DB32_T 3356-2018南京椴组培育苗技术规程02.pdf
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1、ICS 65.020.40B61备案号:58093-2018DB32江苏省地方标准DB 32/T 33562018南京椴组培育苗技术规程Technical regulation for propagation of Tilia miqueliana2018-2-10 发布2018-3-10 实施江苏省质量技术监督局发 布DB32/T 33562018I前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由江苏省中国科学院植物研究所提出并归口。本标准起草单位:江苏省中国科学院植物研究所。本标准主要起草人:汤诗杰、束晓春、李乃伟、王欢利、王仲伟。DB32/T 335620181南京椴组培
2、育苗技术规程1范围本标准规定了南京椴组织培养技术中外植体选择与处理、腋芽诱导、继代增殖、生根培养、炼苗、移栽和移栽后管理的技术要求。本标准适用于南京椴的组织培养快速繁殖。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 6001 育苗技术规程3外植体选择与处理3.1外植体母株选择选择生长健壮且无病虫害的母株。宜选择1年生苗龄的实生容器苗,不宜选择其他苗龄,忌用地栽苗。3.2外植体母株管理于3月份,将腋芽尚未萌发的南京椴容器苗,移至玻璃温室培养。使用培养架将容器苗底部隔
3、离地面50 cm。每隔10 d,喷洒多菌灵1次,使用40%多菌灵可湿性粉剂500800倍液。切忌将容器苗地表放置,以免根系扎入带菌土壤中生长。3.3外植体选择外植体母株枝条未木质化之前,剪下枝条,去除叶片,保留1 cm长叶柄,作为外植体。主干基部保留3-4个饱满的腋芽。在8月初、9月初与10月初,可重复3次外植体取样。3.4外植体消毒先用毛刷对枝条表面刷洗,并通过清水冲洗干净。再用84消毒液(稀释50倍),在摇床上振荡消毒15 min-20min,并通过流水冲洗20 min-30 min。于无菌操作台上,用75乙醇消毒50 s-60 s,然后立即倒入0.1的升汞消毒10 min,最后无菌水洗涤
4、4次,每次振荡3 min-5min。3.5外植体分段将消毒后的枝条,切割成0.6 cm长的茎段,每段带1个腋芽。4腋芽诱导DB32/T 335620182将茎段接种于诱导培养基中进行初代诱导,培养温度为 25,首先在黑暗中培养 24 小时,然后光照培养 20 d:光照时间为 10-16 小时/天,光照强度为 2000 lx,所述初代诱导培养基为 WPM 培养基,添加的激素水平为:6-BA 0.2mg/L+KT 0.1 mg/L+IBA 0.04mg/L+GA30.2mg/L,诱导培养基 PH 为 5.8。5继代增殖初代培养 20 d 后,将 10 cm 高的初代苗切割为 1 cm 茎段,每茎段
5、带 1 腋芽,切除叶片,接入继代增殖培养基,进行不定芽诱导,继代培养 20 d,培养温度为 25,光照时间为 10-16 小时/天,光照强度为 2000lx,继代增殖培养基为 WPM 培养基,并添加反式玉米素 0.2mg/L+KT 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L,培养基 PH 为 5.8。6生根培养继代培养 40 d 后,南京椴无根试管苗进行切分,每株均有 2 个不定芽,接入生根培养基中进行生根培养 20 d,培养温度为 25,光照时间为 10-16 小时/天,光照强度为 2000 Lx,生根培养基 1/2MS培养基,并添加 IBA3.0 mg/L+NAA1.0 mg/L,培养基 PH
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