生物化学常用检验项目及质量控制省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

1 1 生物化学惯用检验项目生物化学惯用检验项目及质量控制及质量控制 昌大一附院检验科昌大一附院检验科 郑晓丰第第1页页2 2主要内容：主要内容：一、惯用生化检验项目标一、惯用生化检验项目标 原理及临床意义原理及临床意义二、生化检验质量控制二、生化检验质量控制第第2页页3 3 一、惯用生化检验项目一、惯用生化检验项目 及其临床意义及其临床意义第第3页页4 4 惯用项目惯用项目 肝功效类肝功效类 丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶 总胆红素总胆红素 总蛋白总蛋白 白蛋白白蛋白第第4页页5 5肾功效类肾功效类 肌酐肌酐 尿素氮尿素氮 心肌酶类心肌酶类 肌酸激酶肌酸激酶 第第5页页6 6血脂类血脂类 总胆固醇总胆固醇 甘油三酯甘油三酯 其它其它 葡萄糖葡萄糖 淀粉酶淀粉酶 第第6页页7 7各项目检验方法各项目检验方法第第7页页8 8丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶 ALT 底物L-丙氨酸与a-酮戊二酸在ALT作用下生成丙酮酸，生成丙酮酸在乳酸脱氢酶作用下转化成L-乳酸，同时伴伴随NADH氧化，引发在波长340nm处吸光度下降，下降速率与血清中ALT活力成正比 第第8页页9 9总胆红素总胆红素TBil 改良改良J-G法（仪器和手工）法（仪器和手工）重氮反应，重氮反应，600nm比色。比色。钒酸盐氧化法（仪器）钒酸盐氧化法（仪器）总胆红素在表面活性剂总胆红素在表面活性剂TritonX-100存在下，被钒酸盐氧化，生成胆绿素，存在下，被钒酸盐氧化，生成胆绿素，测定测定450nm处吸光度降低与总胆红素处吸光度降低与总胆红素浓度成正比。浓度成正比。第第9页页1010总蛋白总蛋白TP 双缩脲法（仪器和手工）双缩脲法（仪器和手工）蛋白质分子中有许多肽健蛋白质分子中有许多肽健(-CONH-)，在碱性条件下，蛋白质多肽链中肽键在碱性条件下，蛋白质多肽链中肽键与铜离子作用形成紫红色络合物，在与铜离子作用形成紫红色络合物，在540nm波长有特定吸收峰，所产生颜波长有特定吸收峰，所产生颜色强度与蛋白质含量成正比。与经过色强度与蛋白质含量成正比。与经过一样处理总蛋白校准品进行比较，即一样处理总蛋白校准品进行比较，即可计算出样品中总蛋白含量。可计算出样品中总蛋白含量。第第10页页1111白蛋白白蛋白ALB 溴甲酚绿法（仪器和手工）溴甲酚绿法（仪器和手工）在在pH 4.2缓冲液中，白蛋白作为一个缓冲液中，白蛋白作为一个阳离子，结合阴离子染料溴甲酚绿阳离子，结合阴离子染料溴甲酚绿(BCG)形成蓝绿色复合物，在波长形成蓝绿色复合物，在波长630nm处有吸收峰。其吸光度与白蛋白处有吸收峰。其吸光度与白蛋白浓度成正百分比，与一样处理白蛋白校浓度成正百分比，与一样处理白蛋白校准液比较，即可计算出样品中白蛋白含准液比较，即可计算出样品中白蛋白含量。量。第第11页页1212肌酐肌酐Cr 碱性苦味酸法（仪器）碱性苦味酸法（仪器）Jaffe反应反应 尿、血清中肌酐在碱性条件下与尿、血清中肌酐在碱性条件下与苦味酸盐作用，生成黄红色苦味酸苦味酸盐作用，生成黄红色苦味酸肌酐复合物，颜色深浅与肌酐浓度肌酐复合物，颜色深浅与肌酐浓度成正比。成正比。第第12页页1313尿素氮尿素氮BUN 酶偶联速率法（仪器）酶偶联速率法（仪器）尿素在尿素酶催化下，水解生成氨和二氧尿素在尿素酶催化下，水解生成氨和二氧化碳，氨在化碳，氨在-酮戊二酸和还原型辅酶酮戊二酸和还原型辅酶I存在存在下，经谷氨酸脱氢酶下，经谷氨酸脱氢酶(GLDH)催化生成谷氨催化生成谷氨酸。同时，还原型辅酶酸。同时，还原型辅酶I被氧化成氧化型辅被氧化成氧化型辅酶酶I。还原型辅酶。还原型辅酶I在在340nm波优点有吸收峰，波优点有吸收峰，其吸光度下降速率与待测样品中尿素含量成其吸光度下降速率与待测样品中尿素含量成正比。正比。第第13页页1414总胆固醇总胆固醇TC 酶法酶法（仪器和手工）（仪器和手工）血清中胆固醇酯被胆固醇酯酶血清中胆固醇酯被胆固醇酯酶(CE)水解成水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成氧化成4-胆甾胆甾-3-烯酮并产生过氧化氢，烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶再经过氧化物酶(POD)催化催化4氨基安替比氨基安替比林林(4-AAP)与酚与酚(三者合称三者合称PAP),生成红色醌生成红色醌亚胺亚胺(Trinders反应反应)。在。在505nm比色测定，比色测定，其吸光度与样品中总胆固醇其吸光度与样品中总胆固醇(TC)含量成正含量成正比。与经过一样处理校准品进行比较，即比。与经过一样处理校准品进行比较，即可计算出样品中总胆固醇含量。可计算出样品中总胆固醇含量。第第14页页1515甘油三酯甘油三酯TG 酶法（仪器和手工）（仪器和手工）脂蛋白脂肪酶脂蛋白脂肪酶 中性脂肪中性脂肪+H2O+H2O 甘油甘油+脂肪酸脂肪酸 甘油激酶甘油激酶脂肪酸脂肪酸+ATP+ATP 甘油甘油-3-3-磷酸磷酸+ADP+ADP 甘油甘油-3-3-磷酸氧化酶磷酸氧化酶甘油甘油-3-3-磷酸磷酸+O2 +O2 二羟丙酮磷酸二羟丙酮磷酸+H2O2+H2O2 过氧化物酶过氧化物酶2H2O2+4-AA+EMSE+H3+O 2H2O2+4-AA+EMSE+H3+O 红紫色苯醌红紫色苯醌色素色素+5 H2O+5 H2O第第15页页1616肌酸激酶 CK CK催化磷酸肌酸与二磷酸腺苷(ADP)反应产生三磷酸腺苷(ATP)与肌酸；偶联己糖激酶(HK)及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)催化反应。HK催化葡萄糖与ATP反应，形成葡萄糖-6-磷酸，G6PDH催化葡萄糖-6-磷酸氧化，形成6-磷酸葡萄糖内酯及NADPH。NADPH生成速率代表CK活力。第第16页页1717葡萄糖葡萄糖GLU 葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，在色原性萄糖酸，并产生过氧化氢，在色原性氧受体氧受体4-氨基安替比林偶联酚存在下氨基安替比林偶联酚存在下过氧化物酶催化过氧化氢，氧化色过氧化物酶催化过氧化氢，氧化色素原，生成红色醌类化台物。其颜色素原，生成红色醌类化台物。其颜色深浅与葡萄糖浓度成正比。与经过一深浅与葡萄糖浓度成正比。与经过一样处理葡萄糖校准品进行比较，即可样处理葡萄糖校准品进行比较，即可计算出样品中葡萄糖含量。计算出样品中葡萄糖含量。第第17页页1818淀粉酶淀粉酶 -淀粉酶将底物淀粉酶将底物4,6-亚乙基亚乙基-D-麦芽七糖麦芽七糖-（EPS-G7）水解为各种）水解为各种片段。这些片段又被试剂中片段。这些片段又被试剂中-葡萄葡萄糖苷酶深入水解，生成葡萄糖和对糖苷酶深入水解，生成葡萄糖和对硝基酚。吸光度上升速率与硝基酚。吸光度上升速率与-淀粉淀粉酶活力成正比。酶活力成正比。第第18页页1919各项目临床意义各项目临床意义第第19页页2020丙氨酸氨基转移酶 ALT正常参考值 0-40U/L临床意义 增高：常见于急慢性肝炎，药品性、酒精肝损伤药品性、酒精肝损伤，脂肪肝，肝硬化，胆道疾病等。第第20页页2121 总胆红素 TBIL正常参考值 4.00-17.39umol/L临床意义 增高：原发生胆汁性肝硬化、急性黄疸型肝炎，慢性活动期肝炎，病毒性肝炎。肝硬化，溶血性黄疸，新生儿黄疸新生儿黄疸，胆石症等。第第21页页2222总蛋白总蛋白 TP正常参考值正常参考值 55.00-85.00g/L临床意义临床意义 增高：常见于高度脱水症（如腹泻、增高：常见于高度脱水症（如腹泻、沤吐，休克，高热）及多发性骨髓瘤。沤吐，休克，高热）及多发性骨髓瘤。降低：常见于恶性肿瘤，重症结核，降低：常见于恶性肿瘤，重症结核，营养及吸收障碍，肝硬化，肾病综合营养及吸收障碍，肝硬化，肾病综合症，烧伤，失血。症，烧伤，失血。第第22页页白蛋白白蛋白 ALB正常参考值正常参考值 35.00-55.00g/L临床意义：临床意义：增高：常见于严重失水而造成血浆浓缩，增高：常见于严重失水而造成血浆浓缩，使白蛋白浓度上升。使白蛋白浓度上升。降低：基本与总蛋白相同，尤其是肝脏，降低：基本与总蛋白相同，尤其是肝脏，肾脏疾病更为显著，肾脏疾病更为显著，见于慢性肝炎、肝硬见于慢性肝炎、肝硬化、肝癌、肾炎等。如白蛋白化、肝癌、肾炎等。如白蛋白30g/L,则预后则预后较差。较差。2323第第23页页2424肌酸激酶肌酸激酶 CK正常参考值正常参考值 30-170U/L临床意义临床意义 增高：心梗增高：心梗4-6小时开始升高，小时开始升高，18-36小时小时可达正常值可达正常值20-30倍，为最高峰，倍，为最高峰，2-4天恢天恢复正常，另外，病毒性心肌炎，皮肌炎，复正常，另外，病毒性心肌炎，皮肌炎，肌肉损伤肌肉损伤，肌营养不良，心包炎，脑血管，肌营养不良，心包炎，脑血管意外及心脏手术等都能够使意外及心脏手术等都能够使CK增高。增高。第第24页页2525 尿素氮尿素氮 BUN正常参考值正常参考值 1.7-8.3 mmol/L临床意义临床意义 增高：常见于高蛋白饮食，糖尿病，增高：常见于高蛋白饮食，糖尿病，重症肝病，高热，轻度肾功效低下，重症肝病，高热，轻度肾功效低下，多发性骨髓瘤尿路闭塞，术后无尿，多发性骨髓瘤尿路闭塞，术后无尿，尿毒症前期，肝硬化，严重肾功效衰尿毒症前期，肝硬化，严重肾功效衰竭，尿毒症。竭，尿毒症。第第25页页肌酐肌酐 CRE正常参考值正常参考值 36-132 umol/L临床意义临床意义 增高：见于严重肾功效不全，各种肾增高：见于严重肾功效不全，各种肾障碍，肢端肥大症等。障碍，肢端肥大症等。降低：见于肌肉量降低（如营养不良，降低：见于肌肉量降低（如营养不良，高龄者），多尿。高龄者），多尿。2626第第26页页2727 血糖血糖 GLU正常参考值正常参考值 3.4-6.2 mmol/L临床意义临床意义 增高：一些生理原因（情绪增高：一些生理原因（情绪担心，饭后担心，饭后1-2小时）及注射肾上腺素小时）及注射肾上腺素后，病理性增高见于各种糖尿病，慢性后，病理性增高见于各种糖尿病，慢性胰腺炎，心梗，甲亢，垂体前叶嗜酸性胰腺炎，心梗，甲亢，垂体前叶嗜酸性细胞瘤，颅内出血，颅外伤等。细胞瘤，颅内出血，颅外伤等。第第27页页2828 甘油三酯甘油三酯 TG 正常参考值正常参考值 0.30-1.80mmol/L临床意义临床意义 增高：可由遗传，增高：可由遗传，饮食原因饮食原因或继发于一或继发于一些疾病，如糖尿病，肾病等。些疾病，如糖尿病，肾病等。降低：见于甲亢，肾上腺皮质功效低下，降低：见于甲亢，肾上腺皮质功效低下，肝实质性病变，原发性肝实质性病变，原发性脂蛋白缺乏及脂蛋白缺乏及吸收不良。吸收不良。第第28页页胆固醇胆固醇 TC正常参考值正常参考值 3.40-6.5mmol/L临床意义临床意义1.高脂蛋白血症与异常脂蛋白血症诊高脂蛋白血症与异常脂蛋白血症诊疗及分类；疗及分类；2.心、脑血管病危险原因判断；心、脑血管病危险原因判断；3.TC增高或过低能够是原发营养原因增高或过低能够是原发营养原因或继发于一些疾病，如甲状腺病、肾或继发于一些疾病，如甲状腺病、肾病等。病等。2929第第29页页3030 淀粉酶淀粉酶 AMY 正常参考值正常参考值 0-220U/L临床意义临床意义 增高：见于增高：见于急慢性胰腺炎急慢性胰腺炎，胰腺癌，胆，胰腺癌，胆道疾病，胃穿孔，肠梗阻，腮腺炎，唾道疾病，胃穿孔，肠梗阻，腮腺炎，唾液腺炎等。液腺炎等。降低：见于肝脏疾病，如肝癌，肝硬化。降低：见于肝脏疾病，如肝癌，肝硬化。第第30页页3131二、生化检验质量控制二、生化检验质量控制第第31页页3232质量控制：其目标就是检测分析过程中误差，控制与分析相关各个步骤，确保试验结果准确可靠。误差：偶然误差、系统误差；误差：偶然误差、系统误差；各个步骤：患者、医护、仪器、试剂、校正品各个步骤：患者、医护、仪器、试剂、校正品等等第第32页页3333 所以，应该强调：全方面质量控制全方面质量控制 第第33页页3434全方面质量控制内容主要内容包含：分析前 分析中 三个过程质控 分析后 第第34页页3535全方面质量控制会有专题介绍，在此全方面质量控制会有专题介绍，在此仅介绍分析中质量控制仅介绍分析中质量控制第第35页页3636分析中质量控制建立项目及仪器标准操作程序，并严格执 行：对于手工检测项目，要依据试剂说明书要求制订项目操作卡。对于仪器分析项目，要有正确参数设置，即合理样品量、试剂量、分析时间、温度、波长等。建立适合本室仪器使用和维护保养程序第第36页页3737认真做好室内质控及结果分析 与失控处理第第37页页3838室内质控 是由试验室工作人员采取一系列统计学方法，连续地评价本试验室测定工作可靠程度，判定检验汇报是否可发出过程，其目标是检测、控制本试验室测定工作精密度（重复性），并检测其准确度改变，提升常规测定工作批间、批内标本检测结果一致性。仅仅是“全方面质量控制”其中一个步骤第第38页页3939 怎样做室内质控，不难，各种教材怎样做室内质控，不难，各种教材 都有介绍。都有介绍。难是怎样分析质控结果，查找失难是怎样分析质控结果，查找失 控原因，以及作对应处理。控原因，以及作对应处理。第第39页页4040失控原因分析：、看校正报告：仪器校正结束后，会打印出校正数据，或者在仪器内显示，将所有项目试剂空白吸光度、定标K值、电极斜率逐日志录到记录表中，通过比较（或打印报告中提示）可以发现校正失败项目。a 如果少数项目或个别项目校正失败，可能是：试剂失效、加错。校正品失效、加错、校正时偶然误差发生。参数被错误地改动。第第40页页4141b 假如大多数或全部项目校正失败，可能是仪器状态出问题：吸废液针堵塞吸废液针堵塞或其它-样品探针堵塞或其它-搅拌棒脏污-试剂探针脏污试剂探针脏污或其它-比色杯（池）脏污或有气泡-灯泡不稳定-其它-第第41页页4242 、质控品本身原因：、质控品本身原因：假如校正汇报没有异常，基本可排除试剂、校假如校正汇报没有异常，基本可排除试剂、校正品、校正误差、仪器状态等，应考虑质控品本正品、校正误差、仪器状态等，应考虑质控品本身原因：身原因：复溶时水量多加或少加复溶时水量多加或少加:保留不妥或冰箱故障保留不妥或冰箱故障:化冻时没充分混匀化冻时没充分混匀化冻时没充分混匀化冻时没充分混匀:加样时被污染加样时被污染加样时被污染加样时被污染:位置放错；位置放错；位置放错；位置放错；测定时偶然误差测定时偶然误差:第第42页页4343针对造成失控原因，作对应处理：更换试剂或校正品后重新校正和质控 仪器-更换比色杯或灯泡，擦拭探针，清 通堵塞后，重新校正和质控品测定 原质控品重新测定 更换质控品后重新测定 与工程师联络第第43页页4444做好室内质控应注意问题做好室内质控应注意问题1、控制物选择（1 1）依据仪器特征和技术人员经验选择液体）依据仪器特征和技术人员经验选择液体 型或型或冻干型，或某种品牌产品，或统一订购。冻干型，或某种品牌产品，或统一订购。（2 2）要人血清基质者，要复溶后稳定性好者，）要人血清基质者，要复溶后稳定性好者，在在 -20-20 时稳定不少于时稳定不少于2020天。天。（3 3）至于定值与非定值，普通选择非定值即可（价）至于定值与非定值，普通选择非定值即可（价格较低）。因为室内质控主要是了解天天或每批格较低）。因为室内质控主要是了解天天或每批之间改变（重复性）。之间改变（重复性）。第第44页页4545（4）假如选择定值血清，必须注意：定值只能起参考作用！不能作为本室靶值。1 1）定值是由几家参考试验室用常规方法测定，）定值是由几家参考试验室用常规方法测定，不一样试验室即使相同仪器、相同试剂，测定不一样试验室即使相同仪器、相同试剂，测定结果也存在差异。结果也存在差异。2 2）质量好质控血清当前多数从国外进口，如）质量好质控血清当前多数从国外进口，如BeckmanBeckman，LondoxLondox、RocheRoche、德赛、伯乐等。国、德赛、伯乐等。国外定值尤其是酶如外定值尤其是酶如ckck、ALPALP等同国内有较大偏差。等同国内有较大偏差。第第45页页4646（5）、同品种不一样批号：同其它商品一样，质控血清每一批生产后，都有一生产批号，不一样批号产品，其中所含物质浓度都不一定相同，使用时注意更换批号后，质控图控制范围要提前确定。第第46页页47472、使用质控血清注意事项：（1）对于液体型质控血清，-20以下保留，用后马上放回，并注意密封以防水份挥发。第第47页页（2）对于冻干型质控血清，使用要严格遵照使用说明书：1 1）复溶所用溶剂为试验室用纯净水或双蒸水。）复溶所用溶剂为试验室用纯净水或双蒸水。2 2）溶剂量必须准确，并保持每瓶加量一致性。）溶剂量必须准确，并保持每瓶加量一致性。3 3）开启瓶盖时，注意瓶塞上沾有冻干物不能损失，）开启瓶盖时，注意瓶塞上沾有冻干物不能损失，同时注意手或物品引发污染。同时注意手或物品引发污染。4 4）加水后轻轻摇匀，切忌猛烈振摇，以免破坏一）加水后轻轻摇匀，切忌猛烈振摇，以免破坏一些成份，尤其是各种酶。些成份，尤其是各种酶。第第48页页49495 5）完全溶解后，尽快（）完全溶解后，尽快（1 1或或2 2小时内）以洁净离心管分装，小时内）以洁净离心管分装，-20-20以下冰冻、密封保留，每支约以下冰冻、密封保留，每支约0.3ml0.3ml。6 6）每次复溶量以）每次复溶量以1010天左右使用量为宜（天左右使用量为宜（1 1瓶或瓶或2 2瓶）瓶），确保各成份稳定。确保各成份稳定。7 7）天天使用前，取出一支化冻，化冻后必须轻轻混匀。）天天使用前，取出一支化冻，化冻后必须轻轻混匀。8 8）化冻后质控品，不可再次冻融。）化冻后质控品，不可再次冻融。9 9）要在与患者标本相同测定条件下测定。）要在与患者标本相同测定条件下测定。1010）不使用超出保质期产品。）不使用超出保质期产品。第第49页页5050 谢谢 谢！谢！第第50页页