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类型光合细菌的培养及应用.doc

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    光合 细菌 培养 应用
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    光合细菌的培养及应用 摘要 S 综述了光合细菌的培养方法及其在水产养殖、废水处理、种植业、畜牧业、新能源和医药保健中的应用,并讨论了光合细菌的应用前景。 关键词 光合细菌;培养;应用; 1 引言 光合细菌(photosynthetic bacteria,简称PSB) 是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物 作供氧体兼碳源,进行不放氧光合作用的细菌,广 泛分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土 壤中,依据《伯杰细菌鉴定手册》(第九版)可分 为 6 个类群,27 个属。不产氧光合作用的红螺菌目 分为紫细菌(purple bacteria)、绿细菌(Green bacteria)和日光杆菌属(Heliobacteria)、红色杆菌 属(Erybrobacter)。其中紫细菌中包含有红螺菌科 (Rhodolspirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、 外硫红螺菌科(Eceothiorhodospiraceae),包含16属 49种。其中在生产上有意义的红螺菌科包括红螺菌 属、红假单胞菌属和红微菌属 [1] 。PSB 均为革兰氏 阴性细菌,一般为球型、卵形、杆形、弧形、螺旋 形、环形、半环形丝形,也可随培养条件和生长阶 段而改变,大部分单个存在。 PSB的一般菌体组成及营养成分见表1 [2] . 表1 光合细菌菌体的组成与小球藻等比较 Tab. 1 Components comparison between photosynthetic bacteria and Chlorella P S B 含有较高的优良蛋白质,粗蛋白含量为 65.45%,含有17种氨基酸而且消化率较高;粗脂肪 约 7%;可溶性糖类约 20%;粗纤维约 3% [1] ;维生 素 B12 含量是酵母的 200 倍、小球藻的 4 倍 [2] ,生 物素含量也比较丰富;菌体的脂类成份含有大量的 叶绿素、类胡萝卜素和辅酶Q(泛醌),迄今已从PSB中 分离出80种以上的类胡萝卜素。叶绿素和类胡萝卜 素对养殖生物的健康生长,增强对疾病的抵抗力有 很大的益处。辅酶Q 4 是与生命活动有重大关系的生 理活性物质,PSB 中的含量特高,是酵母的 13 倍。 以上特点决定了 PSB 可做为畜禽、鱼虾的饲料。但 PSB中缺乏ω 3 系列20碳以上的高度不饱和脂肪酸, 单独作为仔鱼的初期饵料时,需与其它富含高度不 饱和脂肪酸的饵料同时使用。 2 光合细菌的培养 水产养殖市场对 P S B 活体菌种的需求缺口很 大,为了满足水产养殖对PSB活体菌种的需求,PSB 的生产方法有很多,但是到目前为止,还没有进行产 业化生产PSB的报道。冯云等 [3] 用50L的塑料桶来厌 氧培养 PSB,使培养密度达到 2.1× 10 9 个 /ml;杨 绍斌 [4] 在塑料大棚内建大小 2000~5000L 的水池使 其厌氧发酵富集扩大培养,培养液中含 PSB 活菌数 可达5×10 6 个/毫升;鄂春宇 [5] 用塑料薄膜袋培养 PSB,培养密度达到2.5~3×10 5 个/ml,12个月生产 50多吨,但是在PSB的密度检测时,很容易染菌。由 中科院开发的 PSB 大规模生产工艺,产品含菌量达 到 5 × 10 10 个/毫升,保质期 3 个月以上,并可根 据客户要求,设计和建设不同规模的生产线 [6] 。 2.1 菌种 菌种可从采集的池塘底泥或海水中重复富集、分 离纯化获得.若用保存下来的菌种,在培养前必须提纯复 壮,才能有效地进行扩大培养。光合细菌的生产需要采 用优良菌种,要求菌种活性高,菌液中菌体分布均匀、 无下沉现象,目前养殖中使用的PSB多为红螺菌科和一 部分着色菌科的复合菌株 [7] 。 种类 ω % ω/(μg.g-1) 粗蛋白 粗脂肪可溶性糖 粗纤维 灰分 VB1 VB2 VB6 VB12 烟酸 叶酸 维生素 光合细菌 65.15 7.18 20.31 2.78 4.28 12 50 5 21 125 30 65 小球藻 53.76 6.31 19.28 10.22 1.52 2.4 196 15 5.2 140 18 18-25 大豆 30.99 19.33 30.33 7.11 5.68 14.5 2.3 6.4 - 22 2.3 0.6 研究报告28 生命科学仪器 2007 第5卷/ 3月刊 研究报告 2.2 培养基及培养条件 PSB 培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外,还 需要一定量的镁、钙、钠和有关的微量元素,将所需的 营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养 基。本实验室采用酵母膏、蛋白胨培养基,基本配方为: CaCL 2 0.3g,MgSO 4 ·7H 2 O0.5g,酵母膏3g,蛋白胨 3g,蒸馏水1000ml,pH: 6.8. 如需制固体培养基再加2% 琼脂。培养温度:25℃~30℃最佳,光照强度:2000LX~ 5000LX,PH:7.5~8.5最佳。 2.3 光合细菌的培养 把菌种接种到灭好菌的培养基中,在三角瓶中 进行二级培养,每天摇晃几次。把 40L 的反应器中 加满自来水,放入通气管,盖上保鲜膜一起用次氯 酸杀菌消毒24小时,用硫代硫酸钠(1L次氯酸需要 150g硫代硫酸钠)来中和。以15%的接种量接入反 应器中,用泵通气培养,用分光光度计跟踪测量菌 液的密度,得到菌液的密度较高,而且反应器还可 以进一步放大。 3 光合细菌的应用 3.1 光合细菌在水产养殖中的应用 测定了池塘水中溶氧、pH、氨氮、亚硝酸盐氮 和COD 的变化情况,池水中的pH、溶氧不 受光合细 菌的影响;对水中氨氮、亚硝态氮有降低作用,降 级率分别为 45%-52%、33%-43%,对有机物(COD) 也有降低作用,但不明显。由于水体中氨氮、亚硝酸盐 氮等含量超过一定量时对养殖动物产生毒害作用,并使 易受病原微生物的感染,而光合细菌对改善水质起到一 定作用,维持水体生态平衡,使鱼类能在优良的环境中 生长,提高了成活率 [8] ,无论是成活率还是产量和质量 上都有显著提高。 PSB菌体无毒,营养非常丰富,见表1. PSB 是一 类营养成分高且种类比较全的微生物,作为水产养殖生 物的饲料添加剂,具有明显的增产效果 [9] 。 PSB 能够防治病害,主要采取预防为主防治结合 的原则。传统的方法是通过向池塘中泼洒生石灰来消 毒(每15~20天一次),在饵料中要加拌土霉素进行 预防 [11] ,化学品容易残留在环境中,抗生素容易使 病原菌产生抗药性。与化学药品和抗生素相比,PSB 中含有 Q 10 和抗病毒物质,能提高动物的免疫力。 3.2 光合细菌在废水处理中的应用 由于光合细菌能利用光能和有机废物合成自身菌 体蛋白和其他无害物质(变有害物质为无害物质), 所以光合细菌是当今世界上最具发展前景的净化环境的 生物制剂。现在,PSB 已广泛用于大型垃圾场,生 活垃圾的现场处理及人粪尿、畜禽粪尿的集中处理和 综合利用 [12] 。处理无毒有机废水中的菌体可作为一种 天然色素的资源,淀粉废水经PSB 处理后COD 去除率 大于70%,同时菌体可用于提取类胡萝卜素 [13] 。红螺 菌对过渡金属有较强的抗性,它能对废水中的 Cu 2+ , Pb 2+ ,Ni 2+ 和Cr 6+ 的吸附作用是有可能的 [14-18] 。所以光 合细菌是当今世界上最具发展前景的净化环境的生物制 剂。 3.3 光合细菌在种植业中的应用 PSB 大多具有固氮能力,能提高土壤的氮素水 平,并促进有害物质的转化。其次,PSB 可叶面喷 施,能改善植物营养,增强植物生理功能和抗病能 力,从而起到增产和改善品质的作用 [19] 。基于光合 细菌具有抗病防病作用,现有研究者将其开发为瓜 果等的保鲜剂。PSB 既是一种优质的生物肥料,又 能增强植物的抗病能力.光合细菌喷洒到苹果树、梨 树和葡萄树上,不仅果实鲜艳,而且坐果率和产量 大增,同时还提高了果实的糖分、维生素 B 和维生 素 C 的含量 [20-21] 。光合细菌作为生物肥料使用可以 提高番茄、黄瓜的产量,改善作物品质,提高作物 叶绿素、VC 的含量,降低蔬菜中亚硝酸盐的含量, 延长作物的保存期 [22] 。 3.4 光合细菌在畜养业中的应用 PSB 可作为畜禽饲料的添加剂,不仅能够提高产 品的产量,而且能够提高产品的质量 [23] ;PSB可处理畜 禽的粪尿,净化环境 [2] ;PSB中的荚膜红假单胞细胞壁 中含有的多糖类物质,是广谱的非特异性免疫激活剂, 能提高畜禽血清中免疫球蛋白的含量,增强畜禽对外来 病源侵扰的应答反应,起到防治病害的作用 [24] 。 3.5 光合细菌在新能源生产中的应用 能源问题已成为全球性问题,世界各国都在研究 开发新能源,氢作为一种理想而又无污染的新能源,日 益受到关注。生物制氢是开发新能源的一个方向,许多 PSB 在代谢过程中都能释放氢气,且具有产氢速率高、 产氢纯度高等特点 [25] 。PSB 只含有光合色素系统Ⅰ, 电子供体或氢供体是有机物或还原态硫化物,因此光合2 9 生命科学仪器 2007 第5卷/ 3月刊 作用不产生 O 2 ,故工艺简单。它可利用太阳能,降 解转化有机物或有机污染物生产氢,且副产物可进一 步开发为诸如生物可降解塑料等高附加值产品,不会 造成二次污染 [26] 。 3.6 光合细菌在其它方面的应用 医药保健方面,日本成功研制了具有延缓衰老的 作用的PSB饮料,而且这种饮料还能有效防止心脏病、 脑梗死、癌症等疾病的发生。国内,也已经研制出了多 种富硒PSB制剂,并申请了国家专利,通过试验表明,富 硒PSB制剂具有延缓衰老、抑制肿瘤、免疫调节等多种 功效 [27-29] 。刘继彪等 [30] 用PSB菌液发酵中药,制成了口服 液、冷冻干燥产品等中药制剂,该制剂能够纠正机体内环 境微量元素平衡紊乱,促使癌细胞向正常细胞转化并最终 全部恢复成正常细胞,对恶性肿瘤治疗有较显著的疗效, 并申请了国家专利。 随着人们认识到合成色素具有致癌性,天然色素 的开发已备受关注。PSB 菌体细胞含有丰富的菌绿素 和类胡萝卜素,这两类色素无毒,容易提取,是天 然色素的新资源,提取的色素可用于食品工业。 PSB 可以作为生物的开口饵料,广泛应用于水产 养殖,也可以作为饲料添加剂来增强生物的抗病性。 PSB 和微藻混合培养轮虫,可见轮虫增殖率明显高于藻 类、酵母单独培养轮虫的速度;PSB可提高丰年虫卵的 孵化率;用PSB培养的水蚤、轮虫,其氨基酸、蛋白质 的含量都明显提高 [31] 。 4 光合细菌的应用展望 在生产实践方面,自20 世纪70 年代以来,日本、 美国、德国、英国等广泛开展了光合细菌的研究开发,由 于PSB的安全无毒且其中的有效成分对超氧阴离子具有 良好的猝灭活性,近年来人们还利用其特性开发具有免 疫调节 [32] ,抗衰老,抗辐射等多种功能的医药、保 健品 [33] 。在理论研究方面,PSB 是实验模型的理想材 料,瑞典生物学家Huber. H. Michel以光合细菌为材料, 研究细菌细胞膜的光合作用反应中心三维结构而获得 1988年的诺贝尔奖。我国学者张纯喜等利用光合细菌对 光合作用的原初反应提出了新模型,并利用该模型对动 力学和定点突变结果给予了解释。 5 讨论 目前,大规模培养PSB 是制约PSB 应用的瓶颈问 题。多数PSB 是一种不放氧的厌氧菌,能进行光合作 用,多采用低密度培养。这种方法很容易染菌,且 菌液的浓度比较低,给PSB 的保存和运输很麻烦。高 密度培养PSB 是大规模生产PSB 的必然趋势,国内有 的实验室采用厌氧发酵罐进行高密度培养已取得成功, 但是生产成本比较高。我们实验室采用自制的玻璃反 应器对PSB 进行半开放式培养,已基本取得成功。这 种方法具有菌液浓度高,设备简单,生产周期短,生产 成本低等优点。 现在水产应用的PSB 多数是菌体和培养基的混合 物,产品中的培养基和代谢物有可能抑制水产养殖生 物,在养殖水体中投加 PSB,会加剧水体缺氧,PSB 的质量亟待提高。PSB 在处理有机废水时,废水的成 分很复杂,利用单一的菌种难以达到废水处理的要 求。因此,在菌种的分离和混合菌种处理方面还有待 于进一步的研究。 参考文献 [1] 何振平,王秀云,孙学文,等.光合细菌的研究进展(综述)(J).河 北职业技术师范学院学报, 2000,14(1):70-73. [2] 李彦芹,阚振荣,穆淑梅,等.光合细菌研究进展(J).河北大学 学报,2005,25(5):554-560. [3] 冯云,刘学迅.光合细菌的培养与应用(J).北京水产,1997,Z2: 26-27. [4] 杨绍斌,廉大海,祝莹,等.光合细菌简易富集培养技术及在 北方养鱼中的作用(J).水产养殖,2005,26(1):22-23. [5] 鄂春宇.塑料薄膜袋培养光合细菌技术(J).科学养鱼,2005, 8:68. [6] 赵引德,贾志伟.光合细菌饲料添加剂有规模化技术(J).中国 化工报,2005,2. [7] 梅志平,章宗涉.红螺菌(Rhodospirillumsp.)的生长及其饥饿 存活的研究(J).生态学报,2000,20(1):118-123. [8] 王桂文,周兴,李海鹰.光合细菌的应用现状与前景(J).广西 科学院学报,1995,11(1):16-20. 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The Culture and Application of the Photosynthetic Bacteria (PSB) Yuli Wei ,Ning Zou (Dept.oflifescience,LudongUniversity,Yantai,264025) Abstract Inthispaper,theculturalmethodsandapplicationofthePBSweresummarizedinaquiculture、wastewaterdisposal、 stockraising、agriculturenewenergysourcesandmedicalhealthBesides,theapplieddirectionofthePBSwasdiscussed. keywords photosyntheticbacteria(PSB);culture;application 新闻动态 Bruker AXS 发布革命性超高亮度 X 射线源 在 PITTCON 2007 上,Bruker AXS 展出了该公司一款用于结构生物学的超高亮度 X 射线源—— MICROSTAR ULTRA(TM)。在亮度方面,MICROSTAR ULTRA 可与当前许多第二代同步加速器的束 线流相媲美,是目前市场上可见到的强度最高的X射线源。由于采用了先进的电子光学以及具有革命 性的 Hypercool(TM)阳极冷却设计(正在申请专利),MICROSTAR ULTRA 所产生的 X 射线强度是无 与伦比的,可达到8x1010 X-rays/mm2/sec,远远高于任何传统的旋转阳极发生器。而这一性能方面的 显著提高,对于实验室结晶学研究的各个方面,包括从高通量晶体筛选到结构鉴定,均十分有益。同 时,即使是对于最小晶体的分析,MICROSTAR ULTRA 也是一款非常理想的工具。 尽管性能出色,但MICROSTAR ULTRA的体积却非常紧凑,同时对于维护的要求也很低。据Bruker AXS 有关人士介绍,该公司现有的 MICROSTAR 发生器升级到 MICROSTAR ULTRA 的费用也是用户可 接受的。
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