DB34T4487-2023水禽坦布苏病毒和星状病毒双重PCR检测技术规程.docx
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1、ICS 65.020.2034CCS B 31安徽省地方标准DB34/T 44872023水禽坦布苏病毒和星状病毒双重 PCR 检测技术规程Technical regulation for double PCR detection method of waterfowl Tembusu virusand Astrovirus2023 - 07 - 31 发布2023 - 08 - 31 实施安徽省市场监督管理局发 布DB34/T 44872023前言本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发
2、布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽农业大学提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。本文件起草单位:安徽农业大学、安徽省动物疫病预防与控制中心、滁州市动物疫病预防与控制中心、定远县畜牧兽医局、合肥华盟生物技术有限公司、安徽省皖西白鹅原种场有限公司。本文件主要起草人:王桂军、朱良强、许青华、李文来、郑举、范亚楠、何长生、解新迪、张云凯、段倩倩、伍唯、张新。IDB34/T 44872023水禽坦布苏病毒和星状病毒双重 PCR 检测技术规程1 范围本文件规定了水禽坦布苏病毒和星状病毒双重 PCR 检测方法的主要仪器设备、试剂、引物与标准品、操作步骤、结果判定、生物安全管理及废弃物处理。本文件适用于水
3、禽坦布苏病毒和星状病毒核酸检测。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB 19489 实验室 生物安全通用要求NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T 1948 兽医实验室生物安全要求通则SN/T 4835 实验室生物废弃物管理要求3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。坦布苏病毒 Tembusu virus坦布苏病毒(Tembusu virus,DTMUV
4、)属于黄病毒科(Flauiviri dae)、黄病毒属(Flaoivirus)。坦苏病毒病(Tembusu virus disease):是由坦布苏病毒引起的鸭的一种传染病,感染该病的种鸭通常会引起严重的产蛋率下隆、共济失调,卵巢出血、发炎的现象。星状病毒 Astrovirus星状病毒(Astroviruses, AstV)是一种圆形、无囊膜、单股正链 RNA 病毒,其直径为 2535 nm。因在电子显微镜下,病毒表面有 56 个突起,结构呈星形,故称之为星状病毒。星状病毒病,一种由星状病毒引起以内脏和关节痛风为主要症状的传染性疾病,可引起雏鹅腹泻性肠炎、肾炎及尿酸盐沉积等症状,是引发雏鹅痛风
5、的重要原因之一。4 主要仪器设备PCR 扩增仪。台式低温高速离心机:最大离心力 17000 g 以上。电泳仪:电压 10-300 V,电流 4-400 mA,功率最大 75 W。凝胶成像系统:紫外透射面积 2020-2126 cm,波长 302 nm。1DB34/T 44872023 冰箱:-20;-80。微波炉。 分析天平:精确度 0.001 g。 水浴锅。微量移液器:2.5 L、10 L、20 L、200 L、1000 L。 超净工作台。5 试 剂 RNA 抽提试剂:Trizol 或其他商品化 RNA 提取试剂。 氯仿、异丙醇、无水乙醇:为分析纯。 Reaction Buffer(5),
6、d NTP Mix,反转录酶,TaqDNA 聚合酶, RNase Inhibitor (20 U/L)、Random Hexamer primer。 1TAE 电泳缓冲液:配制方法见附录 A。 0.1M pH 7.4 PBS:配制方法见附录 A。 DNA 分子标准 1琼脂糖凝胶:配制方法见附录 A。 灭菌超纯水:符合 GB/T 6682 的规定,121、20 min,高压蒸汽灭菌。 ddH2O:双重蒸馏水。6 引物与标准品扩增星状病毒(GAsTV)的引物,扩增 DNA 片段大小为 300 bp。上游引物 : 5- AGA AGG TGC GGA AGA GTG GTA TGA-3下游引物 :
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