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SN∕T 5522.9-2023 食用淀粉植物源成分鉴别方法 实时荧光PCR法 第9部分:绿豆淀粉.pdf
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1、I C S6 7.1 8 0C C SX1 1中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T5 5 2 2.92 0 2 3 食用淀粉植物源成分鉴别方法实时荧光P C R法 第9部分:绿豆淀粉I d e n t i f i c a t i o n o f p l a n t d e r i v e d m a t e r i a l s i n e d i b l e s t a r c h e s r e a l-t i m e P C R m e t h o dP a r t 9:V i g n a r a d i a t e s t a r c h2 0 2 3-0 5-0 5发布2 0
2、 2 3-1 2-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布前 言 本文件按照G B/T 1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。本文件是S N/T 5 5 2 2 食用淀粉植物源成分鉴别方法 实时荧光P C R法 的第9部分。S N/T 5 5 2 2已经发布了以下部分:第1部分:红薯淀粉;第2部分:木薯淀粉;第3部分:马铃薯淀粉;第4部分:藕淀粉;第5部分:葛根淀粉;第6部分:山药淀粉;第7部分:玉米淀粉;第8部分:小麦淀粉;第9部分:绿豆淀粉;第1 0部分:豌豆淀粉。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文
3、件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国上海海关、中华人民共和国合肥海关、中国检验检疫科学研究院。本文件主要起草人:杨娟、徐之雯、杨捷琳、宋蓉蓉、宗凯、蒋原、邓婷婷、陈颖。S N/T5 5 2 2.92 0 2 引 言 淀粉掺假损害了消费者的利益,扰乱了市场,对淀粉应用产生很大负面影响。为此,有必要建立快速、特异性好、灵敏度高的食用淀粉植物源性成分的检测方法。实时荧光P C R检测方法以其方便、快速、准确等特点,从基因水平分析原料和产品的来源与特性,特异性强、灵敏度高,在食品种类鉴别、产地溯源等食品真伪鉴别研究中得到了广泛应用。该系列标准的制定及推广为保障食用淀粉的
4、质量,保护消费者知情权和选择权,维护正常的经济秩序等提供了技术支持。所建立的方法可应用于农业系统、质量技术监督局、食品加工生产企业等单位,具有巨大的经济和社会效益,将为我国检验技术的提高和社会进步做出积极的贡献。S N/T 5 5 2 2 食用淀粉植物源成分鉴别方法 实时荧光P C R法 包括以下部分:第1部分:红薯淀粉;第2部分:木薯淀粉;第3部分:马铃薯淀粉;第4部分:藕淀粉;第5部分:葛根淀粉;第6部分:山药淀粉;第7部分:玉米淀粉;第8部分:小麦淀粉;第9部分:绿豆淀粉;第1 0部分:豌豆淀粉。S N/T5 5 2 2.92 0 2 食用淀粉植物源成分鉴别方法实时荧光P C R法 第9
5、部分:绿豆淀粉1 范围本文件规定了食用淀粉及其制品中绿豆植物源成分的实时荧光P C R法鉴别方法。本文件适用于食用淀粉及其制品中绿豆成分的定性检测。本文件所规定方法的检出限(L O D)为1%(质量比)。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法G B/T 1 2 1 0 4 淀粉术语G B/T 2 7 4 0 32 0 0 8 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测3 术语和定义
6、G B/T 1 2 1 0 4界定的术语和定义适用于本文件。4 方法提要提取样品D NA,以绿豆D NA为阳性对照,以其它淀粉植物D NA为阴性对照,无菌水作为空白对照,使用绿豆特异性引物和探针进行实时荧光P C R扩增,观察实时荧光P C R的增幅现象判定是否存在绿豆成分。5 试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合G B/T 6 6 8 2中一级水的规格。所有试剂均用无D NA酶污染的容器分装。5.1 检测用引物和探针绿豆成分扩增引物和探针、内参照引物和探针详见表1。绿豆引物扩增的靶标序列参见附录A。1S N/T5 5 2 2.92 0 2 表1 绿豆成分鉴定用引
7、物和探针序列名称引物/探针序列(53)扩增片段长度靶基因内参照正向引物:T C T G C C C TA T C AA C T T T C GA T G G TA反向引物:AA T T T G C G C G C C T G C T G C C T T C C T T探针:F AM-C C G T T T C T C AG G C T C C C T C T C C G GAA T C GAA C C-TAMR A1 3 7 b p1 8 S r RNA绿豆正向引物:A T G C AGAAG TAAG GAAAAAG TAA T G T G T反向引物:T C AA TAA TAG C A
8、T GAG G C AAA C AAA探针:F AM-A C A C TA T C C T T G C G C T C A TA C TAG C T C C C C-TAMR A9 0 b pm g Q 0 6 2 F 注:F AM和TAMA R可以用其他等效荧光基团替代。5.2 三氯甲烷(氯仿)。5.3 异丙醇。5.4 C T A B提取缓冲液:2 0 g/L C T A B,1.4 m o l/L N a C l,0.1 m o l/L T r i s-H C l,0.0 2 m o l/L N a2E D T A,p H 8.0。5.5 C T A B沉淀液:5 g/L C TA B,4
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