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放线菌的培养及观察
摘要：实验用插片法对青色链霉菌和弗氏链霉菌进行制片，观察放线菌在自然生长状态下菌丝形态特征。观察到较亮的基内菌丝，较暗的气生菌丝和青色链霉菌螺旋状、弗氏链霉菌直而粗的孢子丝。
关键词：放线菌 链霉菌 插片法 菌丝 孢子丝
前言：放线菌是产生抗生素的重要微生物之一，其菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和孢子丝组成。制片时不采取涂片法以免破坏菌丝体形态。放线菌孢子丝的形态及其在气生菌丝上的排列方式，随菌种不同而异，是链球菌菌种鉴定的重要依据。孢子丝的形状有直形、波曲、钩状、螺旋状，螺旋状的孢子丝较为常见，其螺旋的松紧、大小、螺数和螺旋方向因菌种而异。孢子丝的着生方式有对生、互生、丛生与轮生（一级轮生和二级轮生）等多种。
1材料和方法
1.1 材料
1.1.1菌种
青色链霉菌 弗氏链霉菌
1.1.2 溶液、试剂和仪器
高氏一号培养基 香柏油 二甲苯 平皿 盖玻片 镊子 普通光学显微镜 擦镜纸 载玻片 酒精灯 双层瓶 接种环 滴管 试管夹
高氏一号培养基成分
项目
可溶性淀粉
KNO3
NaCl
K2HPO4
MgSO4
FeSO4
琼脂
水
pH
用量/g
4
0.2
0.1
0.1
0.1
0.005
4
200mL
7.2—7.4
配置时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其它成分，溶化后补足水分至200mL。121℃灭菌20min。
1.2方法：插片法
1接种：无菌操作分别由青色链霉菌和弗氏链霉菌培养基上挑取菌种在高氏一号培养基上密集划线接种。
2插片：无菌操作用镊子取灭菌盖玻片以约45°角插入平板琼脂接种线上。
3培养：将平板倒置于28℃培养5-7d。
4镜检：用镊子小心取出盖玻片，用纸擦去背面培养物，有菌面朝下放在载玻片上通过显微镜直接用低倍镜和高倍镜观察。最后可以用油镜观察。
2结果与分析
2.1 实验结果
表1 放线菌菌丝及孢子丝观察结果
菌种类别
孢子丝
气生菌丝
基内菌丝
青色链霉菌
螺旋形无分支，较粗
直或曲折有分支，较暗
直或曲折有分支，较透明
弗氏链霉菌
直而粗，无分支
直或曲折有分支，较暗
直或曲折有分支，较透明

孢子丝 孢子丝
气生菌丝

基内菌丝 基内菌丝

图1 青色链霉菌镜检结果（40*10） 图2 弗氏链霉菌的油镜镜检结果（100*10）
2.2结果分析
实验所用高氏一号培养基是合成培养基，微生物在上面生长的速度较慢，培养耗时更长，要在28℃下培养5-7天。基内菌丝伸入培养基内，菌丝或粗或细，色亮，较透明，有杂乱分枝；气生菌丝向外伸出且常有颜色，镜检时可看到颜色暗，较粗，有膨大，有分枝，并能进一步分枝产生孢子丝；两者均直或折曲。孢子丝由气生菌丝产生，粗，色暗，形状规则多呈螺旋形或轮生，能产生孢子。
3小结
通过实验熟悉了培养基制备操作，提升了倒平板的技能，通过观察放线菌菌落形态，了解了放线菌菌丝及孢子丝的自然生长形态特征。在实验过程中，划线要紧密，插片时要垂直于划线与水平面呈45°左右夹角，保证菌种能着生在盖玻片上；显微观察时宜用略暗光线，使菌丝更容易观察；操作过程中勿碰动菌丝体，以免影响菌丝的自然状态；制片时，要使菌面朝下，以免用油镜时破坏菌丝体。
参考文献
沈萍，陈向东. 微生物学实验【M】. 4版. 北京：高等教育出版社，2007.