DB3301T+1119—2023+杂交兰种苗组培快繁技术规程.pdf
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1、 ICS 65.020.20 CCS B 05 3301 浙江省杭州市地方标准 DB3301/T 11192023 杂交兰种苗组培快繁技术规程 2023-02-28 发布 2023-03-28 实施 杭州市市场监督管理局 发 布 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由杭州市农业农村局提出、归口并组织实施。本文件起草单位:杭州市农业科学研究院。本文件主要起草人:李春楠、傅巧娟、张晓莹、赵福康、钱丽华、阮若昕、沈国正。杂交兰种苗组培快繁技术规程 1 范
2、围 本文件规定了杂交兰种苗组培扩繁的组培苗培养、组培苗驯化移栽、质量等级、包装、标签和运输的要求。本文件适用于杂交兰种苗组培扩繁至驯化栽培的生产过程。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 8321(所有部分)农药合理使用准则 NY/T 4962010 肥料合理使用准则 通则 NY/T 12762007 农药安全使用规范 总则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。杂交兰 Cymbidium hybrid 由国兰和大
3、花蕙兰种间杂交选育的一类兰花杂交种。类原球茎 protocorm-like bodies 兰花外植体诱导培养时,茎尖生长点组织逐渐膨大形成的、可发育成完整试管苗的扁形球状物。4 组培苗培养 外植体的选择和处理 4.1.1 母株的预处理 于春秋季,宜使用 50%多菌灵可湿性粉剂 800 倍液等广谱杀菌剂,对长势均匀、无病虫害且带有新生芽的健康母株进行灌根处理,每隔 3 天 1 次,连续处理 2 次3 次,放置于通风良好、清洁、干燥的环境,温度宜 15 25,光照宜 8000 lux12000 lux。4.1.2 外植体的选取 母株基质干透后,选择苞叶尚未展开、露出基质表面 2 cm6 cm 的新
4、生芽,从基部切断取下,置于无菌样品袋中带回实验室。4.1.3 外植体消毒 4.1.3.1 用洁净的软毛刷轻刷外植体表面,去除表面污垢,浸入洗洁精等清洁剂中震荡清洗 50 min80 min,再流水充分冲洗,置于超净工作台上。4.1.3.2 剥去 1 片2 片外苞叶,75%酒精浸泡消毒 90 s,无菌水清洗 2 次3 次。4.1.3.3 再剥去 1 片2 片外苞叶,浸入 10%NaClO 溶液,加入 2 滴3 滴吐温 20,处理 10 min,无菌水清洗 3 次4 次。4.1.3.4 浸入 0.1%HgCl2溶液,加入 2 滴3 滴吐温 20,根据芽的大小灭菌 15 min17 min,无菌水清
5、洗 5 次6 次。4.1.3.5 再剥去 1 片2 片外苞叶,将剥离的芽浸入 0.05%HgCl2溶液中消毒 60 s,无菌水清洗 5 次6 次。初代培养 4.2.1 接种 取消毒后的芽,剥离 0.3 cm0.5 cm 的茎尖组织接种于初代培养基诱导类原球茎。4.2.2 培养基 培养基配方宜为:1/2MS+1 mg/L 6-BA+1 mg/L IBA+1 g/L 活性炭+30 g/L 蔗糖+5 g/L 琼脂,pH 值 5.65.8。4.2.3 培养条件 光照 16 h/d,光照强度 500 lux1000 lux,温度(251);暗培养时温度为(201)。继代培养 4.3.1 转接 初代培养
6、60 d 后,将诱导形成的类原球茎分割为体积约 0.4 cm 0.4 cm 0.4 cm 的团块,接种于继代培养基上,每隔 60 d75 d 继代一次,分割时去除类原球茎上分化的芽和根,继代次数不宜超过 12 代。4.3.2 培养基 培养基配方宜为:Hyponex 1(花宝 1 号)+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+50 g/L 香蕉泥+2 g/L 水解酪蛋白+1 g/L 活性炭+30 g/L 蔗糖+5 g/L 琼脂,pH 值 5.65.8。4.3.3 培养条件 光照 16 h/d,光照强度 500 lux1000 lux,温度(251);暗培养时温度为(201)。分化培
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