生物性检材的个人识别省公共课一等奖全国赛课获奖课件.pptx

法法 医医 学学第1页第十三章第十三章生物性检材个人识生物性检材个人识别别编者编者 张霁（四川大学）张霁（四川大学）第2页第一节第一节概述概述第3页什么是个人识别？怎样进行个人识别？什么是遗传分型？什么是遗传标识？怎样进行DNA分型？怎样解释DNA证据？个人识别意义？第4页个个人人识别分析生物性检材以揭示个体身份判定工作 现场遗留物留物凶器凶器各种生物各种生物检材材嫌疑人嫌疑人/受害者受害者遗传分型 结果分析、比对结果分析、比对遗传分型第5页什么是遗传分型什么是遗传分型?所谓分型，是指经过一定技术伎俩确定个体特定遗传标识表型或基因型。第6页法医遗传标识分类法医遗传标识分类血型，,广义，血液遗传差异血型，狭义，血液细胞由遗传决定抗原差异红细红细胞型（胞型（ABO）白白细细胞型（胞型（HLA）血小板型血小板型血液蛋白血液蛋白质遗传多多态性性酶酶型型红细红细胞胞酶酶型（型（PGM1）血清血清酶酶型型血清型血清型同种异型（同种异型（Gm）血清蛋白血清蛋白电电泳多泳多态态性性（GC）DNA遗传标识DNA长长度多度多态态性性(STR)DNA序列多序列多态态性性(mtDNA)第7页DNA分型分型DNA遗遗传传标标识识有有足足够够多多态态性性，理理论论上上能能够够经经过过DNA分分型型，而无须经过测定全基因组序列来进行个人识别而无须经过测定全基因组序列来进行个人识别DNA分型能从任何含有细胞体液或组织中得到相同结果分型能从任何含有细胞体液或组织中得到相同结果能够对陈旧斑痕能够对陈旧斑痕极微量检材分型极微量检材分型分析结果能组成计算机数据库分析结果能组成计算机数据库快快速速分分型型能能力力，能能够够尽尽快快排排除除无无辜辜犯犯罪罪嫌嫌疑疑人人，使使判判定定工工作不至于延误案件调查。作不至于延误案件调查。第8页生物性检材特点生物性检材特点环境、保留条件所产生影响和一些不确定性！第9页分析生物性检材策略分析生物性检材策略观察形态学特征进行化学、免疫学、生物化学与分子生物学试验检测由简单到复杂，逐步排除，逐步缩小范围试验分析策略降低不确定性，实现个人识别。第10页检材发觉、采集、包装和送检检材发觉、采集、包装和送检关键点提醒：关键点提醒：提取物证检材基本标准提取物证检材基本标准怎样保留液体或湿润生物检材怎样保留液体或湿润生物检材为何检材不能用福尔马林固定为何检材不能用福尔马林固定塑料袋装生物检材有何不妥塑料袋装生物检材有何不妥物证检材提取、包装、送检物证检材提取、包装、送检 主要注意事项主要注意事项第11页检材发觉、采集、包装和送检检材发觉、采集、包装和送检检材发觉检材发觉散在分布;对不显著生物性检材，需要针对生物性检材各自不一样特点和理化性质，利用不一样理化伎俩，努力去寻找发觉。比如：血痕：鲁米诺喷雾荧光精斑：紫外线照射银白带暗紫晕荧光第12页检材发觉、采集、包装和送检检材发觉、采集、包装和送检检材检材搜集搜集确确保据链有效性：翻动现场物件或提取生物性检材前，先拍照、绘图、测量和统计其原始状态，切勿破坏原有生物性检材或添加无关痕迹或物品。提取生物性检材方法依据物品种类而异。可参考中华人民共和国公共安全行业标准法医学物证检材提取、保留与送检GA/T1691997。第13页检材发觉、采集、包装和送检检材发觉、采集、包装和送检检材检材包装和送检包装和送检尽快送检；不能用福尔马林固定；福尔马林会造成DNA降解、DNA分子与其它生物分子之间交联，影响DNA分析。低温保留或晾干保留；纸袋包装。第14页生物性检材检验程序和要求生物性检材检验程序和要求为确确保据链有效性及正当性，从检材受理到最终检验汇报，都需要严格遵照法医生物性检材检验普通程序进行。第15页第二节第二节血痕检验血痕检验第16页关键点提醒：血痕检验目标血痕检验普通程序血痕预试验目标、方法和意义血痕确证试验目标、方法和意义种属判定方法和原理血痕个人识别第17页血痕检验目标血痕检验目标送检检材是否是血；是人血还是动物血；测定遗传标识进行个人识别；其它检验，如出血量、出血时间、及出血部位推断等。第18页血痕检验血痕检验普通程序普通程序肉眼检验；预试验；确证试验；种属判定；遗传标识测定及性别判定；出血部位、出血量、血痕陈旧度等推断。第19页血痕肉眼检验血痕肉眼检验血痕数量、分布、位置、大小、形状、范围、色泽、它们相互关系以及它们与现场其它物品相互关系。作用：案件性质分析；现场重建等第20页血痕预试验血痕预试验目标：从大量可疑血痕中筛除不是血痕检材。基本原理：血红蛋白正铁血红素过氧化氢新生态氧联苯胺等有色反应第21页预试验意义预试验意义含有过氧化物酶活性物质广泛存在，如脓液、鼻涕、排泄物、植物汁等。预试验阳性提醒可能是血痕；灵敏度高。预试验阴性能够排除是血痕。第22页血痕预试验血痕预试验-联苯胺试验联苯胺试验血痕过氧化氢新生态氧联苯胺无色联苯胺蓝蓝色第23页血痕确证实验目：证明检材是血痕。原理：血红蛋白或其衍生物检测。血红蛋白正铁血红素变性珠蛋白血红素含氮化合物（如吡啶）血色原结晶试验NaOH血色原结晶高山氏试剂:10%NaOH3ml30%葡萄糖10ml吡啶3ml第24页血痕种属判定血痕种属判定目标：确定血痕是否是人血。意义：动物血中含有与人血遗传标识相同物质，如A及B样抗原。存在误将动物血判为人血而测定遗传标识。原理：种属特异性生物分子检测。p种属特异性蛋白抗体人血红蛋白抗体，人血清蛋白抗体；p种属特异性核酸Alu序列。方法：免疫学、生物化学及分子生物学方法。第25页种属判定种属判定免疫学方法免疫学方法抗人血红蛋白血清抗人血清蛋白血清环状沉淀反应：可溶性抗原与对应抗体相遇且百分比适当时，形成抗原抗体复合物，在抗原与抗血清界面出现可见白色沉淀环。酶联免疫吸附试验：辣根过氧化物酶标识抗人IgG单克隆抗体，抗原抗体反应后，经过酶促底物显色。第26页种属判定种属判定分子生物学方法分子生物学方法Alu序列人Alu序列有别于其它哺乳动物人Alu序列引物：Alu9.15-GGCACTTTGGGAGGCCAAGGAlu9.25-TACAAGCTTGTGCCACCATGCCAAC第27页种属判定种属判定分子生物学方法分子生物学方法PCR体系：50l20ngDNA10PCR缓冲液5l0.2mol/ml引物200mol/LdNTP1.5mmol/LMgCl20.45%Triton-1001UTaq酶2%琼脂糖电泳EB染色PCR产物130bpPCR循环参数：94变性5min9430s5530s循环30次721min72保温10min。第28页血痕个人识别血痕个人识别基因表达产物水平遗传标记测定红细胞ABO血型红细胞酶型血清型DNA多态性分析性别判定第29页血痕ABO血型检测特点：红细胞膜上ABO血型抗原密度高，抗原性强，仅需少许检材就能分型；ABO血型抗原决定簇为糖链，对环境中理化因数影响有较强抵抗力，即使陈旧血痕也能分型；ABO血型抗原也广泛分布在人体各种组织器官中，为结果比对提供了广泛检材起源。第30页血痕ABO血型检测吸收试验原理：有A、B抗原时，能与对应抗-A、抗-B抗体发生特异性抗原抗体反应，使抗血清中游离抗体降低或消失，不再与对应指示红细胞发生凝集反应或凝集反应强度显著减弱。若血痕中无A、B抗原，则不能抑制抗血清中对应抗体，抗体与指示红细胞凝集反应强度不改变。第31页吸收试验结果判读抗血清稀释倍数抗-A+A红细胞抗-B+B红细胞抗-H+O红细胞检材与对照248163264248163264248163264血型判定未吸收抗血清+-+-+-效价明确已知A血痕已知B血痕-+-+-+-+-对照正确检材1无血部位有血部位+-+-+-+-+-O型检材2无血部位有血部位+-+-+-+-+-A型检材3无血部位有血部位+-+-+-+-+-B型检材4无血部位有血部位+-+-+-+-AB型第32页血痕血痕DNA多态性分析多态性分析DNA提取：Chelex-100法等PCR-STR检测第33页血痕性别判定血痕性别判定X、Y染色质判别性激素检测HY抗原检测DNA性别判定人类牙釉质基因（Amelogenin）：Amel-X（Xp22）Amel-Y（Y11p22.2）人类Amel-X与Amel-Y内含子长度不一样。针对Amel-X或Amel-Y碱基缺失部位设计引物，可以用PCR扩增X、Y特异性片段。第34页人类牙釉质基因PCR扩增目标PCR引物PCR产物大小（bp）X、Y染色体同源Amelogenin基因第一内含子,该区X染色体有6bp缺失5-CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAGTG-35-ATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTG-3X=106Y=112问题：用PCR仅仅分析Y或X一个染色体作血痕性别判定是危险。因为缺乏内对照，扩增失败时可能会误将男性判为女性，或误将女性判为男性。如：男性不育者常见Y-染色体微缺失，造成Amel-Y片段丢失。男性：Amel-X、Amel-Y女性：Amel-XAmel-X/Y引物第35页第三节第三节精液斑检验精液斑检验第36页关键点提醒：关键点提醒：精液斑检验意义及程序精液斑预试验确证试验原理、方法和意义DNA多态性检测价值、条件与结果评价第37页精液斑检验精液斑检验要处理问题要处理问题可疑斑痕是否为精斑：预试验、确证试验是人精斑还是动物精斑：种属试验是何人精斑个人识别第38页精斑检验普通过程精斑检验普通过程肉眼检验预试验确证试验种属判定个人识别确定精斑部位：紫外灯下呈银白色荧光提醒斑痕可能是精斑：酸性磷酸酶-磷酸苯二钠试验确证精斑：精子检出；p30人精斑？p30第39页精斑检验肉眼检验精斑检验肉眼检验深色布类上浓厚精斑，呈灰白色浆糊状斑迹，较稀薄精斑则不易察见；浅色布类上精斑多呈黄白色地图状，边缘色深。放大镜检验，可在布纤维表面或中间见黄白色小鳞片。载体上精斑手触有硬感，新鲜精斑有特殊臭味。第40页紫外线下发银白色荧光（黄素），边缘呈紫蓝色；紫外线检验为非特异性检验伎俩！第41页精斑预试验精斑预试验阳性结果提醒可能是精斑，不能确证精斑！酸性磷酸酶检出磷酸苯二钠试验磷酸苯二钠酸性磷酸酶萘酚安替比林铁氰化钾红色醌类化合物第42页精斑确证试验精斑确证试验精子检出：复染法酸性品红亚甲兰染色头部呈红色，尾部呈兰色免疫学试验:p30检出前列腺特异性抗原含有高度种属特异性和器官特异性；保留时间长第43页精斑个人识别精斑个人识别ABO血型检测血型检测中和试验：精斑中水溶性A、B、H物质与对应抗体结合，使抗体与指示红细胞凝集反应能力降低或完全消失。反应系统中加指示红细胞后，若红细胞不凝为中和试验阳性反应，证实精斑中含有与抗体相对应抗原；红细胞凝集为阴性反应，证实精斑中不含与抗体相对应抗原。第44页精斑指示精斑浸出液稀释倍数编号抗血清红细胞2481632641282565121024判型1HO-+2+2+2+2+2+A分泌型AA-2+2+BB2+2+2+2+2+2+2+2+2+2+2HO-+2+2+2+2+2+B分泌型AA2+2+2+2+2+2+2+2+2+2+BB-2+2+3HO-+2+2+2+2+2+AB分泌型AA-2+2+BB-2+2+4HO-+2+2+2+O分泌型AA2+2+2+2+2+2+2+2+2+2+BB2+2+2+2+2+2+2+2+2+2+l抗血清效价一定要标化（2或4为好）；l精斑检材与无精斑检材抑制凝集相差3级以上，证实精斑中含有对应血型抗原第45页精斑精斑DNA检测检测精子细胞核是富含二硫基交联蛋白组成网状结构，能抵抗各种类型去污剂作用，对外源性蛋白酶水解也有相当强抵抗作用，必须在DTT等试剂作用下，使二硫基断裂，将-S-S-还原成-SH，核蛋白才能被SDS、蛋白酶K分解，释放出DNA。第46页第四节第四节其它生物性斑迹分析其它生物性斑迹分析第47页检材文件唾液（含有核细胞）Sweetetal.(1997)尿液Beneckeetal.(1996)排泄物Hopwoodetal.(1996)指甲屑Wiegandetal.(1993)烟蒂Hochmeisteretal.(1991)邮票Hopkinsetal.(1994)信封封口WordandGregory(1997)头皮屑HerberandHerold(1998)指印vanOorschotandJones(1997)细胞成份DNA分析第48页混合斑分析混合斑分析Y-STR基因座在混合斑中精液成份个人识别中应用优势：只有男性成份能够被扩增和检测！第49页第五节毛发检验第50页毛发检验要处理问题有：毛发还是纤维？人毛？动物毛？来自人体何部位？自然脱落？暴力拔脱？推断致伤物？毛发个人识别第51页毛发结构毛发结构毛发是皮肤一个特殊从属器，是皮肤毛囊细胞产生一个富有弹性角质体。毛尖是毛干游离末端，毛干向毛尖逐步变细而尖毛干是裸露于皮肤外部部分，由角化上皮细胞（无细胞核）组成，中心向外能够分为：毛小皮：人毛小皮花纹通常为细小波浪状；毛皮质：人皮质发达；毛髓质：人髓质不发达、而且髓质不连续。毛根是埋在皮肤内部分（含有核细胞）毛球：毛根起始端膨大和球状部分；毛囊：包裹毛根一管状结构，内层为上皮根鞘、外层为纤维组织鞘；毛乳头：毛球和毛囊末端膨大，底面内凹，含毛细血管和神经结缔组织。第52页毛发与其它纤维判别毛发与其它纤维判别毛发主要成份为角蛋白中硬角蛋白，理化性质稳定。毛发角蛋白中含有3-5硫，燃烧时发出特殊臭味。肉眼观察毛发与纤维易于区分。有困难时可用显微镜检验，只有毛发才有毛小皮、皮质、髓质三层特有结构。第53页毛发与其它纤维判别毛发与其它纤维判别捻搓试验捻搓试验燃烧试验燃烧试验植物粘胶：连续燃烧，有烧焦气，灰少而飞扬；植物粘胶：连续燃烧，有烧焦气，灰少而飞扬；毛发：难于燃烧，有特殊焦气，灰球不飞扬；毛发：难于燃烧，有特殊焦气，灰球不飞扬；合成纤维：遇火收缩；合成纤维：遇火收缩；矿物纤维：不被燃烧。矿物纤维：不被燃烧。第54页人毛与动物毛判别人毛与动物毛判别毛结构人人毛毛兽兽毛毛毛小皮毛小皮鳞片小，薄纹理呈波浪状，鳞片小，薄纹理呈波浪状，毛小皮游离缘呈细锯齿状毛小皮游离缘呈细锯齿状鳞片大而厚，纹理粗大，毛鳞片大而厚，纹理粗大，毛小皮游离缘呈粗锯齿状小皮游离缘呈粗锯齿状皮皮质质宽，占毛干直径宽，占毛干直径2/3左右，左右，色素颗粒多分布在皮质边色素颗粒多分布在皮质边缘，较均匀缘，较均匀窄，占毛干直径窄，占毛干直径1/21/3，色素颗粒多，大小不一，分色素颗粒多，大小不一，分布不均匀布不均匀髓髓质质窄，不连续（个别部位毛发可出现不连续状）占毛干直径1/41/5宽，连续，多数兽类有特殊花纹，占毛干直径1/3以上外表颜色外表颜色普通为一个颜色常见一根毛发上有几个颜色第55页人毛部位确定能够依据毛发长短、粗细、色泽、形状、卷缩方向、末端特征、横断面形状、髓质位置以及表面附着物等特点，判别不一样部位人毛发。第56页毛发脱落和损伤毛发脱落和损伤自然脱落：毛球呈棒状，下方闭锁，无毛囊附着，510%亚硝基铁氰化钠溶液染色无颜色反应暴力拔脱：毛球湿润，毛根常附有毛囊残片，下端开放或呈沟状弯曲，染色成红色第57页毛发钝器伤：毛发钝器伤：钝器打击时，毛发损伤程度与致伤工具质量作用力大小钝器打击时，毛发损伤程度与致伤工具质量作用力大小和毛发依附物体性质相关。钝器作用部位变宽扁平，皮质纤和毛发依附物体性质相关。钝器作用部位变宽扁平，皮质纤维分裂，部分断裂或完全断裂。维分裂，部分断裂或完全断裂。毛发锐器伤：毛发锐器伤：锐器所致毛发损伤，断面形态特征与锐器刀口尖锐程度锐器所致毛发损伤，断面形态特征与锐器刀口尖锐程度相关。尖锐锐器所致毛发断面平滑整齐，毛干不碎裂，皮质相关。尖锐锐器所致毛发断面平滑整齐，毛干不碎裂，皮质纤维不分裂。纤维不分裂。第58页毛发个人识别毛发个人识别形态学观察微量元素含量毛发ABO血型测定毛发DNA分析带毛囊毛发STRv毛干mtDNA分析第59页mtDNA分析分析WhatismtDNAtypingmeettheneedsofforensicidentificationwithmtDNAtypingtakecautiontomtDNAtyping第60页 每个细胞中线粒体基因组有多个拷贝每个细胞中线粒体基因组有多个拷贝 母系遗传母系遗传mtDNAmtDNA遗传标识第61页线线粒粒体体DNA结结构构第62页核核DNA（nuclearDNA）线粒体线粒体DNA(mtDNA)基因组大小基因组大小3.2109bp16569bp细胞内拷贝数细胞内拷贝数2（父母各提供一个等位基因）（父母各提供一个等位基因）1000细胞内细胞内DNA百分比百分比99.75%0.25%结构结构线性；包裹在染色体内线性；包裹在染色体内环状环状遗传起源父亲和母亲父亲和母亲母亲母亲染色体配对染色体配对双倍型双倍型单倍型单倍型生殖重组生殖重组是是否否复制修复复制修复是是否否特异性特异性个体特异性个体特异性（同卵双胞胎除外）同卵双胞胎除外）没有个体特异性没有个体特异性（同一母系亲属相同）同一母系亲属相同）突变率突变率低低最少是核DNA5倍10倍参考序列参考序列人类基因组计划发表1981年年Anderson等发表等发表第63页参考序列参考序列19811981年年在在英英国国剑剑桥桥Frederick Frederick SangerSanger试试验验室室首首次次对对人人类类mtDNAmtDNA序序列列进进行行了了全全序序列列测测定定。这这个个最最初初测测定定序序列列作作为为比比正正确确参参考考序序列列，通通常常被被称称为为AndersonAnderson序序列列或或剑剑桥桥参考序列。参考序列。19991999年年，Andrews Andrews et et alal对对剑剑桥桥参参考考序序列列所所用用胎胎盘盘样样本本进行了重新测序。更正了最初公布序列中进行了重新测序。更正了最初公布序列中1111个碱基。个碱基。第64页剑桥参考序列和修正剑桥序列参考序列比较剑桥参考序列和修正剑桥序列参考序列比较碱基位置碱基位置线线粒粒体体基基因因组组区域区域原原始始剑剑桥桥参参考序列考序列修修正正剑剑桥桥参考序列参考序列备注备注3106310716SrRNACCC错误错误3423ND1GT错误错误4985ND2GA错误错误9559COGC错误错误11335ND4TC错误错误13702ND5GC错误错误14199ND6GT错误错误14272ND6GC错误错误14365ND6GC错误错误14368ND6GC错误错误14766CytbTC错误（插入错误（插入Hela序列）序列）第65页正正确确序序列列在在nt3106nt3107只只有有一一个个C，整整个个线线粒粒体体基因组是基因组是16568bp而不是最初报道而不是最初报道16569bp。为为了了保保持持历历史史数数据据，在在nt3107由由一一个个缺缺失失来来占占据据一一个个位置。位置。法法医医学学中中最最常常应应用用两两个个高高变变区区序序列列没没有有差差异异，它它涵涵盖盖了了nt16024nt16365和和nt73nt340第66页参考序列参考序列Anderson et al,1981.Anderson序序列列（GenBank：M63933）也也称称为为剑剑桥桥参参考考序序列列（CRS）。过过去去依依据据与与剑桥参考序列剑桥参考序列L链比较差异汇报结果链比较差异汇报结果Andrewsetal,1999.修修正正剑剑桥桥参参考考序序列列（rCRS）作作为为序序列列比比对对时时参参考考标标准准为为16568bp,而而不不是是传传统统所所接接收收16569bpIngmanetal,.NCBI人人类类基基因因组组库库用用线线粒粒体体基基因因组组参参考考序序 列列（RefSeqmtGenome），GenBank中中 为为16571bp第67页 每个细胞中线粒体基因组有多个拷贝每个细胞中线粒体基因组有多个拷贝 母系遗传母系遗传 单倍型传递单倍型传递mtDNAmtDNA遗传标识特点特点第68页mtDNA母系遗传模式母系遗传模式第69页mtDNA分型法医学意义分型法医学意义在在检检测测个个体体间间差差异异上上，线线粒粒体体DNA不不如如其其它它方方法法有有用用。但但mtDNA对对陈陈旧旧骨骨、牙牙、严严重重腐腐败败或或焚焚烧烧残残骸骸以以及及单单根根毛毛干干检检测测成功率比核成功率比核DNA高。高。与与核核DNA相相比比，每每个个细细胞胞中中含含有有多多个个mtDNA拷拷贝贝。mtDNA大大拷拷贝贝数数提提升升了了从从微微量量或或严严重重降降解解检检材材中中得得到到足足量量DNA成成功功率率。在在仅仅能能得得到到毛毛发发、骨骨、牙牙等等组组织织案案件件中中，能能提提取取得得到到DNA量量极极少少，这这种种情情况况下下从从mtDNA中中得得到到分分型型结结果果可可能能性性远远远远高高于于核核DNA遗遗传传标识。标识。除除非非发发生生突突变变，同同一一母母系系中中个个体体含含有有相相同同mtDNA序序列列。通通常常mtDNA在在很很多多代代当当中中传传递递都都是是稳稳定定，经经过过mtDNA检检测测能能够够预预计计几代人间亲缘关系。几代人间亲缘关系。第70页法医法医mtDNA分型分型个个体体间间mtDNAmtDNA差差异异最最大大区区域域在在D D环环区区，包包含含高高变变区区I I（HV HV I I，342bp342bp）和和高高变变区区IIII（HV HV II,268bpII,268bp）。无无血血缘缘关关系系个个体体中中mtDNAmtDNAHV HV I I和和HV HV IIII区区域域改改变变率率大大约约在在1-3%1-3%，即即每每100100个个碱碱基基就就有有1-31-3个个不不一一样样，所所检检测测610个个碱碱基基有有7-14个个碱碱基不一样基不一样。第71页mtDNA频率预计频率预计在包含在包含N N个个mtDNAmtDNA分型数据分型数据库库内，内，观观察到一定次数（察到一定次数（X X）某一）某一mtDNAmtDNA分型，分型，其其频频率（率（p p）用以下公式）用以下公式计计算：算：p=X/Np=X/N假如在数据假如在数据库库内未内未观观察到分型，可信区察到分型，可信区间间上限上限为为：1-1/N1-1/N代表可信系数（代表可信系数（0.050.05，9595可信区可信区间间），），N N代表数据代表数据库库内个体数内个体数比如比如,在在11481148个非裔美洲人分型中，个非裔美洲人分型中，mtDNAmtDNA型型16129A16129A、263G263G、309d309d、315.1C315.1C观观察到两次，察到两次，调查调查mtDNAmtDNA群体数据群体数据库时库时在在686686个西班牙人分型中未个西班牙人分型中未观观察到，察到，计计算各个算各个样样本群体稀有分型以下：本群体稀有分型以下：非裔美洲人群：非裔美洲人群：p=2/1148+1.96(2/1148)(1-(2/1148)/11481/2p=2/1148+1.96(2/1148)(1-(2/1148)/11481/2 =0.0017+0.002=0.004=0.4%=0.0017+0.002=0.004=0.4%西班牙人群：西班牙人群：1-1-（0.050.05）1/686=1-0.9956=0.0044=0.44%1/686=1-0.9956=0.0044=0.44%第72页l检检材材情情况况不不好好(数数量量与与质质量量)与与测测序序技技术术潜潜在在误误差差,使使被被测测样样本本单单个个碱碱基基不不一一样样不不能能作作为为法法医医学学区区分分个体依据。个体依据。l线线粒粒体体DNA遗遗传传标标识识呈呈单单倍倍型型遗遗传传，整整个个线线粒粒体体基基因因组组相相当当于于一一个个遗遗传传标标识识。在在法法医医学学实实践践中中，其个人识别能力有限。其个人识别能力有限。takecautiontomtDNAtyping第73页第六节第六节骨骼检验骨骼检验第74页骨骼检验要处理以下问题：是否骨骼？人骨还是动物骨？一人骨或是多人骨？人骨个人识别，包含依据骨骼特征推断死者性别、年纪、身高，面貌复原与颅像重合及遗传标识分析；死后经过时间推测及损伤判定。第75页骨确定肉眼检验：依据骨骼解剖学与组织学结构特点及骨骼成份测定进行判断。显微镜检验：骨片镜检，观察有没有骨小管、骨板、哈佛氏管等骨组织学特征。焚烧试验：表面失去光泽，重量减轻，质地变松脆。第76页骨骼种属判定骨骼种属判定区分点人骨动物骨哈佛氏管形态规则，横断面呈圆形或椭圆形直径大，平均比动物骨大2-3倍数量少，180倍镜下平均每视野可见78个型态不规则，多呈长圆形或条形直径小数量多，180倍镜下平均每视野可见10个以上骨板层排列同心圆骨板排列整齐同心圆骨板排列不整齐，有缺乏环形骨板骨单位界限骨单位之间界限清楚骨单位之间界限不清楚第77页一人骨或多人骨判别一人骨或多人骨判别主要依据骨骼解剖学结构、定位、数目、排列及各骨连接吻合情况和有没有重复骨等进行判定。DNA分析第78页骨骨个人识别个人识别形态观察测量方法图像分析方法分子生物学方法第79页人骨性别判定人骨性别判定项目男性女性普通性状狭小而高，骨质较重宽大而矮，骨质较轻骨盆壁肥厚粗糙，侧壁内倾而深纤薄光滑，侧壁平直而浅入口纵径大于横径，叶心型或楔型横径大于纵径，呈圆型或椭圆型出口狭小宽大盆腔狭小而深，上口大，下口小，呈漏斗状短而宽，呈圆桶型骶骨狭而长，呈等腰三角形，弯曲度大，岬显著突出短而宽，呈等边三角形，弯曲度小，岬略突出坐骨大切迹窄而深浅而宽坐骨结节不外翻外翻耳状面大而直，包括3个骶椎小而倾斜，包括2-2.5个骶椎；分娩后其前下方可见分娩沟髋臼大，朝向外小，朝向前外耻骨联合面高；上下枝结合部呈三角形；耻骨角小，70-75低；结合部呈方形；耻骨角大，90-110，分娩后联合面背侧可见分娩瘢痕闭孔大，卵圆形，内角约110小，三角形，内角约70髂翼位置垂直水平骨盆性别差异第80页项目男性女性普通性状粗糙，肌线显著，大而重较光滑，肌线不显著，小而轻薄颅骨厚度较厚较薄颅腔较大，容积约1450ml较小，容积约1300ml侧面观前额及顶部呈弧线状前额垂直，顶部平坦额结节不显著显著上眉间窝有无眉间发育显著，突出于鼻根之上不显著，较平直眉弓显著突起，表面多有小孔不显著，表面几无小孔眼眶类方型，眶上缘较钝类圆形，眶上缘较锐鼻根点凹陷较深较浅梨状孔窄高宽低项线粗大不显著枕外隆凸粗大较小乳突大，后缘长，围径大较小，后缘短，围径小枕骨大孔大小枕骨髁大小下颌体较高，平均高度为291m较低，平均高为263m下颌枝较宽，最大宽度为424mm较窄，最大宽度为391mm下颌骨角外翻，较小，平均小于120外翻不显著，较大，平均大于120下颌骨颊区方圆或钝圆，结节强壮粗糙圆形或锐圆，结节中等，平滑颅骨性别差异第81页人骨年纪测定人骨年纪测定骨骼骨化中心出现（出生后）骨骺愈合时间骨骼骨化中心出现（出生后）骨骺愈合时间腕骨头状骨2-3月肩胛骨喙突1岁18-24岁钩骨2-4月肩峰突端11-18岁18-24岁三角骨2-4岁关节盂、下角、脊柱缘11-18岁月骨3-5岁舟骨5-7岁锁骨胸骨端18-20岁20-25岁大多角骨5-7岁小多角骨5-7岁跟骨结节6-12岁16-18岁掌骨1-3岁14-16岁第1、2、3楔骨9-11月指骨1-3岁14-16岁足舟骨9-11月尺骨鹰嘴9-11岁15-17岁胫骨上端出生-2月17-20岁小头6-8岁16-18岁下端4-6岁16-18岁桡骨小头5-7岁15-17岁腓骨上端3-5岁17-20岁下端7-9月16-18岁下端10月-2岁16-18岁肱骨头出生-3月15-17岁髌骨3-5岁大结节7-9月15-17岁小结节2-4岁15-17岁股骨头3-5月17-19岁小头3-5月16-18岁大转子3-5岁17-19岁内上髁6-8岁16-18岁小转子9-11岁17-19岁外上髁11-13岁16-18岁下端出生-5月17-20岁滑车9-11岁16-18岁髋骨12-19岁20-25岁四肢骨骨化中心出现及骨骺愈合时间第82页年纪(岁)联合面顶部结节后缘前缘周缘17-19前后凸，嵴沟显著，高3mm40极显著，高lOmm18岁开始部分出现并外翻20-22凸渐消，嵴沟显著，高2mm46.5可见，高7mm继续扩大，仍外翻23-26嵴沟仍显著，高1.5mm仍可见大部形成开始部分形成逐步形成27-30嵴沟仍可见，嵴峰较平50仍可见，高5mm基本形成，边缘较锐大部形成(60)还未形成31-35嵴沟基本消失，成为平面21.8仅见残痕，高3mm全部形成，大部增宽全部形成已形成36-40中央开始凹陷，表面粗糙结节残痕消失开始向后扩散70.6隆起 开始出现隆起41-49中央显著凹陷,表面粗糙继续向后扩散46岁起全部隆起增宽，显著隆起50-59表面开始变光滑，出现小孔显著向后扩散,边缘钝全部出现隆起隆起极显著边缘钝60以上表面光滑，小孔形成小凹边缘较锐边缘较锐耻骨联合面年纪特征第83页从骨骼推算身高从骨骼推算身高将每块骨骼按解剖学位置排列后，测得全身骨骼高度，再加上5cm软组织厚度，即为死者身高。骨骼不完整时须经过回归方程推算。第84页以左侧肢体部分长骨推算中国汉族男性(21-30岁)身高回归方程式以下。身高：2.30X股骨最大长+64.383.48(cm)身高：2.22X胫骨最大长+85.343.87(cm)身高：2.54X腓骨最大长+76.153.81(cm)身高：2.66X肱骨最大长+82.644.13(cm)身高：2.86X尺骨最大长+92.824.47(cm)身高：3.49X桡骨最大长+82.714.14(cm)第85页图像分析方法图像分析方法面貌复原面貌雕塑法颅骨侧面描记法颜面影像复原形态图法颅像重合第86页分子生物学方法X-Y染色体同源特异片段判定性别；PCR-STR；mtDNA识别个体。第87页骨骼样本骨骼样本DNA分析过程分析过程埋葬地埋葬地表面清表面清洁抑制物移除抑制物移除线粒体粒体DNA分析分析STR分析分析挖掘挖掘软组织处理理人人类学分析学分析制制样骨骼骨骼样本表面本表面污染染处理理骨骼骨骼试验室准室准备骨骼研磨、粉骨骼研磨、粉末化末化处理理DNA提取提取提取后提取后DNA纯化化PCR后后纯化化PCRDNA定量定量SNP分析分析结果果评价价新一代新一代测序技序技术应用用RTG3D第88页死后经过时间推测及损伤判定死后经过时间推测及损伤判定完全骨化后，由骨骼推测死后经过时间比较困难。主要依据昆虫侵袭情况、尸体崩解情况、骨质无机盐含量来推断。骨骼损伤形状可长久保留，对于判定有重大意义。如颅骨钻孔术后缺损有利于个人识别；依据骨骼损伤确定损伤性质，有利于推断致伤物，判明死因。第89页第七节第七节牙齿判定牙齿判定第90页牙齿检验要处理以下问题：是否人牙齿？推断年纪；牙齿个体生活特征；个人识别。第91页年纪推断根据牙齿萌出次序推断年纪乳牙上颌下颌中切牙6-95-8侧切牙6.5-106-9尖牙16-2014-18第一磨牙12-1810-14第二磨牙20-3018-24人类乳牙萌出时间（月）第92页恒牙上颌男女下颌男女中切牙6-86-96-55-8侧切牙7-107-106-85-9尖牙10-139-129-128-11第一双尖牙9-129-129-129-12第二双尖牙10-139-1210-139-13第一磨牙6-75-76-75-7第二磨牙11-1411-1411-1310-13人类恒牙萌出时间（岁）第93页依据牙齿磨耗程度推断年纪磨耗度东北地域M1M2华南地域M1华北地域M1M217.39-21.9419.76-26.5816.022-2322-2422.21-25.2328.49-30.2524.526-2929-3130.85-32.6133.78-38.4035.228-3636-4037.32-44.7239.95-53.9544.239-4344-4843.55-59.5959.5958.948-5755-6560.5-70.7-第一、二磨牙(M1、M2)磨耗度与年纪关系第94页个体生活特征个体生活特征牙齿可反应个体生活特征有:叼烟斗、长久嗑瓜子或咬硬物人，其切牙切端常有对应磨耗；长期吸咽、饮茶人，牙齿表面有烟垢或茶垢；吹玻璃工人及木工牙齿常有职业印记；氟牙说明曾在高氟区长久居住过；槟榔齿以亚热带地域妇女为多见；四环素牙常反应儿童时期曾经长久服用四环素类药品。第95页个人识别个人识别牙科学资料分析方法牙科学详细病历是十分主要个人识别资料。分子生物学方法牙髓细胞第96页第八节第八节其它组织检验其它组织检验第97页软组织腐败程度决定了软组织DNA分析成败石蜡包埋组织甲醛固定时间决定了DNA分析成败第98页第九节第九节个人识别结果评定个人识别结果评定第99页攻攻击DNA证据几个方面据几个方面普通普通问题：p试验室无室无质量控制量控制p技技术人人员培培训不足不足p不能提供充分材料不能提供充分材料第100页证据据链问题p统计不全不全p样品保留、品保留、转运不妥运不妥p提交提交伪证p更改更改证据据第101页技技术问题p试验室未按要求操作室未按要求操作p处理不妥造成理不妥造成证据据污染染p混合混合样品分析品分析p抑制抑制检验原因原因p谱带“漂移漂移”p方法未方法未经有效性有效性验证第102页统计问题p群体研究不足群体研究不足p数据数据库使用不妥使用不妥p不符合平衡不符合平衡规律律p位点位点间连锁第103页遗传标识遗传标识检材处理策略检材处理策略试验结果解释试验结果解释第104页基本策略基本策略经过遗传标识分分析析为案案件件侦查提提供供线索索,为审判判提提供供科学科学证据。据。p如强奸案，若从被害人阴道拭子中取得精斑与嫌疑人不一样，这就为排除该嫌疑人提供了证据；p如谋杀案，若测出嫌疑凶器上血痕与被害人血液含有相同遗传标识，则在某某种种程程度度上上支持嫌疑凶器是作案工具论点。第105页个人识别原理个人识别原理 1 1现场检材现场检材 个人识别个人识别 不一样不一样 排除嫌疑排除嫌疑人人嫌疑人样本嫌疑人样本 遗传标识分型遗传标识分型 相同相同 不能排除不能排除 嫌疑人嫌疑人试验技能技能第106页个人识别原理个人识别原理 2 2现场检材现场检材 个人识别个人识别预计预计嫌疑人嫌疑人 相同相同 是是现场检材现场检材嫌疑人样本嫌疑人样本 遗传标识分型遗传标识分型 供体可能性供体可能性 统计理理论第107页法医遗传标识包括统计学分析法医遗传标识包括统计学分析概率基础概率基础定义，范围，算法定义，范围，算法乘法定律：乘法定律：多个事件同时发生多个事件同时发生P(A)=P(A1)P(A2)加法定律：加法定律：多个事件发生一个多个事件发生一个P(A)=P(A1)+P(A2)第108页遗传标识个人识别遗传标识个人识别系统效能系统效能个案能力个案能力第109页遗传标识个人识别系统效能遗传标识个人识别系统效能系统效能用个人识别能力系统效能用个人识别能力(discrimination(discrimination power,DP)power,DP)定量评价。定量评价。个人识别能力指从群体中随机抽取两名个体，个人识别能力指从群体中随机抽取两名个体，其遗传标识表型不相同概率。其遗传标识表型不相同概率。个人识别能力个人识别能力 DP=1-PiDP=1-Pi2 2第110页个人识别计算个人识别计算个人识别能力个人识别能力DP=1-Pi2以以ABO型为例，型为例，A、B、O、AB表型频率分别为：表型频率分别为：P1:0.2642,P2:0.3353,P3:0.290，P4:0.110则：则：DP=1-Pi2=1-0.26422+0.33532+0.29052+0.11002=0.713第111页STR遗传标识遗传标识TH01个人识别能力计算数据个人识别能力计算数据表型表型表型数表型数表型表型频率率(Pi)Pi26-620.01700002896-790.07400054766-810.00800000646-9150.12400153766-1030.02500006257-770.05800033647-820.01700002897-9320.26400696967-9.330.0