小鼠肝移植.doc
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1、(完整版)小鼠肝移植For personal use only in study and research; not for commercial use蚈二袖套法制作小鼠原位肝移植模型的技术要点薆目前,肝移植被认为是治疗终末期肝病的有效手段,并在全世界广泛开展。但肝移植的开展仍然面临着各种各样的问题,如缺血再灌注损伤、脏器保护的防放和术后面临的排斥反应等。因此,建立稳定的肝移植动物模型以进行相关研究,具有机器重要的临床意义.蚄自1991年Qian等首次建立非动脉化的小鼠原位肝移植模型以来,该模型已经成为研究肝移植术后免疫学的主要动物模型,有进一步的研究发现,动脉化的小鼠肝移植模型术后肝功能恢
2、复的更好,更接近生理指标, 二套袖法合并肝动脉重建的肝移植模型特点在于除了肝上下腔静脉仍用缝合法外,门静脉和肝下下腔静脉应用套袖吻合,胆道及肝动脉用插管法完成吻合芃笔者在德国海德堡大学及美国 中心从事肝移植研究6年余,目前已经已经成功的建立了超过2000例小鼠原位肝移植模型,成功率达到98以上.现将笔者的一些体会总结如下。一、二、 螈术前的一些注意事项羆首先根据小鼠的大小选用合适的袖套管。如果袖套管太大,静脉壁很难向外翻;如果袖套管太小,静脉外翻虽然很容易,但是术后很容易形成动脉栓塞,导致受体死亡.笔者的经验是选取2328g的小鼠,所用袖套直径为2.1mm左右.另外,在前期制作套袖管时必须注意
3、以下几个方面:袖套管不要太长,Kamada提出是2mm左右,但笔者认为1。5mm更佳,因为如果袖套管过长,所需的静脉长度就要增加,这回增加手术难度;袖套管的外表面可以打磨或刻小赤,以增加外表面的摩擦力,这对外翻静脉有很大的帮助;由于胆道及肝动脉的插管,要一队尖锐,一端平钝,使用时,钝端插入供体侧,尖锐端插入受体侧,这样可降低手术难度,且不会损伤供肝;所用的操作都不允许用手直接接触肝脏。三、四、 莆供体手术肁小鼠麻醉成功后,固定在手术台上,腹部剃毛,取腹部正中十字切口入腹。先用阑尾钳将剑突提起,暴露上腹部,将小肠推向左侧,以显露肝门及下腔静脉。将肝脏与周围的组织游离。将直径0.61mm的导管插入
4、胆总管,并用80丝线固定,以备之后与受者的胆总管吻合。游离肝动脉,经门静脉以4灌注液灌洗肝脏,同时由右肾静脉水平以下的下腔静脉放血.灌洗完毕后,肝脏呈黄色.离断肝上下腔静脉,肝下下腔静脉、门静脉及肝动脉,此时肝脏已完全游离,将肝脏置于冷保存液中。整个过程要求在12min以内完成.袈笔者一般在游离肝脏前先由下腔静脉给予肝素钠注射液,这是因为在游离肝脏的过程中不可避免的会翻动肝脏,局部会形成微血栓,影响术后肝脏功能,导致小鼠死亡。先给予肝素钠注射液可以减少微小血栓的形成,只要在游离肝脏过程中操作仔细,并不会造成太多出血。莇供肝一定要冲洗干净:在食管与肝脏之间有一支交通血管,有些个体该血管很粗,应妥
5、善结扎,防止供肝冲洗不净或恢复血流时出血;左膈静脉及右肾上静脉也应结扎牢靠,不然回导致供肝冲洗不净,直接影响供肝质量;在经门静脉罐洗时,一定注意不要有空气进入门静脉,否则肝脏难以灌洗干净;在灌洗过程中一定要慢,压力不能过高,否则会损伤肝脏;另外,灌洗过程中可以轻轻调整灌洗的方向,以达到最佳灌洗效果。袄肝下下腔静脉在右肾静脉水平应切断,应尽量远离肝脏切断门静脉,以方便下一步的操作.肝上下腔静脉不可保留过长,否则术后因为呼吸的上下波动,易造成肝脏流出道不畅,引起肝淤血,造成小鼠死亡.一般以膈肌水平为佳。如果时间紧迫,可以连同膈肌一起剪下,后期再修整.另外,在游离肝脏时,尽量不要直接按压肝脏,引尽可
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