第十三章-荧光分析法PPT课件.ppt
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1、磺胺磺胺类药类药物的物的结结构通式构通式为为,试设计试设计用用仪仪器分析的方法分器分析的方法分别测别测定磺胺原料定磺胺原料药药及人及人体口服磺胺体口服磺胺药药片后血片后血浆浆中中药药物含量。物含量。思思 考考 题题1.第第1111章章 荧荧光分析法光分析法 fluorometry2.基本概念基本概念荧荧光:光:物物质质分子接受光子能量被激分子接受光子能量被激发发后,从激后,从激发态发态的最低振的最低振动动能能级级返回基返回基态时发态时发射出的光。射出的光。荧荧光分析法:光分析法:根据物根据物质质的的荧荧光光谱线谱线位置及其位置及其强强度度进进行物行物质鉴质鉴定和含量定和含量测测定的方法。定的方
2、法。分子分子荧荧光分析法光分析法(molecularfluorometry)第一激第一激发单发单重重态态的最低振的最低振动动能能级级3.自旋量子数自旋量子数s=1/2或或-1/2总总自旋量子数自旋量子数S0多重性多重性 2S11第一第一节节 荧荧光分析法的基本原理光分析法的基本原理基基态单态单重重态态第一激第一激发单发单重重态态能能 量量4.荧荧光和磷光光和磷光产产生示意生示意图图5.振振动驰动驰豫豫内部能量内部能量转换转换处处于激于激发态发态各振各振动动能能级级的分子通的分子通过过与溶与溶剂剂分子的碰撞而将部分子的碰撞而将部分振分振动动能量能量传递给传递给溶溶剂剂分子,其分子,其电电子子则则
3、返回到同一返回到同一电电子激子激发发态态的最低振的最低振动动能能级级的的过过程。程。当两个当两个电电子激子激发态发态之之间间的能量相差的能量相差较较小以至其振小以至其振动动能能级级有重叠有重叠时时,受激分子由高,受激分子由高电电子能子能级转级转移至低移至低电电子能子能级级的的过过程。程。无无辐辐射射跃跃迁迁6.荧荧光和磷光光和磷光产产生示意生示意图图7.关于关于荧荧光光荧荧光的光的产产生需生需经历经历两个两个过过程:程:吸收吸收发发射射第一激第一激发单发单重重态态的最低振的最低振动动能能级级振振动驰动驰豫豫内部能量内部能量转换转换8.例例 题题1.所所谓谓荧荧光光,即即某某些些物物质质经经入入
4、射射光光照照射射后后,吸吸收收了了入入射射光光的的能能量量,从从而而辐辐射射出出比比入入射射光:光:A波波长长长长的光的光线线 B波波长长短的光短的光线线 C能量大的光能量大的光线线 D频频率高的光率高的光线线9.(二)激(二)激发发光光谱谱和和发发射光射光谱谱1.激激发发光光谱谱:excitationspectrum荧荧光光光光谱谱表示不同激表示不同激发发波波长长的的辐辐射引起物射引起物质发质发射某一射某一波波长荧长荧光的相光的相对对效率。效率。2.发发射光射光谱谱:fluorescence/emissionspectrumF exF-em表示在所表示在所发发射的射的荧荧光中各种波光中各种波
5、长组长组分的相分的相对对强强度。度。10.nm硫酸奎宁的激硫酸奎宁的激发发光光谱谱和和荧荧光光光光谱谱11.荧荧光光光光谱谱的特征的特征1、荧荧光光光光谱谱的形状与激的形状与激发发波波长长无关无关产产生原因:生原因:荧荧光光发发射是从特定的激射是从特定的激发态发态返回基返回基态态荧荧光光光光谱谱的的强强度与激度与激发发波波长长有关有关12.荧荧光光光光谱谱的特征的特征2、斯托克斯位移(、斯托克斯位移(Stokesshift):):emex产产生原因:生原因:能量能量损损失失(1)内)内转换转换和振和振动驰动驰豫豫(2)激)激发态发态分子返回基分子返回基态态不不同振同振动动能能级级(3)激)激发
6、态发态分子与溶分子与溶剂剂分子分子的相互作用的相互作用13.荧荧光光光光谱谱的特征的特征3、荧荧光光光光谱谱与激与激发发光光谱谱的的镜镜像关系像关系产产生原因:生原因:电电子基子基态态的振的振动动能能级级分布与激分布与激发态发态的相似的相似14.例例 题题下列下列说说法哪个是法哪个是错误错误的?的?A荧荧光光光光谱谱的形状与激的形状与激发发波波长长无关无关B荧荧光波光波长总长总是大于激是大于激发发光波光波长长C荧荧光光光光谱谱的的最最短短波波长长和和激激发发光光谱谱的的最最长长波波长长相相对应对应D最最长长的的荧荧光波光波长长与最与最长长的激的激发发光波光波长长相相对应对应15.分子分子产产生
7、生荧荧光必光必须须具具备备两个条件:两个条件:1.强强的紫外可的紫外可见见吸收吸收2.一定的一定的荧荧光效率光效率(四)(四)荧荧光效率和光效率和荧荧光寿命光寿命16.荧荧光效率(光效率(荧荧光量子光量子产产率)率)f01(四)(四)荧荧光效率和光效率和荧荧光寿命光寿命17.二、二、荧荧光与分子光与分子结结构构分子分子产产生生荧荧光必光必须须具具备备两个条件:两个条件:1.强强的紫外可的紫外可见见吸收吸收2.一定的一定的荧荧光效率光效率18.(一)(一)跃跃迁迁类类型型*跃跃迁是迁是产产生生荧荧光的最主要光的最主要类类型型 19.ex 205nm 286nm 356nmem 278nm 321
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