细菌对抗菌药物的敏感试验.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细菌对抗菌药物的敏感试验,*,PPT,文档演模板,Office,PPT,细菌对抗菌药物的敏感试验,2025/3/20 周四,细菌对抗菌药物的敏感试验,第一节 细菌的耐药性监测,细菌的耐药性监测药敏试验,概念：,细菌对抗菌药物的敏感试验（简称药敏试验）是测定某一菌株对某种抗菌药物是敏感还是耐药的一种体外监测试验。,细菌对抗菌药物的敏感试验,一、药敏试验的意义和目的,意义：,大剂量、长疗程导致对机体的伤害；,小剂量、短疗程诱发耐药菌株的产生。,因此，在使用抗菌药物的过程中，必须加强细菌对抗菌药物敏感性的试验室监测，为临床上合理使用抗菌药物提供试验根据。而细菌对抗菌药物的敏感试验，就是对抗菌药物进行试验室监测的重要手段之一。,细菌对抗菌药物的敏感试验,目的：,1、为临床上治疗某个病人选择最佳抗菌药物，指导临床用药，防止由于用药不妥，导致耐药菌株产生或导致人体伤害；,2、进行流行病学调查，理解致病菌的耐药变迁状况，为医疗行政主管部门的决策提供根据；,细菌对抗菌药物的敏感试验,3、用于某些细菌的鉴别和鉴定：如Optochin敏感试验、杆菌肽敏感试验和新生霉素敏感试验，分别用于鉴定不一样的细菌；,4、评价新抗菌药物的抗菌谱及抗菌活性等药效学特性。,细菌对抗菌药物的敏感试验,二、敏感和耐药的概念,一般认为，某菌株能被某种抗菌药物克制或杀灭，则该菌株对该抗菌药物敏感；反之，则为耐药。,上述概念虽然考虑到了细菌对抗菌药物的敏感性，但却忽视了药物的剂量、浓度和机体的耐受性。,细菌对抗菌药物的敏感试验,从本质上讲：细菌对某种抗菌药物是敏感还是耐药，常以该抗菌药物的治疗浓度（抗菌药物通过常用途径和常用剂量所能到达的血药浓度）与该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度（MIC）的关系而定：,细菌对抗菌药物的敏感试验,若某抗菌药物对某菌株的最小抑菌浓度（MIC）不不小于该抗菌药物的治疗浓度，则为“敏感”（S,Sensitive）；若某抗菌药物对某菌株的最小抑菌浓度（MIC）不小于该抗菌药物的治疗浓度，则为“耐药”（R,Resistant）；若MIC介于治疗浓度的上下限之间，则为“中介度”（I,Intermediate）。,细菌对抗菌药物的敏感试验,1,、,MIC,（,Minimum inhibitory concentration,）,所谓MIC，就是某抗菌药物对某菌株的最小抑菌浓度。其测定措施是：,（1）、取一列洁净无菌的小试管，各管分别加营养肉汤1ml；,（2）、第一管加入含1280 U/ml的抗菌药物原液1ml,后倍比稀释至次末管后吸出1ml 弃去；,（3）、各管分别加入试验菌液0.1ml;,（4）、置37孵箱中培养1824h，观测成果。,细菌对抗菌药物的敏感试验,细菌对抗菌药物的敏感试验,成果观测：含最小药物量仍呈明显不混浊的一管所含的药物浓度即为该抗菌药物对试验菌株的最小抑菌浓度（MIC）。,细菌对抗菌药物的敏感试验,2,、血药浓度（血清中抗菌药物的浓度）,在使用各类抗菌药物时，常常会碰到的一种重要问题，就是血药浓度。例如：口服抗菌药物总是经肠道逐渐吸取入血的。因此，血液中的药物浓度是从无到有随时间的延长逐渐增高的。虽然静脉注射抗菌药物，因存在着首过效应（第一关卡效应）和肾脏的排泄作用，血药浓度也是伴随注射的次数而逐渐增高的。,细菌对抗菌药物的敏感试验,细菌对抗菌药物的敏感试验,细菌对抗菌药物的敏感试验,3,、血药浓度与,MIC,之间的关系,细菌对抗菌药物的敏感试验,当MIC不不小于血药浓度中治疗浓度的下限时，则称为“敏感”，用“S”（Sensitive）表达。,当MIC不小于治疗浓度的上限时，则为“耐药”，用“R”（Resistant）表达。,当MIC介于治疗浓度的上下限之间时，则为“中介度”，用“I”（Intermediate）表达。,细菌对抗菌药物的敏感试验,不过药物在局部组织和组织液中的浓度，往往只有血清浓度的1/21/10，故在治疗局部组织感染时，仅仅以MIC不不小于血清治疗浓度定为敏感往往会产生一定的误差，应当以MIC不不小于血清治疗浓度的210倍，才是敏感。因此，在治疗局部组织或组织液感染选用抗菌药物时，一般治疗剂量，至少应当是抗菌药物对病原菌的MIC的35倍。,细菌对抗菌药物的敏感试验,目前，临床上选择抗菌药物，常根据抑菌商数来选择。,所谓,“抑菌商数”,（Inhibitory Quotient，简称IQ），是指某抗菌药物在局部组织或体液中的浓度除以该药物对感染菌的最小抑菌浓度所得的商数。,即：,局部组织或体液中的药物浓度,IQ=,MIC,抑菌商数越大，抑菌效果越明显；反之，抑菌商数越小，抑菌效果越差。,细菌对抗菌药物的敏感试验,三、细菌耐药性检测的常用方式,细菌对抗菌药物的敏感试验,原则成果判读表,细菌对抗菌药物的敏感试验,分界点的计算措施,选用一大群同种不一样株的细菌做药敏试验（至少选用100株，包括敏感菌株和耐药菌株），求出该群细菌中每一菌株对某抗菌药物的MIC及其对应的抑菌环直径。因抗菌药物对细菌的MIC与其对应的抑菌环直径呈负有关关系，据此可绘制回归直线图。措施如下：,细菌对抗菌药物的敏感试验,（1）、用试管稀释法分别检测某抗菌药物对试验菌各菌株的MIC；,（2）、用含一定量该抗菌药物的药敏纸片，以扩散法分别测出（1）项中各菌株对应的抑菌环直径；,（3）、以MIC的对数（为计算以便，可采用以2为底的对数）为纵坐标；以抑菌环直径为横坐标，在坐标纸上绘制lgMIC与抑菌环直径的散点图；,细菌对抗菌药物的敏感试验,细菌对抗菌药物的敏感试验,细菌对抗菌药物的敏感试验,细菌对抗菌药物的敏感试验,第二节 抗菌药物压力,一、抗菌药物压力,是细菌产生耐药的重要源动力。,1985年，著名学者McGowan指出了与医院内细菌耐药性的出既有关的7个方面：,（1）引起医院感染的微生物的耐药性比引起社会感染的微生物的耐药性更多见；,（2）医院中耐药菌株感染者使用的抗菌药物比敏感株感染或定植者使用的抗菌药物多；,细菌对抗菌药物的敏感试验,（3）抗菌药物使用状况的变化会引起细菌耐药状况的变化，如投入或停用某种抗菌药物常与其耐药性的消长有关；,（4）抗菌药物使用愈多的区域耐药菌分布愈多；,（5）抗菌药物应用时间越长耐药菌定植的也许性越大；,（6）抗菌药物剂量越大耐药菌定植或感染的机会更多；,（7）抗菌药物对自身菌群有影响并有助于耐药菌生长。,细菌对抗菌药物的敏感试验,二、抗菌药物作用的基本机理,抗菌药的作用机理重要有如下5种,1、克制细胞壁的合成,这些药物重要选择性作用于某些有细胞壁的真菌、细菌，而对宿主自身没有毒性作用。,细菌对抗菌药物的敏感试验,这些药物包括青霉素（Penicillins）、头孢菌素（Cephalosporins）、万古霉素（Vancomycin）、杆菌肽（Bacitracin）、异烟肼（Isoniazid）、乙胺丁醇（Ethambutol）等。它们重要通过克制细胞壁的重要成分肽聚糖的合成，从而引起细胞壁的通透性变化，大量水分进入细胞浆中而引起细胞的裂解。,细菌对抗菌药物的敏感试验,细菌对抗菌药物的敏感试验,2、克制蛋白质的转录或合成,由于真核生物和原核生物核糖体的差异，真核生物的核糖体重要是80 S，由60 S和40 S两个亚基构成，而原核生物的核糖体是70 S，重要由30 S和50 S两个亚基构成。,细菌对抗菌药物的敏感试验,属于这一种作用机制的重要抗菌药包括氨基糖苷类（Aminoglycosides），如链霉素(Streptomycin)、阿米卡星（Amikacin）、托普霉素（Tobramycin）、庆大霉素（Gentamicin）等，它们重要作用于核糖体的30 S亚基，变化它的形状，导致mRNA不能被正常地翻译而引起蛋白质合成受阻，从而引起细菌死亡。,细菌对抗菌药物的敏感试验,3、破坏胞浆膜的完整性,此类抗菌药重要是某些抗真菌的药物，如两性霉素B（Amphotericin B），它们重要可以与细菌细胞胞浆膜上的某些磷脂成分结合，破坏胞浆膜的完整性，从而导致细胞的裂解。,细菌对抗菌药物的敏感试验,4、影响细菌的代谢途径,此类抗菌药的代表就是磺胺类（Sulfonamides）。,细菌对抗菌药物的敏感试验,5、克制核酸的合成,此类药物重要包括某些核苷酸的类似物，它们可以插入到DNA或RNA链中，导致DNA或RNA复制过程中的错配，而干扰其正常的功能。此外某些药物，如喹诺酮（Quinolones）、氟喹诺酮（Fluoroquinolones）可以特异性地克制DNA旋转酶的活性，克制细菌DNA复制时的解螺旋，导致DNA复制的受阻。,细菌对抗菌药物的敏感试验,三、细菌耐药性产生的机理,细菌的耐药性机理重要有生化机理和基因机理两个方面：,(一）、生化机理：,1、细菌产生破坏药物构造的酶,这一类的耐药细菌常常可以产生一种或多种水解酶或钝化酶来水解或修饰进入细菌细胞内的药物，使之失去生物活性。这是引起细菌耐药性的最重要的机制，目前发现和分离的钝化酶重要有如下4种：,细菌对抗菌药物的敏感试验,（1）-内酰胺酶(-Lactamase)。它是细菌对-内酰胺类抗菌药耐药的重要原因，由于-内酰胺酶的产生，使其-内酰胺环的酰胺键断裂而失去抗菌活性。该类酶可认为染色体介导，也可为质粒介导。Bush 根据底物及酶克制剂的作用类型将-内酰胺酶分为4种，即A组-内酰胺酶(重要水解青霉素类)，B组金属酶(其活性部分是结合锌离子的硫醇)，C组-内酰胺酶(重要水解头孢菌素类)，D-组-内酰胺酶(苯唑西林水解酶)。,细菌对抗菌药物的敏感试验,细菌对抗菌药物的敏感试验,（2）氨基糖苷类钝化酶。细菌对氨基糖苷类(Aminoglycosides)抗生素产生耐药性的最重要的原因就是产生了对这一类药物的共价修饰酶。这些酶通过磷酸化、乙酰化和腺苷酸化等途径对其进行修饰而使其灭活。目前，这一类的共价修饰酶重要有磷酸转移酶（O-phosphotransferases,APHs）,腺苷酸转移酶（O-adenyltransferases，ANTs）和N-乙酰转移酶（N-acetyltransferases，AACs）3类。目前已经对这些酶的晶体构造有了清晰的研究。,细菌对抗菌药物的敏感试验,（3）氯霉素乙酰转移酶。此酶为一种胞内酶，早在1987年，Lyon等就确定此酶由质粒或染色体或转座子基因编码，重要作用是使氯霉素类抗生素转化为无抗菌活性的代谢物。,（4）红霉素酯化酶。此酶是一种体质酶，由质粒介导，重要作用是水解红霉素及大环内酯类抗生素构造中的内酯而使之失去抗菌活性。,细菌对抗菌药物的敏感试验,2、靶位的变化,由于抗菌药作用的靶位(如核糖体和核蛋白)发生突变或被细菌产生的某种酶修饰而使抗菌药物无法发挥作用，以及抗菌药的作用靶位(如青霉素结合蛋白和DNA回旋酶)构造发生变化而使之与抗生素的亲和力下降，这种耐药机制在细菌耐药中普遍存在。,细菌对抗菌药物的敏感试验,目前的研究表明，-内酰胺类抗菌药物的作用靶位为青霉素结合蛋白(PBP),氨基糖苷类和四环素抗菌药物的作用靶位为核糖体的50 S亚基，大环内酯类和氯霉素以及克林霉素的作用靶位为核糖体的30 S亚基，利福霉素类的作用靶位为依赖于DNA的RNA聚合酶，哇诺酮类的作用靶位为DNA促旋酶，磺胺类的作用靶位为二氢碟酸合成酶和二氢叶酸还原酶，万古霉素的作用靶位为细胞壁五肽末端的D-丙氨酰-D-丙氨酸末端的游离羧基。这些作用靶位构造的细微变化均有也许产生很高的耐药性。,细菌对抗菌药物的敏感试验,3、渗透屏障,由于细菌细胞壁的障碍或细胞膜通透性的变化，形成一道有效屏障，抗菌药无法进入细胞内到达作用靶位而发挥抗菌效能，这也是细菌在进化与繁殖过程中形成的一种防卫机制。此类耐药机制是非特异性的，重要见于革兰氏阴性菌。由于革兰氏阴性菌细胞壁黏肽层外面存在着类脂双层构成的外膜，外层为脂多糖，由紧密排列的碳氮分子构成，阻碍了疏水性抗菌药进入菌体内。,细菌对抗菌药物的敏感试验,而在革兰氏阳性菌中细胞膜被一层厚厚的肽聚糖细胞壁所包裹。尽管细胞壁具有很强的机械强度，但由于其构造比较粗糙，几乎不影响抗菌药物这样的小分子物质扩散至细胞内。,细菌对抗菌药物的敏感试验,4、药物积极外排系统,药物的积极外排系统被认为是导致广泛的细菌对多种抗生素产生耐药性的重要原因。目前研究表明重要有两大类外排系统：特异性（单一性）外排系统和多种药物耐药性（multidrug resistance，MDR）外排系统。一般来说，两个外排系统的作用都各不相似,其中特异性外排系统一般只作用于单一的底物（药物），常常是某一类的抗生素，如四环素、氯霉素、链霉素等。而多种药物耐药性外排系统可以作用于多种抗菌药或者某些构造和功能不有关的复合物。,细菌对抗菌药物的敏感试验,（二）、细菌耐药性产生的基因机理,细菌耐药的基因机理细菌可通过不一样机制产生遗传变异和对抗菌药物的耐药性。根据遗传特性，将细菌耐药性分为两类。,细菌对抗菌药物的敏感试验,1、自身基因突变,该类耐药性来源于细菌固有的(自然发生)特性，即自身就有耐药基因存在于其染色体上，也叫染色体介导的耐药性。一般是由于遗传基因DNA自发变化的成果，具有经典的种属特异性，可以代代相传。细菌的此类耐药性，一般对一种或两种相类似的药物耐药，且比较稳定，耐药性的产生与消失与药物接触无关，在自然界中此类耐药菌占次要地位。,细菌对抗菌药物的敏感试验,2、获得外源基因,此类耐药性是由于细菌获得外源新基因而产生的。细菌外源耐药性基因既可以通过染色体垂直传播而获得，又可以通过质粒或转座子水平传播而获得。因此，细菌耐药性的传播方式重要有转化(transformation)、转导(transduction)、接合(conjugation)和转座(transposion)4种。,细菌对抗菌药物的敏感试验,（1）转化。重要指耐药菌溶解后释放出的DNA进入敏感菌体内，其耐药基因与敏感菌的同种基因重新组合，使敏感菌成为耐药菌。转化过程常限于革兰氏阴性菌。,细菌对抗菌药物的敏感试验,（2）转导。重要是借助于噬菌体将耐药基因转移给敏感菌，由于噬菌体有特异性，且通过噬菌体传播的DNA量很少，因此耐药性的转导现象仅能发生在同种细菌内，一般仅能传递对一种抗菌药的耐药性。临床上是金黄色葡萄球菌耐药性转移的惟一的方式。,细菌对抗菌药物的敏感试验,（3）接合。由接合传递的耐药性也叫感染性耐药，重要是通过耐药菌与敏感菌菌体的直接接触，由耐药菌将耐药因子转移给敏感菌。接合转移不仅可在同种菌之间进行，也可在属间不一样种菌之间进行，通过接合方式，一次可完毕对多种抗菌药耐药性的转移。这种方式重要出目前革兰氏阴性细菌中，尤其是在肠道菌中。,细菌对抗菌药物的敏感试验,（4）转座子。它是一种比质粒更小的DNA片段，它可以随意地插入或跃出其他DNA分子中，将耐药性的遗传信息进行传递，转座子不能进行自身复制，必须依赖于细菌的染色体、噬菌体或质粒中而得以复制和繁殖。转座子的宿主范围广，它可在革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间转移，从而使耐药基因的宿主范围也扩大，是耐药性传播的一种重要原因。,细菌对抗菌药物的敏感试验,四、减轻抗菌药物压力的对策,1.制定抗微生物药物应用指南,并强制实行；,2.在药敏试验指导下选药；,3.原则上尽量选用窄谱抗菌药,一般疗程 710d,如3d无效应更换药物；,4.联合用药应有明确指征,一般以23种为宜,最佳不一样步使用抗细菌药、抗真菌药、抗病毒药、抗原虫药和抗结核药,否则既无助于感染的处理,更增长毒副反应；,细菌对抗菌药物的敏感试验,5.严格控制防止使用和非医疗的农、林、牧、副、渔以及饲料的使用；,6.采用限用方略：如轮作制，即将某些抗菌药停用一段时期后再用，以恢复细菌对药物的敏感性；,7.加强监控，掌握致病菌变化以及耐药状况,及时反馈临床；,8.坚决制止在经济利益驱动下滥用抗菌药物。,细菌对抗菌药物的敏感试验,演讲完毕，谢谢听讲,!,再会，see you again,3rew,2025/3/20 周四,细菌对抗菌药物的敏感试验,