学术讨论—胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞).docx
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1、胞浆蛋白/核蛋白/膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)(Catalog #DBI-1021 ; DBI-1022; Store kit at 4)描述:本试剂盒提供了蛋白抽提试剂A,蛋白抽提抽提试剂B,蛋白抽提试剂C三种具有独特组分的缓冲液。所有试剂采用PIPES缓冲系统。通过实验,可以得到:细胞胞浆蛋白(其中含有含有可溶性的骨架蛋白);细胞膜蛋白(其中包含细胞质膜蛋白和细胞器膜蛋白);细胞核蛋白;其最后剩余的沉淀为难溶性的胞质骨架和纤维蛋白。提取方法简单,可靠,快速。获得的各种部分蛋白纯度高,可用于PAGE电泳、Western Blot、免疫共沉淀、EMSA等后续研究。该试剂盒所得到的蛋白溶液适合用
2、Bradeford法(DBI生物产品:DBI-1045,1046)蛋白定量和BCA方法(DBI生物产品:DBI-1047,1048)进行定量。II 试剂盒组分:III.蛋白质抽提步骤:A. 注意事项和试剂准备: 打开试剂盒后,于4度保存蛋白抽提液;于-20度保存蛋白酶抑制剂,样品缓冲液(6)。 使用前, 加10ul的蛋白酶抑制剂于1ml蛋白抽提试剂A中,使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix A);加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂B中,使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix B);加2ul的蛋白酶
3、抑制剂于200ul蛋白抽提试剂C中,使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix C);试剂盒组分DBI-1021 DBI-1022 包装50 次100 次颜色蛋白抽提试剂A蛋白抽提试剂A-1蛋白抽提试剂B蛋白抽提试剂C混合型蛋白酶抑制剂(100)SDS-PAGE 样品缓冲液(6)50ml500ul50ml25ml1支5支100ml1000ul100ml50ml1支10支棕色棕色棕色棕色棕色绿色 在试验过程中确保抽提混合物始终保存在在碎冰中。 需要自己提供的试剂:90% acetone,PBS抽提所使用的蛋白抽提试剂使用量抽提步骤. 准备细胞1. 将培养好的
4、细胞用预冷的PBS 清洗2-3 次。2. 选择合适的方法进行悬浮细胞和贴壁细胞的蛋白抽提:如果样品为悬浮细胞;蛋白抽提试剂的使用量依赖于培养细胞的湿重或细胞数量。a) 转移悬浮细胞培养液到一个预先称重的离心管中,简单的离心。b) 弃去上清培养基,称量其重量,计算出悬浮细胞的重量。c) 按照实验II 进行下面的实验。如果样品为单层贴壁细胞: 蛋白抽提试剂的使用量取决于培养细胞的器皿大小或细胞数量。a) 按照实验III 进行下面实验。. 悬浮细胞蛋白抽提实验步骤1. 吸取取5 倍体积细胞湿重的蛋白抽提试剂A ,加入到已经清洗好的细胞沉淀中。用移液器小心吹打,使细胞悬浮。2. 冰上孵育细胞,并且轻微
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