DB32_T 3451-2018栽培稻种中杂草稻混杂检测规程.pdf
《DB32_T 3451-2018栽培稻种中杂草稻混杂检测规程.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《DB32_T 3451-2018栽培稻种中杂草稻混杂检测规程.pdf(9页珍藏版)》请在咨信网上搜索。
1、ICS 65.020.20 B 22 备案号:DB32 江苏省地方标准 DB32/T 34512018 栽培稻种中杂草稻检测规程 Testing regulations of Weedy Rice in Cultivated Rices Seed 2018-09-06 发布 2018-09-30 实施 江苏省质量技术监督局 发 布 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 检测前准备工作.2 5 操作步骤.2 6 结果统计.3 附录 A(规范性附录)普通 PCR 方法.6 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009标准化工作导则第 1 部分:标准的结构
2、和编写的规则起草。本标准由南京农业大学提出并归口。本标准起草单位:南京农业大学。本标准主要起草人:强胜、戴伟民、宋小玲。栽培稻种中杂草稻检测规程 1 范围 本标准规定了杂草稻的术语和定义、试剂配制、仪器和用具、照明要求、样品制备、操作步骤、结果计算等方面的内容。本标准适用于栽培稻稻种中杂草稻的检测。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 5491 粮食、油料检验扦样、分样法 GB/T 22505 粮油检验 感官检验环境照明 3 术语和定义 下列术语和定义
3、适用于本文件。3.1 杂草稻 weedy rice 杂草稻(weedy rice)是指在水稻田中可以自我繁衍具有杂草特性的水稻(Oryza sativa L.)物种。3.2 纯合体的杂草稻 homozygotic weedy rice 栽培稻种子中具有红果皮的杂草稻。3.3 杂合体的杂草稻 heterozygous weedy rice 杂草稻的花粉飘逸到栽培稻柱头上发生杂交,产生的栽培稻种子(2n=24条染色体)中含有杂草稻的一半染色体(n=12条染色体),但果皮色依然表现为白色。称为杂草稻杂合体。其种植到田里开花结果,就会产生性状分离,产生具有红色果皮的杂草稻种子。3.4 Rc 基因 Rc
4、 gene Rc 基因是水稻果皮原花色素积累途径中最重要的调节基因之一,位于第染色体上,全长约6.4kb,包含有8个外显子,产物为一个具有碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)元件的调节蛋白。Rc基因具有比rc基因多14 bp插入/缺失,从而设计特异性14 bp插入/缺失引物进行PCR扩增,以检测杂合体杂草稻。4 检测前准备工作 4.1 试剂配制 聚丙烯酰胺母液(40%):按 19:1 的比例将 38 g 丙烯酰胺和 2 g 甲叉双丙烯酰胺加入 100 ml 去离子水中,待溶解后定容,于 4 冰箱中储存备用。5 x TBE 电泳缓冲液 1 L(母液):54 g Tris base,27.5 g 硼酸,
5、20 ml 0.5M EDTA(pH8.0),加蒸馏水至 1L。10%过硫酸铵:1 g 过硫酸铵溶于 10 ml 蒸馏水中,4 冰箱中保存 1 周左右。400 mL NaOH 溶液:6 g 氢氧化钠,0.076 g 四硼酸钠,1.6 ml 甲醛(甲醛应放入冰箱中,易变性),加蒸馏水至 400 ml,现配现用。0.1%AgNO3:取 0.1 g AgNO3 溶解于100ml 蒸馏水中,现配现用。4.2 仪器和用具 稻谷检验出糙机、电动研磨机、PCR 扩增仪、电泳槽、电泳仪、照相机。4.3 照明要求 操作过程中照明条件应符合 GB/T 22505 的要求。4.4 样品制备 纯合体杂草稻检测取样按
6、GB 5491-1985 执行。上述纯合体杂草稻检测后,去除红色糙米,然后将白色糙米按 GB 5491-1985 中 3.1 的规定混匀。将样品倒在光滑平坦的桌面上或玻璃板上,用两块分样板将样品摊成正方形,然后从样品左右两边铲起样品约 10 cm 高,对准中心同时倒落,再换一个方向同样操作(中心点不变),如此反复混合 4 次5 次,将样品摊成等厚的正方形。取 50 份,每份 200 粒糙米。5 操作步骤 5.1 纯合体杂草稻检测 使用稻谷检验出糙机脱壳,查看糙米的颜色,分别计数糙米总数(m)和红色糙米数(m1)。5.2 杂合体杂草稻检测 5.2.1 磨粉 用电动研磨机将 200 粒白色糙米碾磨
7、成粉,混合均匀,取 4 份,各 30 mg。5.2.2 DNA 提取 采用适于提取水稻及其产品 DNA 的试剂盒方法,进行 DNA 提取。制备 DNA 模板时设置不加任何试样的空白对照。5.2.3 DNA 溶液纯度测定和保存 将DNA溶液适当稀释,测定并记录其在260 nm和280 nm的紫外光吸收率,OD 260值应该在0.051 的区间内,OD260 nm/OD280 nm 比值应介于 1.4 2.0 之间,根据 OD260 值计算 DNA 浓度。依据测得的浓度将 DNA 溶液稀释到 25 ng/uL,-20 保存备用。5.2.4 PCR 反应和跑胶 见附录 A。记录杂合条带的胶孔数(n)
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- DB32_T 3451-2018栽培稻种中杂草稻混杂检测规程 3451 2018 栽培 稻种 杂草 混杂 检测 规程
1、咨信平台为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,收益归上传人(含作者)所有;本站仅是提供信息存储空间和展示预览,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容不做任何修改或编辑。所展示的作品文档包括内容和图片全部来源于网络用户和作者上传投稿,我们不确定上传用户享有完全著作权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果侵犯了您的版权、权益或隐私,请联系我们,核实后会尽快下架及时删除,并可随时和客服了解处理情况,尊重保护知识产权我们共同努力。
2、文档的总页数、文档格式和文档大小以系统显示为准(内容中显示的页数不一定正确),网站客服只以系统显示的页数、文件格式、文档大小作为仲裁依据,平台无法对文档的真实性、完整性、权威性、准确性、专业性及其观点立场做任何保证或承诺,下载前须认真查看,确认无误后再购买,务必慎重购买;若有违法违纪将进行移交司法处理,若涉侵权平台将进行基本处罚并下架。
3、本站所有内容均由用户上传,付费前请自行鉴别,如您付费,意味着您已接受本站规则且自行承担风险,本站不进行额外附加服务,虚拟产品一经售出概不退款(未进行购买下载可退充值款),文档一经付费(服务费)、不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
4、如你看到网页展示的文档有www.zixin.com.cn水印,是因预览和防盗链等技术需要对页面进行转换压缩成图而已,我们并不对上传的文档进行任何编辑或修改,文档下载后都不会有水印标识(原文档上传前个别存留的除外),下载后原文更清晰;试题试卷类文档,如果标题没有明确说明有答案则都视为没有答案,请知晓;PPT和DOC文档可被视为“模板”,允许上传人保留章节、目录结构的情况下删减部份的内容;PDF文档不管是原文档转换或图片扫描而得,本站不作要求视为允许,下载前自行私信或留言给上传者【Fis****915】。
5、本文档所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用;网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽--等)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。
6、文档遇到问题,请及时私信或留言给本站上传会员【Fis****915】,需本站解决可联系【 微信客服】、【 QQ客服】,若有其他问题请点击或扫码反馈【 服务填表】;文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“【 版权申诉】”(推荐),意见反馈和侵权处理邮箱:1219186828@qq.com;也可以拔打客服电话:4008-655-100;投诉/维权电话:4009-655-100。