生化实验二果蔬中总糖及还原糖含量的测定.pptx
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1、生物化学实验生物化学实验生物化学实验生物化学实验第一部分第一部分第一部分第一部分果蔬成分的生化分析果蔬成分的生化分析果蔬成分的生化分析果蔬成分的生化分析综合实验一:果蔬成分的生化分析果蔬成分的生化分析实验一实验一 果蔬中维生素果蔬中维生素C的定量测定(的定量测定(4学时)学时)实验二实验二 果蔬中总糖及还原糖含量的测定(果蔬中总糖及还原糖含量的测定(4学时)学时)实验三实验三 果蔬中蛋白质含量的测定(果蔬中蛋白质含量的测定(4学时)学时)实验四实验四 果蔬中过氧化物酶分析(果蔬中过氧化物酶分析(12学时)学时)实验材料:实验材料:冬枣柚子冬枣柚子14组组梨(梨(2个品种)个品种)58组组盘菜萝
2、卜盘菜萝卜 912组组实实实实 验验验验 二二二二果蔬中总糖及还原糖含量的测定果蔬中总糖及还原糖含量的测定果蔬中总糖及还原糖含量的测定果蔬中总糖及还原糖含量的测定一、目的一、目的 掌握总糖和还原糖含量的测定方法。掌握总糖和还原糖含量的测定方法。学习分光光度计的原理和操作方法。学习分光光度计的原理和操作方法。二、原理二、原理 总总糖糖是是指指样样品品中中的的还还原原单单糖糖及及在在本本实实验验条条件件下下能能水水解解成成还还原原单单糖糖的的蔗蔗糖糖、麦麦芽芽糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。多多糖糖为为非非还还原原糖糖,可可用用酸酸将将没没有有还还原原性性的的多多糖糖和
3、和寡寡糖糖彻彻底底水水解解成成具具有有还还原原性性的的单单糖糖,再再利利用用还还原原糖糖的的性性质质进进行行测测定定,这这样样就就可可分分别别求求出总糖和还原糖的含量。出总糖和还原糖的含量。蒽蒽酮酮比比色色法法是是一一个个快快速速而而简简便便的的定定糖糖方方法法。其其原原理理:糖糖类类在在较较高高温温度度下下可可被被硫硫酸酸脱脱水水成成糠糠醛醛或或糠糠醛醛衍衍生生物物,再再与与蒽蒽酮酮缩缩合合成成蓝蓝色色化化合合物物,在在620nm处有最大吸收。处有最大吸收。三、实验器材三、实验器材1、植物材料、植物材料2、吸管(、吸管(1.0mL2、5.0mL2、0.1mL2、0.2mL2、0.5mL2)3
4、、试管(、试管(1.5cm15cm7)4、分光光度计、分光光度计5、水浴锅、电炉、水浴锅、电炉6、电子分析天平、电子分析天平7、容量瓶(、容量瓶(100mL1)、玻璃漏斗)、玻璃漏斗8、量筒、研钵、三角烧瓶、量筒、研钵、三角烧瓶四、实验试剂四、实验试剂1、蒽蒽酮酮试试剂剂:取取2g蒽蒽酮酮溶溶于于1000mL体体积积分分数数为为80%的硫酸中,当日配制使用。的硫酸中,当日配制使用。2、标标准准葡葡萄萄糖糖溶溶液液(0.1mg/mL):称称取取100mg葡葡萄萄糖糖,溶溶于于蒸蒸馏馏水水并并稀稀释释至至1000mL(可可加加几几滴甲苯作防腐剂)。滴甲苯作防腐剂)。3、6mol/L HCl溶液溶液
5、4、20%NaOH溶溶液液:称称取取20g NaOH固固体体,溶溶于于蒸馏水并稀释至蒸馏水并稀释至100mL。五、操作五、操作1、葡萄糖标准曲线的绘制:、葡萄糖标准曲线的绘制:取洁净试管取洁净试管6支,按下表进行操作:支,按下表进行操作:012345标准葡萄糖溶液标准葡萄糖溶液/mL00.10.20.30.40.5蒸馏水蒸馏水1.00.90.80.70.60.5置冰水浴中置冰水浴中5min蒽酮试剂蒽酮试剂4.04.04.04.04.04.0煮沸煮沸10,冷却后室温放置,冷却后室温放置10,在,在620nm处比色处比色A620nm步骤步骤管号管号 以以吸吸光光度度为为纵纵坐坐标标,各各标标准准液
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