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植物生理学实验报告
实验题目
硝酸还原酶活性测定
日期

班级
18秋园艺本
姓名
黄永羲
【实验目的】
硝酸还原酶是植物氮素代谢中的关键酶之一，它与作物吸收利用氮肥有关，对 作物的产量和品质有影响。因而可以把硝酸还原酶的活力当作植物营养或农田施肥 的指标之一，也可作为品种选育的指标之一。通过本实验可初步掌握测定硝酸还原 酶活性的原理与方法。
【实验原理】

，,硝酸还原酶能将NO还原成NO 32
NOf ♦ NADH ♦ H•色峭♦ NAD* ♦ H,0
,,产生的NO的量与硝酸还原醐的活性相关。通过测定反响液中产生的N022 含量，即可确定酶活性大小。
,,NO含量可用磺胺显色法测定。NO与磺胺及a,蔡胺在酸性条件下生成红22
色偶氮化合物其反响如下：

酶活性可用单位鲜重组织在单位时间内产生的亚硝酸量来表示：
亚硝酸态氮微克数/克鲜重组织1小时。三、实验材料、仪器和试剂
【实验器材】
1(实验材料植物的根、茎、叶，本实验选用白萝卜叶片
2(仪器
(1)分光光度计(2)离心机(3)真空泵和真空干燥器
(4)恒温水浴锅(5)恒温箱(6)刻度吸管(lml、2ml、5ml)
(7)试管(8)天平(9)三角瓶(50ml)
3(试剂
(1)亚硝酸钠标准液：称取0.1000g亚硝酸钠(AR),用蒸储水溶解并定容至 100ml o然后吸取5ml再用蒸储水定客至1000ml。即为浓度5 口 g, ml的亚硝酸钠标 准液。
1, (2pH7. 5 磷酸缓冲液)0. lmol?L
,1(3)0. 2 mol?L的硝酸钾溶液
(4)1,对氨基苯磺磷酸
(5)2,。，蔡胺
(6)30,三氯乙酸
【实验步骤】
1(标准曲线的制作
取6支试管，编号，按下表操作
管号
操作工程123456
NaNO 淀标准液(ml) 0 0. 4 0. 8 1. 2 1. 6 2. 0 2
蒸偏水(ml) 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0
NaNO 含量(ug) 0 2 4 6 8 10 2
磺胺(ml)各4
a ,蔡胺各4
摇匀在30?水浴中保温20分钟。然后在520ml波长下比色测定消光值。以亚硝 酸钠含量为横坐标，消光值为纵坐标绘制标准曲线。
2(酶反响和酶活性测定
2将白萝卜叶片洗静，剪成0.5cnih的小片，混匀后称三份，每份0.5, 1.0g,
分另放人50ml的三角瓶中，编号按下表加试剂

2
3

4.0
4.0
4.0
0
S.0
9.0
).0
3三・乙・
1.0
0
0
摇匀，置真空于燥器中，抽气10分钟。然后将三角瓶放人恒温箱，在30?暗条 件下保温30分钟。取出后向2, 3号瓶中分别加入1 ml 30,三氯乙酸终止反响， 将反响液离心（3000rmp 10分钟）或过滤。分另吸取2ml反响液于三只试管中各加 4ml 1,磺胺和0.2, a,蔡胺。
摇匀在30?水浴中保温20分钟。然后在520ml波长下比色测定消光值。
【实验结果】
酶活性（亚硝酸钠P g, g鲜重?h）,亚硝酸钠微克数（u g） X稀
释倍数，样品重（g）X时间（h）
【实验考前须知】
1（酶促反响在喑条件下进行，以防光照下叶绿体形成还原型铁氧还蛋白，促
使亚硝酸还原酶把N0还原成NHo 23