒病是一种急性全身性感染，感染网状内皮细胞系统，肠道淋巴组织及胆囊，病原是伤寒沙门氏菌。,典型的临床症状,1,潜伏期为,721天,病期为一,个月，恢,复缓慢。,3,表情迟钝,脉搏相对,缓慢，肝,脾肿大和,白细胞减,少。,2,长期发热、,持续高烧,达1014,天、腹部,不适、头,痛等。,2,长期发热、,持续高烧,达1014,天、腹部,不适、头,痛等。,病 原 学,伤寒沙门氏菌是革兰氏阴性杆菌，需氧，有鞭毛，能运动。,在普通培养基上以易生长，适宜的,pH,为,7.0,7.2,。,伤寒沙门氏菌的抗原构造有,O.H.,及,Vi,抗原。,抗原结构,1,鞭毛（,H）,抗原：为蛋白质，煮沸破坏，不受,（,1,）甲醛影响。,2,菌体（,O）,抗原：细胞壁部份，耐热，为脂多,糖（,LPS,）由多糖（重复寡,糖和核心寡糖）和类脂,A,组,成。,3,莢膜（,Vi）,抗原:即荚膜多糖（,CPS）,是伤寒,杆菌细胞外壁的一种荚膜抗,原,Vi,抗原与其致病性有关,Vi,来源于毒力的缩写。,血清学诊断,肥达氏试验（,widal test）:,两种选择抗原的方法：,1,用伤寒0901株（没有,H,和,Vi,抗原）测定,O,抗体；用伤寒,S,株（没有,O,菌体抗原）测定,H,抗体。,2,用甲醛处理伤寒沙门氏菌破坏,O,抗原（耐热）测定,H,抗体；用加热杀菌破坏,H,抗原（不耐热）测定,O,抗体。,二、伤寒疫苗的发展简史,1,2,3,4,全菌,体灭,活疫,苗,口服,Ty21a,减毒,活疫,苗,伤寒,Vi,多,糖疫,苗,伤寒,结合,疫苗,全菌体灭活疫苗,1,甲醛杀菌石碳酸防腐疫苗,2.,加热杀菌石碳酸防腐疫苗,3.,丙酮杀菌疫苗,甲醛杀菌石碳酸防腐疫苗,50年代初期学自前苏联，为伤寒、副伤寒甲乙三联疫苗。用甲醛杀菌，0.5石炭酸生理盐水制成。每毫升含伤寒沙门氏菌体原为亿，后改为亿；副伤寒甲乙由每毫升各亿改为各,.5,亿，细菌总量原三联疫苗为20亿，现为10亿。,加热杀菌石碳酸防腐疫苗,此法历史最久，1896年首创的伤寒疫苗即为此法制成，只用56水浴30,in,杀菌加石碳,酸防腐制成。,美国仍用此法,制作标准品。,丙酮杀菌疫苗,1921,年创制，认为对稳定,Vi,抗原有益，系将一份菌液加三份丙酮处理，然后,抽气干燥制成。1943年首次在意大利,使用，经世界卫生组织做现场考核，,认为效果最好。,伤寒、副伤寒甲乙三联疫苗接种反应,实践证明，菌体疫苗预防伤寒效果肯定的，但接种后的严重反应一直困扰着人们。,观察组,观察人数,中强反应,百分率,(%),第一组,1408,85,6.05,第二组,1313,151,11.50,合计,2721,236,8.75,口服,Ty21a,疫苗,70年代末期研究成功的口服伤寒疫苗,Ty21a,活疫苗，是以,Ty21,伤寒毒株作为出发株，用亚硝基胍诱变所得的突变株。,口服,Ty21a,疫苗的特点,1,此突变株没有半乳糖异构酶,半乳糖激酶和半乳糖转移酶的活性降低约,80,，且没有,Vi,抗原。所以其毒力减低，但此突变株有完整的,O,抗原,LPS，,并具有免疫原性，能诱导较好的免疫保护性反应。,2,经过多年观察证明有效，反应也较轻。一些国家批准应用。,口服,Ty21a,疫苗的特点,3 Ty21a,菌株营养要求苛刻，生长缓慢，产量很低，不易批量生产。,4,目前无可靠的检定指标。,5,基因背景不够清楚，因为它是用强诱变剂处理而得，作为活疫苗这是它的最大的弱点。,口服,Ty21a,减毒活疫苗的免疫效果,地区,疫苗制剂,效果,效果比较,埃及,液体,NaHco,3,96%,智利,肠溶衣胶囊明胶囊,66,ECC,19,明胶,ECC,明胶,智利,液体胶囊,35%,ECC,76%,液体,液体,ECC,印尼,液体胶囊,42%,ECC,53%,液体,液体,ECC,三、伤寒,Vi,多糖疫苗,伤寒,Vi,多糖疫苗的概述,伤寒,Vi,多糖疫苗的免疫效果,伤寒,Vi,多糖疫苗不良反应观察结果,伤寒,Vi,多糖疫苗的制造工艺,伤寒,Vi,多糖疫苗的特点,伤寒,Vi,多糖疫苗概述,由于,Vi,抗原是一种表面抗原，是由,C3,位乙酰化的,N-,乙酰,-D-,半乳糖醛酸（,1,4,）连接的同聚体。,在美国,NIH,的,Robbins,等重新认识伤寒,Vi,抗原的免疫原性后，并受流脑多糖疫苗的启发，用与之类似的方法提取,Vi,抗原，以不伤害其抗原结构，保持它的免疫原性，制备了伤寒,Vi,多糖疫苗。,伤寒,Vi,多糖疫苗概述,早期提取,Vi,抗原时为了降低,LPS,的含量，采取,1mol/L,乙酸,100,处理,24h,，使,O-,乙酰基和,N-,乙酰基脱落造成,Vi,抗原结构变化，导致其免疫原性发生变化。,新方法是用十六烷基三甲基溴化铵处理伤寒沙门氏菌，所得,Vi,抗原可以保留,O-,乙酰基和,N-,乙酰基，使其不变性。,伤寒,Vi,多糖疫苗的免疫效果,观察,地区,疫苗,人数,观察,时间（月）,保护率（）,尼泊尔,伤寒,Vi,3457,（,5,44,岁）,17,72,南非,伤寒,Vi,5692,（,5,16,岁）,21,64,伤寒,Vi,多糖疫苗不良反应观察结果,疫苗,局部反应,发热率,(%),疼痛,红肿,硬结,流脑,A+C,多糖,（,50g/,人）,N=129,89,（,69,）,23,（,18,）,21,（,16,）,2,（,2,）,伤寒,Vi,（,25g/,人）,N=127,78,（,61,）,10,（,8,）,2,（,2,）,1,（,1,）,伤寒,Vi,（,50g/,人）,N=126,86,（,68,）,9,（,7,),9,（,7,）,0,（,Ty2,株）,细菌培养 生物反应液体培养（,8,10h,）,对数生长期末收获,甲醛液灭活,离心去菌体，收上清液,浓缩多糖 上清加,10%,十六烷基三甲基溴化铵,离心收集沉淀，加氯化钙溶液振荡解离,除去核酸 加,95%,乙醇至,25%,浓度收集上清,上清中加,95%,乙醇至,80%,浓度,沉淀粗制多糖，抽干,除去蛋白 加,1,：,10,饱和中性醋酸钠溶液溶解多糖,按,1,：2加冷酚提取,3,次，离心收集上清液,并透析,去内毒素 梯度离心 透析液加,95%,乙醇至,80%,沉淀用无水乙醇和丙酮各洗,3,次,原液 注射用水溶解多糖并除菌,注射用水稀释分装,成品,伤寒,Vi,荚膜多糖疫苗工艺流程示意图,伤寒,Vi,多糖疫苗检定项目及检定指标,检定项目,检定指标,固总测定,蛋白含量,10mg/g,核酸含量,20mg/g,O,乙酰基含量,2mmol/g,Kd,值,0.25,Kd,值,0.25,回收率,50%,热原检查,0.025g/kg,伤寒,Vi,多糖疫苗的特点,安全有效，没有菌体疫苗那么多的副反应，但却有其大致相同的免疫效果。,稳定性好，即可以为液体制剂，也可以为冻干制品，耐热，易于运输与保存。,使用方便，注射一针，即可以有一定的保护力，易于用理化方法标准化。,同其他多糖疫苗一样对婴幼儿免疫效果差。,结合疫苗,一、结合疫苗的定义,二、免疫机理,三、用于制备结合疫苗的多糖抗原,四、用于制备结合疫苗的蛋白载体,五、结合化学制备结合疫苗的主要要素,六、结合疫苗应具备的两个共同特征,七、结合疫苗的使用和发展现状,八、结合疫苗的研究方向,九、存在问题,一、结合疫苗的定义,抗原物质（多糖和蛋白质）经化学共价结合形成了具有一定空间构象的结合物。,抗原物质还包括多肽、甾族激素、脂肪胺、核苷等小分子物质。,结合疫苗的特点,它能使多糖抗原的,T,细胞非依赖性转化为,T,细胞依赖性,产生具有记忆特征的,IgG,抗体,提高多糖疫苗的免疫原性和免疫持久性。,能够在婴儿产生免疫应答。,二、,免疫机理,胸腺依赖性抗原（,TD-Ag,）,胸腺非依赖性抗原（,TI-Ag,）,二、,免疫机理,胸腺依赖性抗原（,TD-Ag,）,胸腺非依赖性抗原（,TI-Ag,）,胸腺依赖性抗原（,TD-Ag,）,绝大多数天然抗原（蛋白质）都是,TD-Ag;,此类抗原含有,T,细胞和,B,细胞决定簇，虽然能与,B,细胞受体结合，但单独不足以激活,B,细胞，需,T,细胞辅助才能激活,B,细胞产生抗体；,TD-Ag,分子量大，结构复杂，表面决定簇种类多，但决定每种决定簇的数量不多且不均匀,(,就每种表位而言它是单价的,),；,诱导体液免疫应答，同时诱导细胞免疫应答和免疫记忆。,B,细胞对（,TD-Ag,）应答特点,TD-Ag,需,TH,细胞辅助；,浆细胞在产生抗体中发生,Ig,类型转换，主要产生,IgG,类抗体；,形成记忆,B,细胞，当受到相同抗原再次刺激时引起再次应答，而且抗体亲和力较初次应答明显提高。,B,细胞对（,TD-Ag,）应答特点,TD-Ag,IgG,IgM,TH,细胞,细胞因子,B,2,B,m,停止分化,胸腺非依赖性抗原（,TI-Ag,）,细菌脂多糖、荚膜多糖等；,TI-Ag,分子结构呈长链，带有多个重复的同一抗原决定簇，对每种表位来将可视为多价的，能与,B,细胞表面受体结合形成交联；,此类抗原只有,B,细胞决定簇，不需,T,细胞辅助可直接激活,B,细胞产生抗体；,TI-Ag,一般只产生体液免疫应答，产生的抗体仅为,IgM,不诱导细胞免疫应答，也不引起免疫记忆。,B,细胞对（,TI-Ag,）应答特点,TI-Ag,直接激活,B,细胞；,浆细胞只产生抗体中发生,IgM,型抗体、且抗体效价低、无,Ig,类型转换；,无免疫记忆效应，即使再次采用相同抗原刺激也不能引起初次免疫应答，更无抗体亲和力成熟过程。,与,TI,Ag,发生应答的是,B1,细胞，其细胞表面的抗原识别受体为,IgM,单体，故应答中仅产生,IgM,抗体，无记忆,B,细胞（,Bm,）形成，不产生加强应答，因而免疫原性弱。,B,细胞对（,TI-Ag,）应答特点,B,细胞对（,TI-Ag,）应答特点,TI,Ag,B,1,IgM,无记忆,B,细胞（,Bm,）形成，不产生加强应答，因而免疫原性弱。,多糖,蛋白质结合物（,TD-Ag,）,将多糖分子与蛋白质共价结合，由于蛋白质抗原激活,TH,细胞，能诱导,TH,细胞产生细胞因子（如,r-IFN,IL-2,、,4,、,5,）并传递给,B2,细胞，使之参与免疫应答。,蛋白质抗原产生抗体是通过,TH,细胞产生的淋巴因子激活,B,细胞完成的。,TD-Ag,应答存在着,TH-B2,细胞间的协作作用,TD-Ag,应答存在着,TH-B2,细胞间的协作作用,抗体生成的辅,助细胞专一地,识别载体决定簇,TH,细胞,B2,细胞,是产生抗体的效应细胞,专一地识别多糖（半抗原）,表面抗原识别受体为,IgG,和,IgM,产生,IgG,和,IgM,。,分化增殖过程中有少量,B,细胞 停止分化变成记忆,Bm,细胞,出现加强应答免疫原性大大提高,细胞因子,TD-Ag,多糖,蛋白质结合物（,TD-Ag,）,同单一多糖疫苗相比，多糖蛋白质结合疫苗具有许多免疫优势，有,TH,细胞参与，刺激机体产生的抗体主要有,IgG,和少量,IgM,，能产生细胞免疫和加强免疫应答，免疫原性强，免疫接种范围广，对所有年龄组人群均能提供免疫保护。,三、,用于制备结合疫苗的多糖抗原,一类是细菌的荚膜,多糖（,CPS,）,A/C,群脑膜炎球菌,肺炎链球菌,b,型流感嗜血杆菌（,Hib,）和伤寒杆菌,结合疫苗,在动物和人体中均证实了其安全性和增强的免疫原性。,三、,用于制备结合疫苗的多糖抗原,另一类为菌体多糖,（,OPS,）,脂多糖（,LPS,）中,的,O,特异性多糖（,O-PS,）,脂寡糖（,LOS,）,中的寡糖（,OS,）,结合疫苗,纯化的,O-PS,和,OS,没有免疫原性，与蛋白载体制备结合疫苗后可获得免疫原性。抗,O-PS,的,IgG,具有,型特异性保护，抗,OS,抗体具有杀菌活性及免疫保护作用。,四、,用于制备结合疫苗的蛋白载体,细菌的分泌性毒素（去除毒性,）,破伤风类毒素（,TT,）,白喉类毒素（,DT,）及无毒,CRM197,百日咳毒素（,PT,）及无毒,CRM3201,霍乱肠毒素（,CT,）及其,B,亚单（,CTB,）,无毒的重组绿脓杆菌外毒素（,rEPA,）,大肠杆菌热敏感肠毒素（,HLT,）,细菌菌毛,绿脓杆菌菌毛（,PAP,）,淋球菌,P-3-2,菌毛,四、用于制备结合疫苗的蛋白载体,细菌外膜蛋白,B,群脑膜炎球菌外膜蛋白（,OMP,）,病原蛋白质,如乙肝表面抗原（,H,sAg,）,B,群脑膜炎球菌外膜蛋白（,OMP,）,伤寒杆菌鞭毛和肺炎球菌溶血素（,PLY,）也是很有潜力的结合蛋白,人工合成的多肽聚合物，常用的是多聚赖氨酸,。,五、结合化学制备结合疫苗的要素,多糖抗原的选择,，依据细菌的保护性抗原是荚膜多糖（,CPS,）还是菌体多糖（,OPS,）决定。,多糖分子大小,，选择天然多糖还是经降解后的寡多糖。,五、结合化学制备结合疫苗的要素,载体蛋白的选择,多糖和蛋白质活性功能基团,（天然的或修饰的）,结合模式,偶联反应可利用的化学功能团,蛋白质,多糖,一类功能团,（多糖或蛋白质原有,功能团）,羧基、氨基、巯基,和芳香基,羧基、羟基、氨基、醛基,衍生功能团,（经化学反应可引入,功能团）,氨基、巯基,马来,亚胺基、卤代,乙基、酰肼,羧基、氨基醛基,巯基、马来亚胺基、,卤代乙酰基、酰肼,结合模式,两种抗原的直接结合,一般限于羧基和具有一级氨基醛基之间的缩合反应，其产物需要进一步还原才能稳定。,按照结合方法可分为两种结合模式,结合模式,两种抗原通过化学双功能连接剂的结合,在多糖和载体蛋白之间使用一个间隔物，不但可增加结合物的收率，而且可大大增强其免疫原性。现有的连接剂按其性质可分为以下两种：,结合模式,异种双功能连接剂,如,SPDP,（,-,琥珀酰胺,-3-,二硫代呲啶丙酸）,同种双功能连接剂,如,A,H,（已二酰肼）、,EDAC(,碳二亚胺,),、戊二醛。,不同的连接剂所带的活性功能团不同,因而要求抗原中相应不同的活性功能团与之反应。,结合模式,按照多糖蛋白质偶联物的分子构象又可分为两种连接模式：,一种是末端连接模式,一个载体蛋白上可连接一定数量的糖链，每一条糖链上只有一个末端位点与蛋白质结合，糖链与蛋白质载体可以直接连接，也可以通过小分子桥连接。,结合模式,另一种是交叉连接模式,该模式的每一个载体蛋白或每一个糖链上都可以有多个相互连接位点，结合物形成网状交连体。随着糖链长度的延长，连接点的增加，交连体的分子质量会相应增大，其三维空间结构更为复杂。,A,B,C,结合疫苗制备常用的四种化学结合方案,方案,多糖的活性功能基团,连接剂选用,实例,-COOH,SPDP,（二硫化物交换）,伤寒,Vi,结合疫苗,-COOH,ADH,（酰胺化反应）,疫疾,CSP,结合疫苗,-CHO OH,直接结合,（氨基还原反应）,付伤寒甲,PS,结合疫苗,苯环上,OH,-OH,CNBr,激活,ADH,（酰胺化反应）,Hib,结合疫苗,氨基还原法（直接结合）,糖类在水溶液中大多以环状半缩醛形式存在，在氨基存在的情况下与之形成,shiff,氏碱,用还原剂将氨基还原成二级亚胺,从而形成稳定的多糖蛋白结合物。,CNBr-ADH,酰胺化反应法,在碱性条件下用,CNBr,活化多糖分子上的羟基（,-OH,）形成氰酸脂。,然后与,ADH,反应将脂酰肼（,AH,）基团导入多糖分子形成,PS-AH,衍生物。,最后在,EDAC,的介导下与蛋白载体形成稳定的结合物。,SPDP,（二硫化物交换）法,首先在,EDAC,的介导下将多糖分子中的羧基与胱氨酸上的氨基通过肽键结合，形成含有二硫键（,-S-S-,）的衍生物，然后用二硫基苏糖醇将双硫键还原成自由的巯基（,-SH,）。,另将,SPDP,与蛋白质载体反应形成蛋白质衍生物。,最终两种衍生物在水溶液中微碱条件下由于二硫基和巯基之间的交换，形成稳定的含有二硫键的多糖蛋白质复合物。,六、结合疫苗的两个共同特征,结构特征,多糖抗原与载体蛋白质之间以化学共价键牢固地接合。,多糖分子大小与载体蛋白的结合比例有利于刺激机体产生最强的针对多糖的免疫应答。,重复制备性及稳定性好，有效期较长。,作为多价或单价疫苗易于标准化。,六、,结合疫苗的两个共同特征,功能特征,多糖蛋白质结合疫苗无毒、安全。,注射机体后能同时诱发细胞免疫和细胞依赖性免疫，血清中存在高滴度的杀菌抗体。,能增强婴幼儿对细菌多糖的免疫应答。,对某些细菌衍生物载体蛋白不产生加强免疫反应。,七、结合疫苗的使用和发展现状,目前已研制的结合疫苗,荚膜多糖结合疫苗,菌体多糖结合疫苗,型流感嗜血杆菌结合疫苗,绿脓杆菌,OSP-TT,结合疫苗,肺炎球菌结合疫苗,副伤寒杆菌,OSP-TT,结合疫苗,A,，,C,群脑膜炎球菌结合疫苗,大肠杆菌,0157:HT,结合疫苗,艾希氏大肠杆菌结合疫苗,大肠杆菌,0111,结合疫苗,伤寒,Vi,结合疫苗,痢疾结合疫苗,肺炎克雷伯杆菌结合疫苗,01,霍乱弧菌结合疫苗,甲、乙型及变异链球菌结合疫苗,O139,霍乱弧菌结合疫苗,新型隐球菌结合疫苗,金黄色葡萄球菌结合疫苗,八、结合疫苗的研究方向,已逐渐扩展到真菌、寄生虫、人体分泌的激素更为广泛的结合疫苗范围,。,由于其接种效果在儿童中尤为显著，更是儿童疫苗研制的一个热点。,怎样将结合疫苗与细胞因子联,合应用，以达到有效免疫的效,果是今后的研究方向之一。,发展和使用更具免疫活力的蛋,白质载体将是新的焦点。,九、存在问题,作为一个单一多糖疫苗基础上进一步化学结合的疫苗，其制造成本较高，发展受到一定限制。,在具体化学合成中还存在许多问题，其中如多糖和载体蛋白质在结合中均存在自身交联而变形，产生一种新抗原（副反应物）的可能，如何控制它的发生还是一个比较棘手的问题。,谢谢!,