TOSOH-HLC-723G7型全自动糖化血红蛋白分析仪标准操作规程.docx

TOSOH HLC-723G7型全自动糖化血红蛋白分析仪
标准操作规程

1． 检验原理
基于高效液相色谱分析法原理，通过阳离子交换柱利用电位差将血红蛋白组分别离。利用3种不同浓度洗脱液使包括血红蛋白Ac1在内的多种血红蛋白进行梯度别离，别离成6个局部。经检测器检测别离后的各血红蛋白组分的吸光度，以百分率形式表示出各血红蛋白的组分结果与色谱图,传送打印。

2． 标本
2.1 标本的准备
标本的采集和抗凝
.1 全血模式：抽取静脉血，用EDTA抗凝，当用同一个试管进行 HbA1c检测和葡萄糖等检测时，需用EDTA和NaF抗凝。全血置4℃可以存放一周。
.2 稀释血模式：采集静脉血或末梢血，用去离子水或溶血素/清洗液进行稀释。稀释血需立刻检测。
2.2 标本的容器
2.2.1 HLC-723G7分析仪上既可使用原始样本管，也可以使用样品杯，在样本管架上的放置顺序是随机的。
2.2.2 最少样本量要求：原始样本管中全血为1ml；样品杯中全血为50ml ；样本杯中的稀释血为稀释后400ml〔建议患者样本的稀释比例以1:150为佳〕。

全血: 50 mL
稀释液: 400 mL
1ml全血

2.2.3 原始样本管和样品杯的放置
2.2.3.1原始管：分析仪可以从不同尺寸的原始采血管中通过盖帽穿刺的方式直接吸取样本。尺寸为φ15×75mm和φ15×100mm的试管可以直接放置在试管架上。尺寸为φ12～φ14mm的原始管在使用适配器后也可放置。在一个标准附件中附带有φ13的适配器。φ12和φ14mm的试管适配器编号请见“消耗品〞。
2.2.3.2 样品杯：如果只有少量样品或红血球压积较低时，需要进行预稀释处理。将稀释后的样本颜色与稀释后的质控品或校准品的颜色作比照可以控制稀释处理的尺度。

3． 仪器与试剂
3.1 TOSOH HLC-723G7型全自动糖化血红蛋白分析仪
3.2 消耗品的种类、规格和储存条件

消耗品名称
规格
储存要求
TSKgel G7 HSi
1个/盒
4-15℃保存
G7洗脱缓冲液No.1(S)
800ml/包
4-25℃保存，开封后3月内用完
G7洗脱缓冲液No.2(S)
800ml/包
4-25℃保存，开封后3月内用完
G7洗脱缓冲液No.3(S)
800ml/包
4-25℃保存，开封后3月内用完
溶血素/清洗液〔L〕
2000ml/瓶
4-25℃保存，开封后3月内用完
HbA1c校准品〔定值 1,2〕
4ml×5/盒
2 -8℃保存，开封后1周内用完
HbA1c质控品〔低值、高值〕
0.5ml×4/盒
2 -8℃保存，开封后1周内用完
过滤器
5片/包
常温枯燥
打印纸
40m×60mm

3.3层析柱的准备和更换
3.3.1 在下述情况下需要置换层析柱：
3.3.1.1 当层析柱计数到达1500个检测。
3.3.1.2 当超过初始压力2MPa，经更换过滤膜得不到改善时。
3.3.1.3 当色谱峰〔特别是SA1c峰，阴影指示〕变得平坦或分解2局部时。
3.3.2 步骤：
3.3.2.1 等待检测结束STAND-BY显现，或按STOP键使检测仪恢复到STAND-BY状态。
3.3.2.2 翻开显示屏下的门，移开插销，翻开层析柱炉。
3.3.2.3 取走旧层析柱。
3.3.2.4 确认主屏〔第二屏〕上SV1键已翻开〔O〕。
3.3.2.5 将实验室用抹布放在层析柱导管的过滤膜侧〔右边〕。
3.3.2.6 按PUMP键启动泵。
3.3.2.7 去掉层析柱上防护塞，保存好以备后用〔如长时间储存〕。
3.3.2.8 先将新层析柱与泵侧〔入口〕相连，留意标签上的箭图表示的液流方向，指示缓冲液从右到左流入层析柱。当缓冲液从层析柱出口流出，按PUMP键使液流停止。
3.3.2.9 将层析柱出口与检测器一侧〔左边〕相连，按PUMP键启动泵。
3.3.2.10确认泵压力在6MPa或以上，并且柱连接部无渗漏。
3.3.2.11将层析柱放置于铝盒区，关闭层析柱炉盖，锁上插销。
3.3.2.12按PUMP键停止泵运行。
3.4 过滤器的准备和更换
3.4.1 在下述情况下需要置换过滤器：
3.4.1.1 当过滤器计数到达400个注入。
3.4.1.2 当使用该过滤器是，泵压力超过初始压力2MPa时。
3.4.2 步骤：
3.4.2.1 等待检测结束STAND-BY显现，或按STOP键使检测仪恢复到STAND-BY状态。
3.4.2.2 翻开显示屏下的门
3.4.2.3 确认主屏〔第二屏〕上SV1键已翻开〔O〕
3.4.2.4 取走过滤器出口〔上部〕导管。
3.4.2.5 逆时针方向旋转使过滤器固定装置松开，直接拔出方式来移动过滤器固定物
3.4.2.6 轻压固定器顶端取出旧过滤元件。小心的将新元件安放在过滤器外表。灰色面朝出口〔朝上〕。
3.4.2.7 用手拧紧过滤器固定装置上部，直到拧不动为止。
3.4.2.8 将实验室用抹布放在过滤器固定装置的出口并按PUMP键以驱除元件内大气泡。核实无气泡从出口侧出来，按PUMP键停止泵运行。
3.4.2.9 连接出口侧导管。
3.4.2.10再次按PUMP键启动洗脱液运送。确认泵压力在6MPa或以上，并且过滤室或导管连接部无渗漏，如发现渗漏，用力拧紧过滤器固定装置。
3.5 试剂的准备和更换
3.5.1 当试剂剩余不多时，请尽早更换缓冲液、溶血素/清洗液。剩余缓冲液的体积在主屏〔第二屏幕〕通过图例显示，在主屏〔第一屏幕〕上触压下行键即可进入第二主屏。.
3.5.2 步骤：
3.5.2.1 等待检测结束STAND-BY显现，或按STOP键使检测仪恢复到STAND-BY状态。
3.5.2.2 用新试剂替换缓冲液或溶血/清洗液。
3.5.2.3 使试剂进样管插入包装箱的底部。
3.5.2.4 当使用铝盒包装的缓冲液时，采用密封膜以保证瓶盖紧闭。
3.5.2.5 当使用瓶装试剂时，须拧紧瓶盖。但不可用paraffin膜或其它密封物来完全密封试剂瓶。完全密封试剂瓶将导致试剂吸取不畅。
3.5.2.6 在维护屏幕按REAGENT CHANGE键
3.5.2.7 相对应的试剂更换键〔D/W〕变亮。〔如：当缓冲液No.1 和No.2已更换，键 #1、 #2变亮〕
3.5.2.8 按CHANGE键。确认信息将出现。如果全好，按OK键。
3.5.2.9 分析仪流路中的试剂将自动被新试剂替换。
3.5.2.10当CHANGE…出现，操作既完成。确认试剂更换后图例回复到100%。
3.5.2.11再次开机时仪器自动进行缓冲液No.1 、No.2灌注，并使流路中的缓冲液得以更新，然后泵运行与检测开始。
3.5.3 如果长时间停机，需要进行手动试剂灌注，步骤如下：
3.5.3.1 等待检测结束STAND-BY显现，或按STOP键使检测仪恢复到STAND-BY状态。
3.5.3.2 按维护〔MAINTE〕屏上的试剂更换键〔REAGENT CHANGE〕。
3.5.3.3 将进行试剂灌注的键变亮
3.5.3.4 按灌注〔PRIME〕键，确认信息将出现。如果全好，按OK键。
3.5.3.5 分析仪流路中的试剂将自动被更新。
3.5.3.6 当PRIMING…出现，操作既完成。
3.6 打印纸的准备
3.6.1 拉开打印机盖〔上盖〕使其靠后。
3.6.2 往下推动纸支持杆至最前面，使剩余纸卷拢。
3.6.3 拉起纸卷，取出卷轴。
3.6.4 将卷轴插入到新纸卷中，注意方向。
3.6.5 将纸支持杆回复至最后面并将纸插入到打印机中。纸将自动传送。因为支持杆安装有2档，确认回复至最后面档。
3.6.6 核实纸是否有扭曲。如存在，推动纸支持杆至最前面，调整好纸张，使支持杆复原。

4． 校准
4.1 分析仪是用带有不同HbA1c值的LEVEL 1和LEVEL 2校准液来校准的。使用TOSOH HbA1c Calibrator Set〔TOSOH HbA1c全套校准品〕来校准。这套校准品是遵循日本糖尿病协会糖化血红蛋白标准程序根底上建立的二级标准品。不能使用其他的校准品。
4.2 确定在以下情况下进行校准。当需要改变化验条件和相关条件时，可以按照需要不断地进行校准。
每星期一次：如果每天检测100个以内的样品。
每天一次：如果在一台仪器上每天要检测100个以上的样品。
如果质控结果超出了范围
在替换层析柱后
在分析仪维护后
4.3 每瓶校准品加4ml去离子水后静置5-10分钟，轻晃使之溶解，充份混匀并贴上稀释日期的标签，4℃冰箱密封贮藏，7天之内有效，使用前不必再稀释。使用时，倒出>800ul的校准液，放入样本架。
4.4 校准操作
按主屏幕中的MENU键进入第二屏，再按下PARAMER键进入参数设置界面①点击CALIB-1。②按右边数字界面输入Calibrator 1 的校准值。③左边CALIB-1值被修改。④同样方法输入CALIB-2的值。按EXIT键退出，进入主屏幕。
把Level1与Level2校准液放置在第一个样品架的1号和2号位置的样品杯中。
4.4.3 按主屏幕上的CALIB〔校准〕键，使之高亮。按下START键，校准即开始。
4.5 校准完成后，仪器自动进入样品分析程序。校准出现错误时，仪器将停止进入样品分析程序，并返回，需重新设置校准。

5． 操作步骤
5.1 开机
　将电源开关按向[｜]接通电源后，翻开了主电源。
　检查软盘驱动器中是否没有插其他软盘，除了数据储存盘外，不要插入其他软盘。
　按下显示屏右上方的POWER键，键上绿色的LED指示灯就会亮起。
　仪器会自动依次启动检查采样单元，泵清洗，灌注缓冲洗脱液，并进行取样管路和稀释管路的首次冲洗。开始WARMING UP(预温)
　仪器预热完成，将进入STAND-BY状态，可以进行样本分析了。
5.2 常规检测
在翻开电源键后，第一个出现的屏幕是主屏幕〔第一屏幕〕。在显示屏最上方会显示出HbA1c/STD ANALYSIS〔HbA1c/标准 分析〕。
在分析进行时，主屏幕会一直保持显示信息。当前的操作状态会显示在显示屏的左上方。且出现以下状态指示。
WARMING UP〔预温〕
STAND-BY〔待机〕
ANALYSIS〔分析〕
WASH〔冲洗〕
BUFF PRIME〔缓冲液灌注〕
PUMP CLEAN〔清洗泵〕
在预温状态下的标本检测
.1在进行WARNING UP〔升温〕操作时，把样品放置在标本架上，金属终止标志放在最后一个样本架的末端，然后放入进样轨道，并按下START〔开始〕键。
.2 等待WARNING UP〔预温〕结束。
.3 系统会自动进入ANALYSIS〔分析〕状态,开始分析标本。
在待机状态下的标本检测
.1 在完成预温，分析或冲洗操作后，分析仪会进入待机状态。在这种状态下，泵会停止运行，不再消耗试剂。
.2 在此状态下可以把样品放置在标本架上，金属终止标志放在最后一个样本架的末端，然后放入进样轨道，按下START〔开始〕键，系统会自动进入ANALYSIS〔分析〕状态, 开始分析标本。
在分析状态下的标本检测
.1 确定前批样本还没检测完毕，并将前批最后一个样本架末端的金属终止标志拔下。 把增测的样品放置在标本架上，金属终止标志放在最后一个样本架的末端，然后放入进样轨道。
.3 仪器会将增加的样本分析完毕。
在冲洗状态下的标本检测
等待仪器冲洗完毕，进入待机状态，后开始检测样本。
在缓冲液灌注状态下的标本检测
.1 当首次翻开电源时，分析器会自动吸取并输送2号和1号洗脱液各5ml，以便用新的洗脱液来替换管道中原有的〔这个操作就叫PRIME〕。不需替换3号洗脱液，这是因为3号洗脱液的含盐浓度很高，对检测结果没有影响。
.2 另外，在MAINTE-REAGENT CHANGE〔维护--试剂替换〕屏幕中，当在进行灌注或替换缓冲液时，显示屏上会显示BUFF PRIME〔灌注缓冲液〕状态。
.3 等待仪器进入WARMING UP〔预温〕或STAND-BY〔待机〕状态时，可以把样品放置在标本架上，金属终止标志放在最后一个样本架的末端，然后放入进样轨道，按下START〔开始〕键，系统会自动进入ANALYSIS〔分析〕状态, 开始分析标本。
在清洗泵状态下的标本检测
.1 为了除去泵活塞上的杂质或盐沉淀，在翻开电源后，活塞密封装置的反面就会被溶血/清洗液〔5ml〕自动冲洗，且冲洗完全。
.2 等待仪器进入WARMING UP〔预温〕或STAND-BY〔待机〕状态时，可以把样品放置在标本架上，金属终止标志放在最后一个样本架的末端，然后放入进样轨道，按下START〔开始〕键，系统会自动进入ANALYSIS〔分析〕状态, 开始分析标本。
5.3 急诊样品检测〔STAT〕
如果在ANALYSIS〔分析〕时需要一些急诊检测的样品，把样品放在试管槽中间的STAT放样处。但记住STAT样品在待机，冲洗，升温状态时是不能进行分析的。
确定已经没有STAT样品处于分析状态后，才能翻开STAT盖子。
先拿走放样处原有的样品容器，然后放入需要检测的样品。
在主屏幕上按下STAT键
出现STAT〔急诊样品检测〕屏幕
按照需要记录一个样品ID号。
选择容器的类型〔如果分析的是全血，不需要按任何键。如果分析的是稀释后的样品，那么按下CUP键。此键在按下后会亮起〕和稀释度，然后平安地关闭STAT〔预先样品检测〕放样处的盖子。
按下START〔开始〕键
当STAT〔急诊样品检测〕屏幕的底部显示SCHEDULED时，表示登记完成。按下EXIT〔退出〕键。当显示回到主屏幕时，STAT键会亮起。
在当前的检测结束后，就会马上进行STAT〔预先样品检测〕的分析。
在取样结束后，STAT键会恢复到通常状态〔即指示灯变暗〕。翻开前盖，取走样品。
5.4 关机
分析结束，仪器自动进入WASH〔冲洗〕状态，完成冲洗后，仪器进入STAND-BY〔待机〕状态如果1小时内键区或触摸屏上没有任何指令输入，电源会自动关闭。
待机时间可以通过PARAMETER(参数)界面中的OFF TIME(关机时间)来设定。
一般情况不进行紧急关机操作，如果必须，在待机状态将主电源开关按向[O]一侧。

6． 质控
6.1 配合校准品使用质控品TOSOH HbA1c Control His，来控制每天的测试结果。
6.2 每瓶质控品加0.5ml去离子水后静置30分钟，轻晃使之溶解，充份混匀并贴上稀释日期的标签，2℃-8℃冰箱密封贮藏，7天之内有效。
6.3 分析时以1:50进行稀释〔10ul稀释液＋500ul去离子水〕，以样本模式进行检测。检测结果在靶值范围内，表示仪器状态良好，可以进行检测。

7． 参考范围及临床意义
7.1 HbA1C是血糖监测的重要标准, 测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。
结果
临床意义

4%~6%
正常值
＜6%：
控制偏低，患者容易出现低血糖。

6%~7%：
控制理想。

7%~8%：
可以接受。

8%~9%：
控制不好

＞9%：
控制很差，慢性并发症发生开展的危险因素。

7.2 HbA1C增高还出现在用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人。降低可能是溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。
7.3 作为轻症、Ⅱ型、“隐性〞糖尿病的早期诊断指标。
7.4 可以列为糖尿病的普查和健康检查的工程。
7.5 对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿、畸形胎、死胎，以及急、慢性并发症发生开展的监督具有重要意义。
7.6 对于病因尚未明确的昏迷或正在输注葡萄糖的抢救者，急查糖化血红蛋白具有鉴别诊断的价值。

8． 干扰与潜在的变异
8.1 抗干扰能力：
葡萄糖≤1000mg/dl，氰酸≤50mg/dl，乙醛≤50mg/dl，游离胆红素≤180mg/dl，结合胆红素≤200mg/dl，乳糜≤2860浊度单位，阿司匹林≤50mg/dl，抗坏血酸≤50mg/dl，尿酸≤50mg/dl时，检测无干扰。
8.2 血液病患者尤其是溶血性贫血的患者，其红细胞寿命缩短，导致GHb形成的时间也相对应缩短，由此测定的结果就会受到影响，所以当某些根底疾病存在继发性溶血现象，往往使GHb测得值偏低，如肝硬化、脾肿大、糖尿病性肾病患者的EPO治疗以及极度贫血患者的输血治疗后等。肾病患者体内过多的尿素生成，其代谢产物结合于Hb的α链及β链N端的氨基，形成氨基甲酰Hb(carbamyl Hb),主要别离出HbA1a+b,HbA1c及HbAo,此时测得的GHb偏高〔HPLC法〕，而慢性酒精中毒患者因生成乙酰醛的结合物，也会引起结果偏高。
8.3 血红蛋白珠蛋白链结构异常和合成不均匀会导致异常血红蛋白的产生。虽然异常血红蛋白的存在未必有一定的临床表现，但HbS、HbC、HbE的突变点假设分别发生在β链的6号、26号位，在用HPLC法测定HbA1c时会有一定的干扰,这也应注意。

9． 维护与保养
9.1 日常保养
用布沾取中性清洁液并拧干后擦拭金属部件外表的污垢。当污垢严重时，用布沾取乙醇擦拭。
用沾取乙醇的布擦拭标本传送架、显示屏和键盘上的污物。
9.2 检查清单:
下表提供的核查清单是每天在分析开始前〔按START键〕需要进行的检查程序。
序列
过程
检查
参照
1
检查显示屏定标键
定标
3.6
2
检查计数->更换
层析柱
5.6
3
检查计数->更换
滤过膜
5.7
4
检查剩余体积->更换
洗脱液
5.3
5
检查剩余体积->更换
溶血素/清洗液
5.3
6
检查剩余空间->更换和初始化
软盘
4.7
7
检查剩余量->更换
打印纸
5.8
8
检查体积->按照要求处理
废液瓶

9
检查流路->按要求拧紧
从管中泄漏

开始分析之前〔START 命令〕务必检查：
序列
检查
时间表
参照
1
层析柱
1500测试
5.6
2
过滤膜
400测试
5.7
3
吸引过滤器
6个月
5.9
4
FDD清洗装置
1个月

5
取样针
弯曲/损坏
5.10
6
针O-型环
1年
5.11
7
活塞密封圈
1年
5.12

*活塞密封圈更换维修人员完成

以下需要维修人员检查

列
保养时间表
保养检查
1
1年
注射阀马达密封更换
2
1年
自动进样阀马达密封更换
3
1年
进样环更换
4
1年
泵监测阀清洁
5
1年
泵驱动单元上润滑油
6
1年
检测室清洁
7
1年
注射器Teflon头更换
8
5年或更长
备份电池〔2节〕更换
9
不要求更换
检测器LED灯源更换

10.参考文献
TOSOH HLC-723G7型全自动糖化血红蛋白分析仪操作手册

内容总结

〔1〕TOSOH HLC-723G7型全自动糖化血红蛋白分析仪
标准操作规程

检验原理
基于高效液相色谱分析法原理，通过阳离子交换柱利用电位差将血红蛋白组分别离
〔2〕使用TOSOH HbA1c Calibrator Set〔TOSOH HbA1c全套校准品〕来校准
〔3〕4.4.2 把Level1与Level2校准液放置在第一个样品架的1号和2号位置的样品杯中

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