DB32_T 3356-2018南京椴组培育苗技术规程02.pdf

ICS 65.020.40B61备案号：58093-2018DB32江苏省地方标准DB 32/T 33562018南京椴组培育苗技术规程Technical regulation for propagation of Tilia miqueliana2018-2-10 发布2018-3-10 实施江苏省质量技术监督局发 布DB32/T 33562018I前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由江苏省中国科学院植物研究所提出并归口。本标准起草单位：江苏省中国科学院植物研究所。本标准主要起草人：汤诗杰、束晓春、李乃伟、王欢利、王仲伟。DB32/T 335620181南京椴组培育苗技术规程1范围本标准规定了南京椴组织培养技术中外植体选择与处理、腋芽诱导、继代增殖、生根培养、炼苗、移栽和移栽后管理的技术要求。本标准适用于南京椴的组织培养快速繁殖。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 6001 育苗技术规程3外植体选择与处理3.1外植体母株选择选择生长健壮且无病虫害的母株。宜选择1年生苗龄的实生容器苗，不宜选择其他苗龄，忌用地栽苗。3.2外植体母株管理于3月份，将腋芽尚未萌发的南京椴容器苗，移至玻璃温室培养。使用培养架将容器苗底部隔离地面50 cm。每隔10 d，喷洒多菌灵1次，使用40%多菌灵可湿性粉剂500800倍液。切忌将容器苗地表放置，以免根系扎入带菌土壤中生长。3.3外植体选择外植体母株枝条未木质化之前，剪下枝条，去除叶片，保留1 cm长叶柄，作为外植体。主干基部保留3-4个饱满的腋芽。在8月初、9月初与10月初，可重复3次外植体取样。3.4外植体消毒先用毛刷对枝条表面刷洗，并通过清水冲洗干净。再用84消毒液（稀释50倍），在摇床上振荡消毒15 min-20min，并通过流水冲洗20 min-30 min。于无菌操作台上，用75乙醇消毒50 s-60 s，然后立即倒入0.1的升汞消毒10 min，最后无菌水洗涤4次，每次振荡3 min-5min。3.5外植体分段将消毒后的枝条，切割成0.6 cm长的茎段，每段带1个腋芽。4腋芽诱导DB32/T 335620182将茎段接种于诱导培养基中进行初代诱导，培养温度为 25，首先在黑暗中培养 24 小时，然后光照培养 20 d：光照时间为 10-16 小时/天，光照强度为 2000 lx，所述初代诱导培养基为 WPM 培养基，添加的激素水平为：6-BA 0.2mg/L+KT 0.1 mg/L+IBA 0.04mg/L+GA30.2mg/L，诱导培养基 PH 为 5.8。5继代增殖初代培养 20 d 后，将 10 cm 高的初代苗切割为 1 cm 茎段，每茎段带 1 腋芽，切除叶片，接入继代增殖培养基，进行不定芽诱导，继代培养 20 d，培养温度为 25，光照时间为 10-16 小时/天，光照强度为 2000lx，继代增殖培养基为 WPM 培养基，并添加反式玉米素 0.2mg/L+KT 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L，培养基 PH 为 5.8。6生根培养继代培养 40 d 后，南京椴无根试管苗进行切分，每株均有 2 个不定芽，接入生根培养基中进行生根培养 20 d，培养温度为 25，光照时间为 10-16 小时/天，光照强度为 2000 Lx，生根培养基 1/2MS培养基，并添加 IBA3.0 mg/L+NAA1.0 mg/L，培养基 PH 为 5.8。7炼苗培养当生根苗的不定根长至 4 cm 左右，生根数在 4-8 根时，将组培瓶从培养室取出，不打开瓶盖，在温室或荫棚驯化 3 d，环境遮光度为 60%。驯化后打开瓶盖，继续驯化 2 d 后从瓶中取出组培苗，洗净根部培养基后用 40%多菌灵可湿性粉剂（500800）倍液浸泡 20 min。8移栽8.1栽培基质选择基质成分为重量比 1:3:2 的黄心土、珍珠岩和草炭土。8.2栽培容器选择采用 50 孔穴盘，圆形口、尖底的 5 cm11 cm 穴盘。旧穴盘需消毒后才可使用。8.3移栽方法组培苗上方使用带孔 PVC 膜覆盖保湿，放在通风阴凉处培养 20 d-30 d，培养到第 15 d 将 PVC 膜移除，换用折光率 75%的遮阳网。9移栽后管理9.1光照管理初始光照强度宜在 5000 lx 左右，15 d 后将光照提高至 15000 lx。9.2温度管理移栽苗培养温度为 1828，以 25恒温为最佳。DB32/T 3356201839.3水分管理移栽苗初始培养湿度范围为 7085，培养 30 d 后，将湿度控制在 50%75。9.4消毒与施肥管理每隔 10 d 喷 1 次多菌灵 1000 倍液。每隔 15d 喷施可溶性完全肥料（N:P:K=3:1:1）1000 倍液 1 次。DB32/T 335620184AA附录A（规范性附录）WPM 培养基母液成分组成名称成分含量（mg/L）单位母液加入药品（g）0.5L1.0L1.5L2.0L大量K2SO49909.919.829.739.6MgSO47H2O3703.77.411.114.8KH2PO41701.73.45.16.8NH4NO34004.081216微量MnSO44H2O22.52.254.56.759ZnSO47H2O8.60.861.722.583.44H3BO36.20.621.241.862.48CuSO45H2O0.250.0250.050.0750.1Na2MoO42 H2O0.250.0250.050.0750.1钙盐Ca(NO3)24 H2O55627.855.683.4111.2铁盐FeSO47 H2O27.82.785.568.3411.12Na2-EDTA37.33.737.4611.1914.92有机物肌醇1002468甘氨酸2.00.20.40.60.8VB11.00.10.20.30.4VB60.50.050.10.150.2VB50.50.050.10.150.2注：此处含量为最终WPM培养基中的含量。先将Na2EDTA用去离子水溶解，加热至沸腾2-3次，再用一个瓶子溶好铁盐，待Na2EDTA完全冷却以后，再将铁盐倒入其中并混匀。由于铁盐比较容易结晶，装铁盐的瓶子一定要用去离子水清洗干净，并放在烘干箱中烘干。DB32/T 335620185BB附录B（规范性附录）MS 培养基母液成分组成母液化合物原配方量(mg.L-1)扩大倍数称取量（mg）母液体积（mL）配制1L培养基应吸取量（mL）大量元素NH4NO316502033000100050KNO3190038000CaCl22H2O4408800MgSO47H2O3707400KH2PO41703400微量元素KI0.8320016610005H3BO36.21240MnSO44H2O22.34460ZnSO47H2O8.61720NaMoO42H2O0.2550CuSO45H2O0.0255CoCI26H2O0.0255铁盐FeSO47H2O28.7200556010005Na2.EDTA2H2O37.37460维生素和氨基酸肌醇1002002000010005烟酸0.5100盐酸吡哆醇0.5100盐酸硫胺素0.120甘氨酸2.0400_