微生物显微镜和显微技术专家讲座.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,7/13/2025,1,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第1页,借助于,显微镜,观察微生物方法即显微技术，显微技术是微生物检验技术中最惯用技术之一。,7/13/2025,2,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第2页,显微镜种类和原理,显微观察样品制备,7/13/2025,3,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第3页,一、显微镜种类和原理,(一)、光学显微镜,普通光学显微镜,暗视野显微镜,相差显微镜,荧光显微镜,现在光学显微镜分辨最小极限达0.2,m。,7/13/2025,4,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第4页,普通光学显微镜几个基本概念,7/13/2025,5,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第5页,7/13/2025,6,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第6页,7/13/2025,7,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第7页,7/13/2025,8,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第8页,7/13/2025,9,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第9页,1、普通光学显微镜,由三部分组成,照明系统：包含光源和聚光器；,光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜主体，目镜和物镜都由复杂透镜组组成；,机械装置：用于固定材料和观察方便,7/13/2025,10,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第10页,油镜使用,光镜使用方法,7/13/2025,11,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第11页,2、暗视野显微镜,原理：,聚光镜中央有挡光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射光线进入物镜，因而,视野背景是黑，物体边缘是亮。,适用范围：,生活细菌运动性观察。,7/13/2025,12,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第12页,特点:,只能看到物体存在与运动,不能辨清其微细结构,。,暗视野显微镜使用,7/13/2025,13,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第13页,基本原理:,把透过标本可见光光程差变成振幅差，从而提升了各种结构间对比度，使各种结构变得清楚可见。,3、相差显微镜,相差显微镜使用,7/13/2025,14,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第14页,微分干涉差显微镜,DIC显微镜下硅藻形态,适用范围：,对透明活体进行直接观察,7/13/2025,15,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第15页,4、荧光显微镜,原理：荧光素吸收紫外线并放出部分波长较长可见光，发荧光物体会在黑暗背景显现为光亮有色物体,7/13/2025,16,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第16页,绿色：铜绿假单胞菌 黄色：蜡样芽孢杆菌,绿色：微管,红色：微丝,蓝色：核,7/13/2025,17,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第17页,1931年在德国柏林由克诺尔和哈罗斯卡首先装配完成。,用高速电子束代替光束。放大倍数可达80万倍，分辨最小极限达0.2纳米。,（二）电子显微镜,透射电子显微镜,扫描电子显微镜,7/13/2025,18,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第18页,1、透射电子显微镜,当前TEM分辨力可达0.2nm。,用电子束作光源，用电磁场作透镜。用于电镜标本须制成厚度约50nm左右超薄切片。放大倍数最高可达近百万倍.由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、统计系统、电源系统等5部分组成。,7/13/2025,19,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第19页,高尔基体TEM照片(伪彩色),7/13/2025,20,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第20页,7/13/2025,21,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第21页,2、扫描电子显微镜,扫描电子显微镜,大肠杆菌扫描电镜图,工作原理：电子束扫描，激发样品表面放出二次电子，电子产生多少与标本表面立体形貌相关。电子经探测器搜集，经光电倍增管和放大器，产生样品立体图像于荧光屏上。,主要用于：样品表面结构,7/13/2025,22,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第22页,扫描电子显微镜原理,7/13/2025,23,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第23页,7/13/2025,24,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第24页,3、扫描隧道显微镜（STM）,扫描隧道显微镜拍摄7个铀原子团,7/13/2025,25,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第25页,7/13/2025,26,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第26页,4 原子力显微镜,7/13/2025,27,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第27页,7/13/2025,28,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第28页,特点,光学显微镜,电子显微镜,最高放大倍数,约1000-1500,10万以上,最正确分辨率,0.2微米,0.5纳米,辐射源,可见光,电子束,辐射源经过媒介,空气,高真空,透镜类型,玻璃,电磁体,反差起源,光吸收差异或特定波长,电子散射,聚焦机械,机械调整透镜位置,调整电磁透镜流向,改变放大倍数方法,调换物镜或目镜,调整电磁透镜流向,样品承载,载玻片,金属网（通常为铜网）,光学显微镜和电子显微镜特点比较,7/13/2025,29,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第29页,（一）光学显微镜制样,活体观察,染色,压滴法,悬滴法,菌丝埋片法,活菌,死菌,美蓝染色,简单染色,判别染色,革兰氏染色、鞭毛染色、芽孢染色,二、显微观察样品制备,7/13/2025,30,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第30页,（1）压滴法：菌悬液滴于载玻片上，加盖玻片，观察。,（2）悬滴法：盖玻片中央加一小滴菌悬液，翻转置于特制凹载玻片上，观察。,（3）菌丝埋片法：无菌小块玻璃纸铺于平板表面，涂布放线菌或霉菌孢子悬液，培养，取下玻璃纸置于载玻片上，观察菌丝形态。,光学显微镜样品制备活体观察,特点：防止染色对细胞结构破坏，用于运动性、摄食特征、生长繁殖过程中形态改变等观察,7/13/2025,31,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第31页,用途：微生物细致形态和结构,染色前需要对,样品固定,.,惯用固定方法：,酒精火焰加热,、,化学固定,光学显微样品制备染色观察,7/13/2025,32,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第32页,1)、简单染色法：涂片干燥固定染色水洗干燥镜检,2）、革兰氏染色法：涂片固定结晶紫色染色水洗碘液媒染水洗酒精脱色番红复染水洗干燥观察,7/13/2025,33,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第33页,（二）、电子显微镜制样,样品在进行电镜观察前必须进行固定和干燥，制样时普通,采取重金属盐染色或喷镀,，提升在电镜下反差。,7/13/2025,34,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第34页,1、透射电镜样品制备,负染技术,投影技术,超薄切片技术,冰冻蚀刻技术,7/13/2025,35,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第35页,负 染 法,将样品背景染色以凸现样品，所以称为负染法。,普通是采取电子密度高，本身不会显示任何结构，又和样品不起反应物质，如磷钨酸钠盐将样品包围，同时染色剂还会进入观察对象内部，这么，既能显示外形，又可在一定程度上反应样品内部结构。,负染法原理,7/13/2025,36,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第36页,负染色法观察鞭毛,用途：能够观察,细菌细胞、病毒,等。,7/13/2025,37,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第37页,在,真空条件,下，用,电子散射能力强重金属原子来喷镀样品表面,，这么在样品和没有喷镀区域形成了较强反差，而没有喷镀部分成了样品投影，依据投影了解样品立体形状、高度。,投 影 法,7/13/2025,38,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第38页,投影法观察噬菌体,用途：,观察细菌鞭毛或病毒颗粒,7/13/2025,39,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第39页,这是最惯用方法，能够观察细胞或其它样品内部细微结构。,样品固定,脱水,包埋,切片,。,只有在20100纳米厚度切片用透射电子显微镜才能观察，所以普通细菌样品，一个细胞要分割成10片到50片。,超 薄 切 片 法,超薄切片法观察一个厌氧弧菌,7/13/2025,40,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第40页,样品,-196快速冷冻,加温到-100,切割样品,升华(真空)掉断口处冰,重金属喷镀断口表面,电子显微镜观察,冰冻蚀刻法,7/13/2025,41,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第41页,冰冻蚀刻法制备酵母菌内部结构图,优点:,能够防止在固定、脱水和包埋过程中造成细胞结构人为改变而形成假象。,7/13/2025,42,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第42页,2、扫描电镜样品制备,样品先要经过固定、脱水等处理，以免在真空条件下变形失真，为了取得较多二次电子，表面要喷涂重金属和碳原子。,7/13/2025,43,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第43页,扫描电子显微镜拍葡萄球菌表面,人类血细胞SEM照片,7/13/2025,44,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第44页,作 业,1、透射电镜样品制备方法有哪些？各自适用范围有什么不一样？,7/13/2025,45,微生物显微镜和显微技术专家讲座,第45页,