(高清版)DB41_T 2171-2021牛妊娠诊断技术规程.pdf
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1、 ICS 65.020.30 CCS B 43 41 河南省地方标准 DB41/T 21712021 牛妊娠诊断技术规程 2021-10-19 发布 2022-01-18 实施 河南省市场监督管理局 发 布 目次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 直肠检查.1 5 超声波诊断.2 6 妊娠相关糖蛋白检测.2 附录 A(规范性)直肠检查法不同妊娠时期牛子宫变化示例.5 附录 B(规范性)牛配后各时期 B 型超声波子宫切面示例.7 附录 C(规范性)溶液配制方法和要求.9 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起
2、草规则的规定起草。本文件由河南省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位:河南省奶牛生产性能测定中心、河南省种牛遗传性能测定中心、河南农业大学、河南省兽药饲料监察所。本文件主要起草人:张震、王新庄、闫跃飞、闫磊、汪聪勇、苏银池、林红新、薛永康、许杨、任小丽、刘欢、李静茹、皇超英、郑立、李秋平、白雪利、高娜、黄辉、岳婷婷、巩丹、侯玉芳、李娜、卜秋月。牛妊娠诊断技术规程 1 范围 本文件规定了直肠检查、超声波诊断、妊娠相关糖蛋白(pregnancy-associated glycoproteins,PAGs)检测等牛妊娠诊断方法的操作技术规程。本文件适用于牛妊娠诊断。2 规范性引用文件 下列文件中的内
3、容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 10152 B型超声诊断设备 NY/T 3471 畜禽血液收集技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 妊娠诊断 采用临床或实验室的方法检查配种一定时间内的母牛是否妊娠、妊娠时间及胎儿发育情况的方法。3.2 孕囊 在胚胎发育的最初几周内围绕胚胎充满液体的结构,也是牛妊娠过程中通过超声发现妊娠的第一个结构。3.3 妊娠相关糖蛋白 母牛妊娠后胎盘的滋养层双核细胞与子宫上皮细胞融合后释放的一种蛋白。一般最早
4、可在妊娠 15 d21 d的怀孕母牛血液中检测到,产后90 d后浓度降至最低。4 直肠检查 动物准备 4.1 动物使用颈夹或保定架保定配种45 d后的母牛。人员准备 4.2 操作人员检查手指甲并将手指甲剪短磨平,穿戴已消毒的工作服,操作手臂佩戴一次性长臂手套,并在手套外涂抹润滑剂。排空蓄粪4.3 操作人员直检手手指并拢,以4560角缓慢进入直肠,排空蓄粪。确定子宫颈位置 4.4 操作人员手臂前伸,摸到子宫体,顺子宫体回撤手臂,确定子宫位置。妊娠诊断 4.5 操作人员经直肠触摸探查母牛两侧子宫角是否存在大小和质地差异,判断是否存在孕囊和子叶,并跟踪大小变化情况,从而确定母牛是否妊娠。妊娠期牛子宫
5、变化应符合附录A的规定。检查结束 4.6 检查结束后,将使用过的手套和工作服进行处置,同时记录检查结果。5 超声波诊断 动物准备 5.1 使用颈夹或保定架保定配种32 d60 d的母牛。人员准备 5.2 按4.2。排空蓄粪 5.3 按4.3。开机自检 5.4 选用符合GB 10152的B超仪。打开B超仪开关,待仪器设备自检正常后,设置或调整设备相关参数,按设备要求进行预热,根据B超仪屏幕影像质量调节灰度、对比度、增益度及近场、远场信号强度。获取影像 5.5 在B超仪探头部位涂抹相应耦合剂,将B超探头缓慢送入直肠30 cm50 cm处,深度可根据牛体型和妊娠状况进行适当调整,紧贴子宫不断缓慢移动
6、调整探查角度,直至清晰影像出现。妊娠诊断 5.6 出现一个或多个规则的孕囊(黑色暗区)或者胎儿骨骼影像即可确认为妊娠。妊娠期牛子宫内孕囊及胎儿变化应符合附录B的规定。检查结束 5.7 检查结束后,将使用过的手套和工作服进行处置,擦拭B超仪探头并使用75%的酒精进行消毒,同时记录检查结果。6 妊娠相关糖蛋白检测 样品准备6.1 采集配种28 d后牛只血液并分离血清。采样、运输过程应符合NY/T 3471的相关要求。实验前准备 6.2 实验室温度调节设置18 25,并准备恒温箱、混匀器、酶标仪等仪器设备。检测程序 6.3 6.3.1 试剂配制 配制方法按附录C规定。6.3.2 包被 用包被液将牛P
7、AGs单克隆抗体稀释至工作浓度,加入酶标板孔中,每孔100 L(每孔抗体含量约35 ng),在2 8 放置12 h。6.3.3 洗涤 弃去孔内包被液,用洗涤液洗板3次,每次300 L/孔,洗涤完毕后在吸水纸上拍干。6.3.4 封闭 每孔加入200L的封闭液,置37 孵育1 h。按6.3.3规定操作。6.3.5 加入待检样品 每孔加入50L样品缓冲液。分别将100L标准品(AF)和样品加入到相应孔中,加样后轻轻震荡混匀。覆膜,37 孵育60 min或室温(18 25)孵育90 min。6.3.6 洗板 孵育后洗板,甩尽酶标板内液体,每孔加300L洗涤液洗板,并在吸水纸上拍干,反复洗涤5次。6.3
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